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人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化 被引量:8
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作者 石松林 李祺福 +3 位作者 刘庆榕 许东辉 唐剑 梁盈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期180-187,共8页
选择性抽提经人参皂苷Rg1组合(RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成... 选择性抽提经人参皂苷Rg1组合(RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在RCT处理后细胞核基质中表达下调;蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化;免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化;激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系,并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白,其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化,并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系,为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向. 展开更多
关键词 PROHIBITIN 核基质 人成骨肉瘤MG-63细胞 细胞分化 人参皂苷RG1
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人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响 被引量:4
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作者 石松林 李祺福 +3 位作者 王国红 马宗源 史建陆 林昌健 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期392-398,共7页
为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超... 为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用. 展开更多
关键词 人参皂甙RG1 诱导分化 人成骨肉瘤MG-63细胞 细胞形态 细胞超微结构 细胞终末分化
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苯甲酸及其衍生物对菜青虫多酚氧化酶抑制作用 被引量:4
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作者 柯莉娜 薛超彬 +2 位作者 王勤 罗万春 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期856-860,共5页
以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究苯甲酸及其衍生物:p 羟基苯甲酸、p 氰基苯甲酸、p 环已基苯甲酸等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为14.2、11.3、16.1和2.1mmol/L.研究了抑制剂作用的动... 以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究苯甲酸及其衍生物:p 羟基苯甲酸、p 氰基苯甲酸、p 环已基苯甲酸等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为14.2、11.3、16.1和2.1mmol/L.研究了抑制剂作用的动力学,结果表明:苯甲酸和p 环已基苯甲酸对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数分别为14.25和2.21mmol/L;p 羟基苯甲酸对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI为7.21mmol/L;p 氰基苯甲酸对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为14.31和27.34mmol/L. 展开更多
关键词 抑制作用 羟基苯甲酸 表现 氰基 衍生物 L-DOPA L-多巴 酶催化 分离提取 氧化
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银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用比较 被引量:7
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作者 韩鹏 邱凌 +2 位作者 黄浩 陈祥仁 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期116-119,共4页
报道银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响.结果表明:银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.测定导致酶活力下降50%的银杏叶和银杏外种皮提取物含量(IC50)分别为:6.59mg/mL和2.73mg/mL.对酪氨酸... 报道银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响.结果表明:银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.测定导致酶活力下降50%的银杏叶和银杏外种皮提取物含量(IC50)分别为:6.59mg/mL和2.73mg/mL.对酪氨酸酶的抑制作用均表现为可逆抑制,抑制类型均为混合型.分别测定银杏叶和外种皮提取物对游离酶抑制常数(KI)和酶底物络合物抑制常数(KIS),并加以比较. 展开更多
关键词 银杏外种皮 乙醇提取物 抑制作用 酪氨酸酶 银杏叶 抑制常数 酶活力 络合物 游离酶 混合型 测定
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产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响 被引量:7
