胃癌细胞SGC-7901双向电泳系统的建立及优化 被引量：8

1

作者 贺量 冷波 +1 位作者 康劲翮 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期149-151,共3页

文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应,具有良好的药物开发前景.双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台.我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择... 文蛤抗癌活性多肽对多种癌细胞有抑制效应,具有良好的药物开发前景.双向电泳技术的进步为药物的开发提供了理想的技术平台.我们通过对胃癌细胞SGC-7901总蛋白双向电泳技术的建立以及初步优化对一些环节如样品处理的方法、上样量的选择、电泳参数的设置、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了优化得到了分辨率较好的胃癌细胞的蛋白图谱,为进一步的文蛤抗癌多肽抑制胃癌细胞作用的蛋白组学研究提供实验工作的基础. 展开更多

关键词 胃癌 双向电泳 条件优化

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文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

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作者 贺量 范成成 +5 位作者 康劲翮 张剑 冷波 石艳 李文岗 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第A02期83-86,共4页

为了研究文蛤抗癌多肽对肝癌细胞抑制作用的蛋白表达差异,寻找并鉴定差异蛋白质,探讨多肽抑制肝癌细胞的作用机理,本文通过双向电泳、考马斯亮蓝染色、M elan ie 4双向软件分析、质谱技术(MALD I-TOF-MS)和数据库检索分析多肽作用SMMC-7... 为了研究文蛤抗癌多肽对肝癌细胞抑制作用的蛋白表达差异,寻找并鉴定差异蛋白质,探讨多肽抑制肝癌细胞的作用机理,本文通过双向电泳、考马斯亮蓝染色、M elan ie 4双向软件分析、质谱技术(MALD I-TOF-MS)和数据库检索分析多肽作用SMMC-7721后的差异蛋白质.利用差异蛋白质组方法分析了抗癌多肽对肝癌细胞SMMC-7721抑制后的蛋白变化,找到差异点并进行了质谱鉴定(MALD I-TOF-MS).结果表明,通过对差异蛋白功能的分析,推测抗癌多肽可能引起了肝癌细胞的凋亡,为进一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础. 展开更多

关键词 肝癌 蛋白质组 质谱 文蛤 SMMC-7721

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熊果甙作为化妆品添加剂对酪氨酸酶抑制作用 被引量：64

3

作者 宋康康 邱凌 +1 位作者 黄璜 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期791-794,共4页

熊果甙(Arbutin)作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.本文研究了熊果甙对酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力的抑制效应.结果表明,熊果甙对酪氨酸酶活性的抑制作用表现为可逆抑制效应.熊果甙对酪氨酸酶的单... 熊果甙(Arbutin)作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.本文研究了熊果甙对酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力的抑制效应.结果表明,熊果甙对酪氨酸酶活性的抑制作用表现为可逆抑制效应.熊果甙对酪氨酸酶的单酚酶的效应主要表现于迟滞时间有明显的延长,但对稳态酶活力的影响不显著.160mmol/L熊果甙使得单酚酶的迟滞时间从82s延长到430s,增大4.24倍,稳态酶活力仅下降16%.熊果甙对二酚酶的抑制作用显示浓度关系,测定导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为5.30mmol/L,其抑制作用为竞争性类型,抑制常数KI为2.98mmol/L.本文通过研究熊果甙对酪氨酸酶的抑制作用机理,阐明了熊果甙作为化妆品添加剂的增白作用机理. 展开更多

关键词 酪氨酸酶 熊果甙 抑制动力学 化妆品 添加剂 增白作用

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菜青虫不同虫态及虫龄的多酚氧化酶性质比较 被引量：25

4

作者 薛超彬 陈清西 +2 位作者 王勤 柯莉娜 罗万春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期305-309,共5页

