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表面表达PD-L1纳米抗体的细菌外膜囊泡的生物学特性及其对PD-1/PD-L1信号通路的阻断作用: 1; 作者李智敏霍明歌 +5 位作者管龙雪顾凡林梁丹丹刘倬睿王国庆关新刚《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第5期1407-1414,共8页; 目的:制备表面表达程序性细胞死亡配体1(PD-L1)纳米抗体的细菌外膜囊泡(OMV),探讨其结构特性、细胞相容性、细胞内分布及其对程序性细胞死亡受体1(PD-1)/PD-L1信号轴的阻断效果。方法:构建pET28a-ClyA-PD-L1nb原核表达载体,转化至大肠杆... 展开更多; 关键词细菌外膜囊泡程序性细胞死亡受体1 程序性细胞死亡配体1 纳米抗体免疫检查点阻断; 在线阅读下载PDF 职称材料

免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立被引量：1: 2; 作者穆业腾郭冲 +5 位作者胡楠楠杨馥旭薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1341-1347,共7页; 目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别... 展开更多; 关键词 T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域绿色荧光蛋白慢病毒表达载体稳定转染单克隆细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用被引量：1: 3; 作者胡楠楠杨馥旭 +5 位作者穆业腾郭冲薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期94-100,共7页; 目的:制备担载奥沙利铂(OXA)的类弹性蛋白多肽(ELPs)水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。方法:利用大肠杆菌(E.coli)系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法(ITC)进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂... 展开更多; 关键词类弹性蛋白多肽水凝胶奥沙利铂结肠肿瘤药物递送; 在线阅读下载PDF 职称材料

肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性: 4; 作者杨馥旭胡楠楠 +5 位作者郭冲穆业腾薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1455-1461,共7页; 目的:构建肿瘤归巢肽(THPs)-近红外荧光蛋白(NIRFP)miRFP670-LyP1融合蛋白的原核表达载体,纯化融合蛋白,研究融合蛋白的近红外荧光特性。方法:采用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NotⅠ对pmiRFP670-N1质粒和pET-28a质粒进行双酶切,构建pET-miR... 展开更多; 关键词近红外荧光蛋白肿瘤归巢肽融合蛋白原核表达细胞内吞; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表面表达PD-L1纳米抗体的细菌外膜囊泡的生物学特性及其对PD-1/PD-L1信号通路的阻断作用: 1; 作者李智敏霍明歌管龙雪顾凡林梁丹丹刘倬睿王国庆关新刚; 机构北华大学医学技术学院临床检验系台州学院医学院基础医学系; 出处《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第5期1407-1414,共8页; 基金吉林省教育厅科研项目(JJKH20180370KJ) 浙江省科技厅自然科学基金探索一般项目(LY23C100001) 浙江省台州市科技局科技发展计划项目(22gya03)。; 文摘目的:制备表面表达程序性细胞死亡配体1(PD-L1)纳米抗体的细菌外膜囊泡(OMV),探讨其结构特性、细胞相容性、细胞内分布及其对程序性细胞死亡受体1(PD-1)/PD-L1信号轴的阻断效果。方法:构建pET28a-ClyA-PD-L1nb原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过超速离心法从转化PD-L1nb表达载体的BL21(DE3)单克隆菌落中分离OMV,利用组氨酸(His)标签进行蛋白纯化。采用透射电子显微镜和纳米粒径分析仪对OMV进行分析鉴定。将转化PD-L1nb表达载体的BL21(DE3)单克隆菌落所分离的OMV作为实验组,以未转化的BL21(DE3)单克隆菌落所分离的OMV作为对照组,采用Western blotting法检测2组OMV中ClyA-PDL1nb融合蛋白表达情况,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测OMV处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7、小鼠三阴性乳腺癌细胞4T1和人胚胎肾细胞HEK293T活性,应用荧光成像技术观察OMV的肿瘤细胞内吞情况,采用流式细胞术检测PBS组、OMV-PD-L1nb组和aPD-L1+OMV-PDL1nb组OMV与肿瘤细胞表面PD-L1的结合效果。