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作者 谢晓兰 王勤 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期24-27,共4页
以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp β D GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为:NAG>gla>glu>suc>fru.研究抑制作用动力学,结果表明:NAG对酶的... 以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp β D GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为:NAG>gla>glu>suc>fru.研究抑制作用动力学,结果表明:NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58mol/L. 展开更多
关键词 南美白对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 产物类似物 抑制作用 养殖
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两种熊果甙同系物的合成及其对酪氨酸酶的影响 被引量:7
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作者 郭华云 宋康康 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期1-4,共4页
熊果甙作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.以葡萄糖为原料合成了两种熊果甙同系物:1 对异丙基苯基葡萄糖甙和1 对甲氧基苯基葡萄糖甙.并对其结构进行红外光谱分析.以熊果甙及上述其两种同系物为效应物... 熊果甙作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.以葡萄糖为原料合成了两种熊果甙同系物:1 对异丙基苯基葡萄糖甙和1 对甲氧基苯基葡萄糖甙.并对其结构进行红外光谱分析.以熊果甙及上述其两种同系物为效应物,研究对酪氨酸酶酶活力的影响,以探讨抑制剂分子结构与其对酪氨酸酶抑制效果的关系.结果表明,这3种效应物对酪氨酸酶活性的抑制效果为:熊果甙>1 对异丙基苯基葡萄糖甙>1 对甲氧基苯基葡萄糖甙. 展开更多
关键词 酪氨酸酶 熊果甙 l-对异丙基苯基葡萄糖甙 l-对甲氧基苯基葡萄糖甙 抑制作用 化妆品添加剂
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乙醇对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响 被引量:4
7
作者 王悦 谢晓兰 +1 位作者 王勤 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期28-31,共4页
以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究乙醇对该酶的活力与构象影响.结果表明,浓度低于22%(体积比)的乙醇对该酶活力有明显的激活效应;乙醇浓度为8%时,达到最大激活效应,酶活力为纯酶的180%.动力学研究表明,在30... 以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究乙醇对该酶的活力与构象影响.结果表明,浓度低于22%(体积比)的乙醇对该酶活力有明显的激活效应;乙醇浓度为8%时,达到最大激活效应,酶活力为纯酶的180%.动力学研究表明,在30%浓度范围内,乙醇对酶活性的激活及抑制作用均是可逆的.乙醇低浓度下,Km值与Vmax值随乙醇浓度增大而增大;随着乙醇浓度的进一步升高,Km值保持不变,Vmax值则出现下降.紫外光谱与荧光光谱分析表明,低浓度乙醇对N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶的构象产生轻微的影响,而高浓度乙醇则使酶的整体构象趋于松散.由此可以推断,乙醇对该酶的活力影响是微扰酶活性中心产生激活效应与引发整体变构失活效应的共同作用结果. 展开更多
关键词 乙醇 南美白对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 活力 构象 养殖
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大孔吸附树脂浓缩火龙果色素的研究 被引量:17
8
作者 龚敏 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期44-46,共3页
探讨了吸附和洗脱火龙果色素的方法和条件.该色素在535nm处有最大吸收峰.S 8型大孔吸附树脂对火龙果色素具有较好的吸附能力.乙醇浓度对树脂上色素的解吸有影响,当浓度为40%时解吸效果最好.考察了不同进样速度下树脂柱的泄漏和不同的酸... 探讨了吸附和洗脱火龙果色素的方法和条件.该色素在535nm处有最大吸收峰.S 8型大孔吸附树脂对火龙果色素具有较好的吸附能力.乙醇浓度对树脂上色素的解吸有影响,当浓度为40%时解吸效果最好.考察了不同进样速度下树脂柱的泄漏和不同的酸浓度对洗脱峰的影响,结果选择1.5mL/min的进样速度及0.2%HCl 40%乙醇溶液为洗脱剂.经吸附-洗脱循环,色素液浓缩17倍以上,回收率达93.4%,且色素浓缩液具有较好的稳定性. 展开更多
关键词 大孔吸附树脂 浓缩 色素 火龙果 提取工艺
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海洋放线菌胞外多糖发酵工艺及其条件研究 被引量:4
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作者 蔡慧农 郭彩华 +2 位作者 陈锦芳 黄耀坚 苏文金 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期75-80,共6页
以具有明显海洋特性的、产胞外免疫活性多糖的链霉菌2305菌株作为发酵菌种,对其胞外多糖的发酵工艺及其条件进行了研究,考察了不同碳源、氮源、水质、培养基初始pH值、发酵温度、通气量等因素对发酵菌种的生物量及胞外多糖产量等的影响... 以具有明显海洋特性的、产胞外免疫活性多糖的链霉菌2305菌株作为发酵菌种,对其胞外多糖的发酵工艺及其条件进行了研究,考察了不同碳源、氮源、水质、培养基初始pH值、发酵温度、通气量等因素对发酵菌种的生物量及胞外多糖产量等的影响,建立和优化了胞外多糖摇瓶发酵培养基配方、发酵工艺及发酵条件,胞外多糖产量达到4.58g/L,转化率达到6.90%。研究了发酵过程中菌体生物量、底物糖残余量、pH值、产物多糖积累量等的动态变化,分析讨论了2305菌株胞外多糖发酵的动力学类型。 展开更多