初步比较了菜青虫Pierisrapae (L .)不同虫态及虫龄的多酚氧化酶 (polyphenoloxidase)的性质。结果表明 ,不同虫态及虫龄的多酚氧化酶活力有很大的不同 ,其中以 5龄幼虫酶活力最高 ,蛹酶活力最低。酶活力大小依次为 :5龄幼虫 >预蛹 &... 初步比较了菜青虫Pierisrapae (L .)不同虫态及虫龄的多酚氧化酶 (polyphenoloxidase)的性质。结果表明 ,不同虫态及虫龄的多酚氧化酶活力有很大的不同 ,其中以 5龄幼虫酶活力最高 ,蛹酶活力最低。酶活力大小依次为 :5龄幼虫 >预蛹 >4龄幼虫 >3龄幼虫 >蛹。以邻苯二酚为底物 ,研究了pH对多酚氧化酶活力的影响 ,结果表明酶催化底物氧化均有一个最适pH区域 ,不同虫态及虫龄的多酚氧化酶最适pH基本相同 ,其值为 7 0± 0 2。不同虫态及虫龄的多酚氧化酶催化底物氧化的最适温度有很大的差异。 3龄、4龄、5龄幼虫、预蛹和蛹的多酚氧化酶活力的最适温度分别为 36 0± 0 5℃、38 5± 1 0℃、4 3 0± 1 0℃、4 5 5± 1 0℃和 5 0 0± 1 5℃ ,说明蛹期的多酚氧化酶活力的最适温度较高。进一步比较催化底物氧化反应的活化能 ,测得 3龄、4龄、5龄幼虫、预蛹和蛹的多酚氧化酶活化能分别为 :4 3 10± 0 2 8、36 5 0± 0 2 7、2 5 79± 0 32、30 10± 0 2 1和 5 8 88± 0 39kJ mol。通过测定不同虫态及虫龄的多酚氧化酶催化邻苯二酚和L_多巴氧化反应的动力学特征参数 ,比较了不同虫期的酶对底物的亲和力。 展开更多

关键词 菜青虫 多酚氧化酶 酶活力 动力学性质

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铜铁试剂对菜青虫多酚氧化酶的抑制作用 被引量：21

5

作者 薛超彬 王勤 +2 位作者 柯莉娜 陈清西 罗万春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期290-294,共5页

以菜青虫 Pieris rapae (L.) 为试材, 冰浴匀浆, 4℃下 6 403 ×g 离心, 取上清液, 经 35%饱和度 (NH4)2SO4 沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤柱层析等分离步骤, 获得部分纯化的菜青虫多酚氧化酶制剂。研究不同浓度铜离子及铜铁试剂对... 以菜青虫 Pieris rapae (L.) 为试材, 冰浴匀浆, 4℃下 6 403 ×g 离心, 取上清液, 经 35%饱和度 (NH4)2SO4 沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤柱层析等分离步骤, 获得部分纯化的菜青虫多酚氧化酶制剂。研究不同浓度铜离子及铜铁试剂对该酶的影响, 结果表明: Cu2+在0~0.100 mmol/L范围内对酶活力表现激活作用; 浓度大于0.125 mmol/L时表现抑制作用, 其IC50为0.651±0.022 mmol/L; 铜铁试剂对该酶抑制作用的IC50为0.100±0.012 mmol/L。抑制动力学研究结果表明: 铜铁试剂对该酶表现为可逆抑制效应, 为竞争性抑制类型, 其抑制常数Ki 为0.076±0.013 mmol/L。 展开更多