结果:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),大肠杆菌诱导后在预计相对分子质量(约49000)附近出现明显加粗的蛋白条带,ClyA-PD-L1nb蛋白成功表达,纯化后泳道中无明显杂蛋白存在。利用超速离心法分离得到尺寸约120 nm的OMV-PD-L1nb,透射电子显微镜下呈现为尺寸均一的圆球形结构。Western blotting法,实验组OMV中检测到ClyA-PD-L1nb特异性条带。CCK-8法,经不同浓度OMV处理后,RAW 264.7细胞、4T1细胞和HEK293T细胞活性均接近100%。荧光成像,OMV-PD-L1nb被4T1细胞内吞后分散在细胞质中。与OMV-PD-L1nb组比较,aPD-L1+OMV-PD-L1nb组细胞中平均荧光强度明显降低(P<0.001)。结论:成功制备并分离了表面表达PD-L1nb的OMV即OMV-PD-L1nb,其在小鼠巨噬细胞、肿瘤细胞和人胚胎肾细胞上显示出良好的相容性,可被肿瘤细胞内吞并成功阻断PD-1/PD-L1信号通路。; 关键词细菌外膜囊泡程序性细胞死亡受体1 程序性细胞死亡配体1 纳米抗体免疫检查点阻断; Keywords Bacterial outer membrane vesicles Programmed cell death protein-1 Programmed cell death ligand 1 Nanobody Immune checkpoint blockade; 分类号 R737.95 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立被引量：1: 2; 作者穆业腾郭冲胡楠楠杨馥旭薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚; 机构北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室台州学院医学院基础医学系; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1341-1347,共7页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目(20180101213JC) 台州学院高层次人才科研启动项目(T20220101026)。; 文摘目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。结果:酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。结论:成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系,TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达。; 关键词 T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域绿色荧光蛋白慢病毒表达载体稳定转染单克隆细胞; Keywords T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain Green fluorescent protein Lentivirus expression vector Stable transfection Monoclonal cells; 分类号 R392.2 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用被引量：1: 3; 作者胡楠楠杨馥旭穆业腾郭冲薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚; 机构北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室台州学院医学院基础医学系; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期94-100,共7页; 基金吉林省科技厅科技发展计划自然科学基金项目(20180101213JC) 吉林省卫健委技术创新项目(2020J023) +1 种基金北华大学研究生创新计划项目(北华研创合字〔2021〕028)。; 文摘目的:制备担载奥沙利铂(OXA)的类弹性蛋白多肽(ELPs)水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。方法:利用大肠杆菌(E.coli)系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法(ITC)进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂四羟甲基氯化磷(THPC)混匀制备水凝胶,扫描电子显微镜(SEM)观察水凝胶的超微结构,CCK-8法检测不同浓度ELPs水凝胶处理后CT26细胞和小鼠成纤维NIH3T3细胞存活率,活/死细胞染色法观察30和40 g∙L-1 ELPs水凝胶作用48 h后CT26细胞存活情况。