关键词 海洋放线菌 胞外多糖 发酵工艺 发酵条件
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仙蜜果花中酪氨酸酶抑制剂提取的探讨 被引量:7
10
作者 邱凌 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期5-7,共3页
仙蜜果属仙人掌科植物,可用作水果、蔬菜、花卉等,具有很高的经济效益和市场价值.本文分析比较了仙蜜果花不同部位(花瓣、花苞、花芯)以及不同提取方式对酪氨酸酶活力的影响,从而对仙蜜果中提取酪氨酸酶抑制剂的可行性进行探讨.经过比较... 仙蜜果属仙人掌科植物,可用作水果、蔬菜、花卉等,具有很高的经济效益和市场价值.本文分析比较了仙蜜果花不同部位(花瓣、花苞、花芯)以及不同提取方式对酪氨酸酶活力的影响,从而对仙蜜果中提取酪氨酸酶抑制剂的可行性进行探讨.经过比较,发现超声波萃取法提取酪氨酸酶抑制剂优于传统热回流法,醇提法优于水提法,仙蜜果花中花苞部位对酪氨酸酶抑制效果最好,经过石油醚萃取可进一步提纯酪氨酸酶的抑制剂. 展开更多
关键词 仙蜜果 酪氨酸酶 抑制剂 提取方法 纯化
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蝾螺β-葡萄糖苷酶性质的初步研究 被引量:3
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作者 石艳 吴谋胜 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期32-35,共4页
以海洋蝾螺(TurboPetholatusLinnaeus)内脏为原料,经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵沉淀初步抽提,再经DEAE cellulose(DE 32)、SephadexG 200等柱层析纯化,获得较纯的β 葡萄糖苷酶.本文对β 葡萄糖苷酶的基本性质进行初步研究,结果表明:β ... 以海洋蝾螺(TurboPetholatusLinnaeus)内脏为原料,经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵沉淀初步抽提,再经DEAE cellulose(DE 32)、SephadexG 200等柱层析纯化,获得较纯的β 葡萄糖苷酶.本文对β 葡萄糖苷酶的基本性质进行初步研究,结果表明:β 葡萄糖苷酶催化底物pNP G水解的最适pH及最适温度分别为pH5.5和45℃.β 葡萄糖苷酶在pH为4.5~6.5之间稳定.温度30℃以上则逐渐失活.其反应Km为0.076mmol/L(37℃).活化能Ea为15.4kJ/mol.金属离子对酶的作用表明,Cu2+,Hg2+,Pb2+有强烈的抑制作用,Fe3+,Cd2+,Zn2+浓度小于1.0mmol/L时,抑制较弱,但在浓度大于1.0mmol/L时,抑制明显;Mn2+,Ca2+在低浓度下对酶活力无明显影响,但在高浓度条件下有较强抑制作用,Mg2+略有激活效应. 展开更多
关键词 蝾螺 Β-葡萄糖苷酶 腹足纲 活力 纤维素酶 金属离子
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有机溶剂对菜青虫多酚氧化酶活力的影响 被引量:1
12
作者 王勤 柯莉娜 +2 位作者 薛超彬 罗万春 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B08期36-39,共4页
以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究有机溶剂乙醇、正丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为12.4、6.4、24.2、15.5和17.0%.抑制剂作用的动力学研究结果表明:乙... 以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究有机溶剂乙醇、正丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为12.4、6.4、24.2、15.5和17.0%.抑制剂作用的动力学研究结果表明:乙醇、乙二醇和丙三醇对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数KI分别为12.05、23.50和17.53mmol/L;正丙醇和丙二醇对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI分别为4.18和12.79mmol/L,KIS分别为19.45和22.41mmol/L. 展开更多
关键词 有机溶剂 多酚氧化酶 活力 菜青虫五龄虫 抑制作用 蔬菜
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H5N1亚型禽流感病毒M基因的克隆与分子进化分析 被引量:1
13
作者 张国广 李东霄 +2 位作者 张辉煌 陈元婷 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第A02期16-20,共5页
以一株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增M基因全长,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,测序结果表明所克隆的982个核苷酸的片段包含了M1和M2基因的完整阅读框架,通过软件推导M1和M2基因分别编码252和97个氨基酸,将M全长... 以一株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增M基因全长,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,测序结果表明所克隆的982个核苷酸的片段包含了M1和M2基因的完整阅读框架,通过软件推导M1和M2基因分别编码252和97个氨基酸,将M全长序列与Genbank收录的10株H5N1亚型流感病毒M基因序列进行比较,病毒株之间M基因核苷酸序列同源性为92.3%~99.3%,编码的两个蛋白M1和M2氨基酸序列间同源性分别为为96.0%-98.8%和92.9%~99%,分子进化分析揭示了病毒株间的亲源关系. 展开更多
关键词 禽流感病毒 RT-PCR M基因 分子进化分析
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展示M2e表位的颗粒疫苗制备及其免疫原性分析
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作者 张国广 李东霄 +2 位作者 张辉煌 董美 陈亮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期772-777,共6页
