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题名环磷酸腺苷生产酵母菌株不同阶段RNA的提取改进
被引量：1
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作者
李佳蔓
章小毛
郭敬涵
孙思凡
贾玉蝶
邹少兰
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机构
天津大学化工学院
系统生物工程教育部重点实验室
发酵技术国家工程研究中心(天津)
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出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第24期1-8,共8页
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基金
国家自然科学基金(31470208)
国家高技术研究发展计划(863计划,2012AA02A701)
天津市科委基金(18YFZCNC01240)。
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文摘
考察了环磷酸腺苷(cyclic adenosine monphosphate,cAMP)生产酵母菌株G2在YPD培养基中不同生长阶段的总RNA提取效果,并进行了初步改进研究。选择16 h对数生长期、36 h二次生长期和60 h稳定期细胞,分别用试剂盒提取,RNA得率依次为1010.6、171.5和91.3 ng/A 600。选择高、低丰度表达基因ACT 1和CYR 1进行实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR),同时判断DNA污染情况;琼脂糖电泳和RNA完整值(RNA integrity number,RIN)测定判断完整性。结果显示,36 h和60 h RNA提取物都存在DNA污染,仅16 h样品能满足RNA测序要求。进一步对比了5种破壁方法在破碎细胞及相应RNA提取上的效果,添加珠打破壁步骤破碎细胞效果最好,显示对16 h细胞RNA提取效果没有明显变化,但36 h和60 h细胞的RNA得率分别提高至979.6和785.6 ng/A 600,为前述值的5.71倍和8.60倍,且纯度能满足qRT-PCR要求,36 h样品能满足RNA测序要求。该研究有助于推动建立酵母生长全阶段RNA分析技术和深化cAMP相关途径调控机制的认识。
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关键词
酵母
生长阶段
RNA提取
珠打
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Keywords
yeast
growth phase
RNA extraction
bead beating
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分类号
TQ926
[轻工技术与工程—发酵工程]
Q503
[生物学—生物化学]
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