制备载OXA的ELPs水凝胶,检测其在不同pH值(6.5和7.4)缓冲液中的药物释放情况,CCK-8法检测加入载不同浓度(0.25、1.00、4.00、16.00和64.00 mg∙L-1)OXA的ELPs水凝胶浸泡液后各组CT26细胞存活率和处理不同时间各组CT26细胞存活率。结果:凝胶电泳分析,E.coli诱导后在预计相对分子质量38000附近出现明显加粗的蛋白条带,ITC纯化后泳道中无明显杂蛋白存在。ELPs蛋白溶液中加入THPC后由透明液体状态转变为不透明的白色水凝胶,SEM观察显示出排列整齐的孔隙和三维结构;CCK-8法检测,经不同浓度ELPs蛋白处理后CT26细胞和NIH3T3细胞存活率仍接近100%;活/死细胞染色,ELPs水凝胶处理后的CT26细胞在荧光显微镜下呈现明亮的绿色荧光。载OXA的ELPs水凝胶能在体外持续释放OXA,在pH值6.5条件下OXA的释放速度较pH值7.4条件下稍快;CCK-8法检测,载不同浓度OXA的ELPs水凝胶浸泡液呈剂量依赖性抑制CT26细胞增殖,且随孵育时间的延长CT26细胞存活率逐渐降低。结论:载OXA的ELPs水凝胶具有持续释放OXA的特性,能够高效且持续地杀伤小鼠结肠癌CT26细胞,可作为一种安全有效的药物递送载体用于抗肿瘤研究。; 关键词类弹性蛋白多肽水凝胶奥沙利铂结肠肿瘤药物递送; Keywords Elastin-like polypeptides Hydrogels Oxaliplatin Colon neoplasms Drug delivery; 分类号 R735.35 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性: 4; 作者杨馥旭胡楠楠郭冲穆业腾薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚; 机构北华大学医学技术学院医药生物工程重点实验室台州学院医学院基础医学系; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1455-1461,共7页; 基金吉林省科技厅科技发展计划自然科学基金项目(20180101213JC) 吉林省卫健委卫生与健康技术创新项目(2020J023) +1 种基金台州学院高层次人才科研启动项目(T20220101026)。; 文摘目的:构建肿瘤归巢肽(THPs)-近红外荧光蛋白(NIRFP)miRFP670-LyP1融合蛋白的原核表达载体,纯化融合蛋白,研究融合蛋白的近红外荧光特性。方法:采用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NotⅠ对pmiRFP670-N1质粒和pET-28a质粒进行双酶切,构建pET-miRFP670原核表达载体,通过点突变引入LyP-1的DNA序列,构建重组表达载体pET-miRFP670-LyP1;将测序正确的重组表达载体转化至大肠杆菌BL21细胞中,SDS-PAGE电泳法检测不同温度(16℃和37℃)、不同异丙基硫代半乳糖苷浓度(0.1、0.5和1.0 mmol·L^(-1))诱导下融合蛋白原核表达量;采用Ni-NTA树脂亲和纯化融合蛋白,检测miRFP670-LyP1蛋白原核表达量;采用荧光显微镜观察乳腺癌4T1细胞中miRFP670-LyP1融合蛋白的细胞内吞形态表现。结果:检测到长度约为5343和973 bp的DNA条带,与pET-28a载体及miRFP670基因片段大小相符。DNA测序,LyP1序列成功插入至pETmiRFP670表达载体中。在16℃时miRFP670-LyP1融合蛋白的可溶性蛋白表达量较37℃时更高。采用Ni-NTA树脂纯化得到了高纯度的miRFP670-LyP1融合蛋白。荧光成像,miRFP670-LyP1融合蛋白可被乳腺癌4T1细胞高效内吞。结论:成功构建了pET-miRFP670-LyP1原核表达载体,融合蛋白在低温(16℃)较常温(37℃)诱导的可溶性蛋白表达量更高,亲和层析得到了高纯度的融合蛋白,融合蛋白被乳腺癌4T1细胞高效内吞并显示出近红外荧光。; 关键词近红外荧光蛋白肿瘤归巢肽融合蛋白原核表达细胞内吞; Keywords Near-infrared fluorescent protein Tumor homing peptide Fusion protein Prokaryotic expression Endocytosis; 分类号 R394.3 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	表面表达PD-L1纳米抗体的细菌外膜囊泡的生物学特性及其对PD-1/PD-L1信号通路的阻断作用	李智敏霍明歌管龙雪顾凡林梁丹丹刘倬睿王国庆关新刚	《吉林大学学报(医学版)》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立	穆业腾郭冲胡楠楠杨馥旭薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用	胡楠楠杨馥旭穆业腾郭冲薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2023	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性	杨馥旭胡楠楠郭冲穆业腾薛晗范宇鑫郭峰霖关新刚	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料