目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,...目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,每组3只,急性分离各组耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs),SGNs原代培养48 h后分别用5 mM SS、1 mM LiCl、5 mM SS联合1 mM LiCl处理1 h,对照组不予处理;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GABA_(A)Rsα2亚基、桥尾蛋白基因表达的改变;采用Western blot技术检测各组GABA_(A)Rsα2膜蛋白和总蛋白表达的改变、桥尾蛋白及其S270位点磷酸化的改变。结果RT-qPCR结果显示,各组GABA_(A)Rsα2亚基mRNA、桥尾蛋白mRNA与对照组比较均无明显变化(P>0.05),Western blot结果显示,SS处理组GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白(0.08±0.02)较对照组(0.18±0.04)表达显著下调(P<0.01),LiCl处理组(0.14±0.03)有效逆转SS诱导的GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白下调(SS组为0.08±0.02)(P<0.05),LiCL组膜蛋白、各组总蛋白与对照组比较无明显变化(P>0.05);SS处理组桥尾蛋白S270磷酸化(0.84±0.02)较对照组(0.35±0.14)显著增强(P<0.001)。LiCl处理组(0.66±0.10)有效逆转SS诱导的桥尾蛋白S270磷酸化增强(SS组为0.84±0.02,P<0.05),LiCl处理组桥尾蛋白磷酸化、各处理组桥尾蛋白与对照组比较无明显变化。结论桥尾蛋白S270位点磷酸化可增强参与SS诱导的SGNs GABA_(A)Rs内化。展开更多
文摘目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,每组3只,急性分离各组耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs),SGNs原代培养48 h后分别用5 mM SS、1 mM LiCl、5 mM SS联合1 mM LiCl处理1 h,对照组不予处理;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GABA_(A)Rsα2亚基、桥尾蛋白基因表达的改变;采用Western blot技术检测各组GABA_(A)Rsα2膜蛋白和总蛋白表达的改变、桥尾蛋白及其S270位点磷酸化的改变。结果RT-qPCR结果显示,各组GABA_(A)Rsα2亚基mRNA、桥尾蛋白mRNA与对照组比较均无明显变化(P>0.05),Western blot结果显示,SS处理组GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白(0.08±0.02)较对照组(0.18±0.04)表达显著下调(P<0.01),LiCl处理组(0.14±0.03)有效逆转SS诱导的GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白下调(SS组为0.08±0.02)(P<0.05),LiCL组膜蛋白、各组总蛋白与对照组比较无明显变化(P>0.05);SS处理组桥尾蛋白S270磷酸化(0.84±0.02)较对照组(0.35±0.14)显著增强(P<0.001)。LiCl处理组(0.66±0.10)有效逆转SS诱导的桥尾蛋白S270磷酸化增强(SS组为0.84±0.02,P<0.05),LiCl处理组桥尾蛋白磷酸化、各处理组桥尾蛋白与对照组比较无明显变化。结论桥尾蛋白S270位点磷酸化可增强参与SS诱导的SGNs GABA_(A)Rs内化。
