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TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰对小鼠心脏成纤维细胞活力和分化的影响 被引量：7
1
作者 金慧 谢中杰 +3 位作者 张丽娜 龚开政 张振刚 李如君 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期222-229,共8页
目的:探讨TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰(O-连接的N-乙酰葡萄糖胺修饰)对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞(MCFs)在缺氧/复氧(H/R)后活力和分化的影响及机制。方法:原代培养的MCFs缺氧6 h再恢复常氧24 h建立细胞H/R模型,通过感染O-... 目的:探讨TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰(O-连接的N-乙酰葡萄糖胺修饰)对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞(MCFs)在缺氧/复氧(H/R)后活力和分化的影响及机制。方法:原代培养的MCFs缺氧6 h再恢复常氧24 h建立细胞H/R模型,通过感染O-连接的N-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)重组腺病毒提高MCFs氧连糖基化水平,将MCFs随机分组为空载腺病毒预处理+常氧(Ad. Null+Ctrl)组、空载腺病毒预处理+H/R(Ad. Null+H/R)组、OGT腺病毒预处理+常氧(Ad. OGT+Ctrl)组和OGT腺病毒预处理+H/R(Ad. OGT+H/R)组。RT-qPCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18 mRNA水平;Western blot检测p-Smad3、Smad3、OGT和炎症介质蛋白水平;免疫共沉淀实验检测Smad3修饰状态及蛋白间相互结合;CCK-8法检测细胞活力;免疫荧光共聚焦显示Smad3亚细胞定位。结果:H/R致使MCFs氧连糖基化水平下降,过表达OGT显著缓解了H/R诱导的细胞氧连糖基化水平降低(P<0.05)。提高氧连糖基化水平抑制H/R诱导的MCFs活力和向肌成纤维细胞分化,减少I型胶原合成和炎症介质IL-1β/IL-18表达(P<0.05);TGF-β1信号轴胞内关键分子Smad3氧连糖基化水平升高,并且Smad3磷酸化及核转位受阻(P<0.05)。结论:氧连糖基化修饰竞争性抑制Smad3 Ser423/425磷酸化并使Smad3滞留于胞质,负向调控TGF-β1/Smad3信号轴,抑制H/R对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞功能变化的诱导。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 心肌纤维化 心脏成纤维细胞 TGF-β1/Smad3信号通路 O-连接的N-乙酰葡萄糖胺修饰
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O-GlcNAc修饰调控NLRP3炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响 被引量：3
2
作者 张丽娜 谢中杰 +2 位作者 金慧 张振刚 李如君 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2139-2146,共8页
目的:体外探讨O-连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺... 目的:体外探讨O-连接的N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及可能的机制。方法:对数生长期的H9c2大鼠心肌细胞感染O-GlcNAc转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)过表达腺病毒(Ad-OGT)以提高细胞内OGlcNAc修饰水平,通过缺氧6 h再恢复常氧12 h建立细胞H/R模型。将细胞随机分为空载腺病毒(Ad-Null)预处理常氧对照细胞组、Ad-Null预处理H/R细胞组、Ad-OGT预处理常氧对照细胞组和Ad-OGT预处理H/R细胞组。通过RT-qPCR检测炎症细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的mRNA水平;TUNEL染色检测细胞凋亡;Western blot测定NLRP3炎症小体组成蛋白[NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)和caspase-1]及其效应产物表达;蛋白质免疫共沉淀法检测NLRP3炎症小体组成蛋白相互作用及修饰状态。LPS诱导NLRP3炎症小体表达,再次验证OGlcNAc修饰的调节作用。结果:H/R导致细胞内O-GlcNAc修饰水平显著降低,过表达OGT可显著对抗H/R损伤造成的O-GlcNAc修饰水平下降(P<0.05)。与Ad-Null预处理H/R细胞组相比,Ad-OGT预处理H/R细胞组NLRP3炎症小体活化后效应产物IL-1β和IL-18 mRNA转录被抑制、相应蛋白表达水平降低、细胞凋亡现象减轻(P<0.05);虽然NLRP3炎症小体的3种组成蛋白(NLRP3、ASC和caspase-1)表达水平并无显著下调(P>0.05),但相互结合能力减弱(P<0.05),同时检测到NLRP3的O-GlcNAc修饰程度显著增强(P<0.05)。通过刺激物LPS诱导NLRP3炎症小体表达激活,再次验证了NLRP3的O-GlcNAc修饰状态对炎症小体组分相互结合的影响。结论:NLRP3发生OGlcNAc修饰后可通过阻碍NLRP3炎症小体的组装活化缓解H/R对体外培养H9c2大鼠心肌细胞的损伤。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 NLRP3炎症小体 O-连接的N-乙酰葡萄糖胺 细胞凋亡
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非离子型对比剂对冠状动脉造影患者肾功能的影响 被引量：1
3
作者 叶颖 方唯一 +4 位作者 仇兴标 陈晖 施鸿毓 宋洁 任诗佳 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1270-1274,共5页
目的观察患者使用非离子型对比剂进行冠状动脉造影检查前后肾功能的变化。方法收集2009年9月—2010年2月在上海交通大学附属胸科医院心内科使用非离子型对比剂行冠状动脉造影检查的556例(男性342例,女性214例)患者的资料。分别比较造影... 目的观察患者使用非离子型对比剂进行冠状动脉造影检查前后肾功能的变化。方法收集2009年9月—2010年2月在上海交通大学附属胸科医院心内科使用非离子型对比剂行冠状动脉造影检查的556例(男性342例,女性214例)患者的资料。分别比较造影前后血液和尿液肾功能指标的变化,如果血清肌酐(Scr)绝对值水平升高>44.2μmol/L或者较基础水平升高>25%,则定义为发生了对比剂肾病(CIN)。对CIN患者作进一步分析,筛选反映CIN的敏感指标。结果血液肾功能常规检查显示,除胱抑素C(Cys C)以外,造影术前后患者的Scr、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)和视黄醇结合蛋白(RBP)浓度比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);尿液肾功能指标检查显示,只有α1-微球蛋白(α1-MG)浓度在造影术前后有统计学意义(P<0.01)。共有39例(男性18例,女性21例)患者在造影术后发生了CIN,发病率为7.01%。其中尿α1-MG的变化最显著,增高(39.77±16.75)%。男性和女性CIN患者的内生肌酐清除率(Ccr)值均在正常范围,造影术前后比较差异无统计学意义(P>0.05);而造影术前后肾小球滤过率(eGFR)差异均有统计学意义[男性(118.88±38.03)mL.min-1.1.73 m-2vs(88.14±28.18)mL.min-1.1.73 m-2,女性(107.69±38.65)mL.min-1.1.73 m-2vs(77.40±30.71)mL.min-1.1.73 m-2](P<0.01)。CIN患者对比剂用量为(225.34±16.58)mL,高于无CIN患者的(201.56±13.27)mL,差异有统计学意义(P<0.01)。Logistic多元回归分析显示,与CIN发病相关的因素包括高血压、糖尿病、慢性肾功能不全和对比剂用量。结论 CIN患者在冠状动脉造影前后肾功能的变化均与注射非离子型对比剂有关;α1-MG是发生CIN的早期敏感指标。 展开更多
关键词 对比剂 对比剂肾病 冠心病 冠状动脉造影
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