疫苗接种是控制禽流感发生的主要措施之一,利用病毒保守的M2蛋白开发具有交叉免疫保护力的基因工程亚单位疫苗。将M2蛋白的膜外区(M2e表位)与HBcAg采用重叠延伸PCR技术构建融合基因M2eHBc+,然后将融合基因进行原核表达并检测了表达产物... 疫苗接种是控制禽流感发生的主要措施之一,利用病毒保守的M2蛋白开发具有交叉免疫保护力的基因工程亚单位疫苗。将M2蛋白的膜外区(M2e表位)与HBcAg采用重叠延伸PCR技术构建融合基因M2eHBc+,然后将融合基因进行原核表达并检测了表达产物的动物免疫效果。结果表明,融合基因M2eHBc+能在原核系统中高效表达,表达蛋白能够被M2抗体识别,具有良好的抗原性,纯化出的重组蛋白可以自主包装成病毒样颗粒结构,能诱导小鼠产生M2e特异性抗体。M2e表位在重组蛋白颗粒中得到有效展示,为开发具有交叉保护力的禽流感亚单位疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 M2e表位 乙肝核心抗原基因 免疫原性
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利用高保真酶扩增特性调整基因读码框的方法
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作者 张国广 陈亮 +1 位作者 吴亦亮 曾雅明 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第3期54-57,共4页
在基因工程研究中,经常要涉及到对目的基因读码框进行调整的研究。本文报道了利用高保真DNA聚合酶扩增DNA后产生平末端的特性,及限制性内切酶对一重组的原核表达载体pET28a-HA进行读码框调整的研究,测序结果显示读码框按照预期设计正确... 在基因工程研究中,经常要涉及到对目的基因读码框进行调整的研究。本文报道了利用高保真DNA聚合酶扩增DNA后产生平末端的特性,及限制性内切酶对一重组的原核表达载体pET28a-HA进行读码框调整的研究,测序结果显示读码框按照预期设计正确调整,表明高保真DNA聚合酶可以用于DNA 3'凹陷端的补平,在DNA 3'凹陷端平滑化时多了一个有效的选择。 展开更多
关键词 高保真DNA聚合酶 DNA粘端补平 基因读码框调整
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胸腺素α原作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的初步研究 被引量:1
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作者 高吉青 刘升发 +7 位作者 韩伟 张亭 吴汉洲 王世媛 杨彩霞 洪凌仙 章军 周克夫 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期552-555,共4页
目的:研究胸腺素α原(Prothymosinα,ProTα)作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的作用。方法:提取P.yoelii-17XNL全蛋白作为抗原,用胸腺素α原作为免疫佐剂,免疫小鼠。具体方案为:昆明小鼠分为4组,每组6只,A组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白+ProT... 目的:研究胸腺素α原(Prothymosinα,ProTα)作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的作用。方法:提取P.yoelii-17XNL全蛋白作为抗原,用胸腺素α原作为免疫佐剂,免疫小鼠。具体方案为:昆明小鼠分为4组,每组6只,A组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白+ProTα;B组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白;C组只注射ProTα;D组为空白对照,以相同体积的生理盐水代替。免疫结束后感染致死的P.yoelii-17XL,1×107个虫/只小鼠。结果:感染后的前10天A组小鼠疟原虫血症平均值要低于其他三组,且最终有3只小鼠存活下来,存活率50%,C组有一只小鼠存活,B、D组小鼠全部死亡。结论:用P.yoelii-17XNL全蛋白做抗原,用ProTα作为佐剂,比单独用P.yoelii-17XNL全蛋白对小鼠有更好的免疫保护作用,提示了ProTα可以成为一种有潜力的蛋白疫苗。 展开更多
关键词 约氏疟原虫 疫苗 胸腺素Α原 免疫佐剂
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金鱼生长素Ⅰ基因的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 盖永锋 张国广 +1 位作者 陈元婷 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第A02期21-25,共5页
鱼生长激素(Fish growth hormone,fGH)是鱼类脑垂体中分泌的促进生长的单一亚基的蛋白激素.它参与鱼的生长代谢,能够加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能,具有增强食欲、提高饲料转化率的作用.用引入酶切位点BamHⅠ和NotⅠ的引物,以质粒... 鱼生长激素(Fish growth hormone,fGH)是鱼类脑垂体中分泌的促进生长的单一亚基的蛋白激素.它参与鱼的生长代谢,能够加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能,具有增强食欲、提高饲料转化率的作用.用引入酶切位点BamHⅠ和NotⅠ的引物,以质粒pBluescript SK-gfGHⅠ为模板,PCR扩增获得了gfGHⅠ编码区序列,分别定向插入原核表达载体pET-28a中,构建了原核表达载体pET28a-gfGHⅠ,pET28a-gfGHⅠ转化大肠杆菌BL21(DE3),在1.0 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导下,表达出融合蛋白(His)6 tag-gfGHⅠ,该蛋白分子量大约为26 ku;经MALDI-TOF-MS以及抗HIS抗体的Western blotting鉴定,该融合蛋白即为表达的目的蛋白;经超声破碎鉴定该蛋白为包涵体形式存在,用连续超声破碎的方法,回收该蛋白纯度可达85.1%,免疫小鼠,间接ELISA法检测抗体效价为1∶1 600.该抗体的获得为gf-GHⅠ基因在酵母和水稻中的异源表达及功能鉴定奠定了基础. 展开更多
关键词 gfGHⅠ基因 原核表达 抗体制备
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