关键词 菜青虫 多酚氧化酶 铜离子 铜铁试剂 抑制作用

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僧帽牡蛎碱性磷酸酶性质的研究 被引量：14

6

作者 陈巧 陈清西 +1 位作者 林建城 廖金花 《台湾海峡》 CAS CSCD 2003年第4期475-481,共7页

从僧帽牡蛎分离纯化出一种碱性磷酸酶,采用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析法测得该酶分子量为1.57×10~5.以对硝基苯磷酸为底物,该酶的最适温度为43℃,最适pH值为10.0.在37℃和pH值为10.0的条件下,酶催化反应的米氏常数(K_m)为9.68&#... 从僧帽牡蛎分离纯化出一种碱性磷酸酶,采用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析法测得该酶分子量为1.57×10~5.以对硝基苯磷酸为底物,该酶的最适温度为43℃,最适pH值为10.0.在37℃和pH值为10.0的条件下,酶催化反应的米氏常数(K_m)为9.68×10^(-4)mol/dm^3,活化能(E_a)为45.85kJ/mol,温度系数(Q_(10))为1.80(30～40℃).对该酶的热稳定性研究表明:其在45℃以下较为稳定,50℃以上明显失活,并测定了该酶的热失活速度常数.金属离子对酶活力的效应研究结果表明:Mg^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Co^(2+)对酶有激活作用,Ag^+、Hg^(2+)、Zn^(2+)表现为抑制作用,Cd^(2+)几乎没有影响.Mg^(2+)是较有效的激活剂,表现为部分非竞争性效应,激活常数(K_a)为2.48×10^(-4)mol/dm^3,有Mg^(2+)存在时该酶活性中心的转换数量是无Mg^(2+)时的4.0倍.几种效应物对酶的抑制机理研究表明:HPO_4^(2-)、HAsO_4^(2-)、Cys为竞争性,其抑制常数分别为1.61、1.18和0.15mmol/dm^3;L-Phe为反竞争性,抑制常数为3.26mmol/dm^3. 展开更多

关键词 僧帽牡蛎 碱性磷酸酶 热稳定性 金属离子 抑制剂 海洋生物

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不同养殖期的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质比较 被引量：11

7

作者 朴顺金 谢晓兰 +2 位作者 黄乾生 谢进金 陈清西 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期348-352,共5页

以不同生长期的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannam ei)的外壳为材料,分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52,NAGase),测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化.结果表明:不同生长期的酶活力、最适温度... 以不同生长期的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannam ei)的外壳为材料,分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.52,NAGase),测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化.结果表明:不同生长期的酶活力、最适温度、催化反应的动力学参数(Km、vm)、活化能等均存在差异.不同生长期酶的最适pH均为5.5.不同生长期的对虾外壳膜NAGase对Cu2+、Zn2+和Hg2+的敏感性也不同.Cu2+对养殖8周对虾外壳膜NAGase的激活作用最为显著,可以使酶活力提高到400%.Zn2+对不同生长期的酶活力均有抑制作用,但对成体对虾酶抑制作用最为显著,可以使酶活力下降80%.Hg2+对各个生长期的酶活力影响效果也不一样,当浓度为0.1 mmol/dm3时,仅对养殖6、8、9周的对虾的酶有激活作用,当Hg2+浓度为1.0mmol/dm3时,五个生长期的虾皮NAGase活力均受到不同程度抑制. 展开更多

关键词 海洋生物 实验研究 凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 性质比较

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4-卤代苯甲酸对马铃薯多酚氧化酶的抑制效应 被引量：12

8

作者 林敏 邱凌 +3 位作者 周盛梅 钟雪 王勤 陈清西 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期56-59,共4页

马铃薯在储存和加工过程中易褐变,本实验研究了3种4-卤代苯甲酸(4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸)对褐变中的关键酶——多酚氧化酶活性的抑制作用。实验表明,4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸对该酶均有明显的抑制作... 马铃薯在储存和加工过程中易褐变,本实验研究了3种4-卤代苯甲酸(4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸)对褐变中的关键酶——多酚氧化酶活性的抑制作用。实验表明,4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸对该酶均有明显的抑制作用,测得使该酶活力下降50%所需的抑制剂浓度(IC50)分别为0.635、0.370、0.300mmol/L。抑制动力学实验表明这三种4-卤代苯甲酸对该酶均表现为可逆的非竞争性抑制作用,其抑制常数分别为0.632、0.365、0.303mmol/L。随着卤族元素分子量的增大,对酶的空间位阻增强,导致抑制效率的显著增强。 展开更多

关键词 马铃薯 多酚氧化酶 4-卤代苯甲酸 抑制作用 动力学

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南瓜粉的功能研究 被引量：10

9

作者 李筱泉 何群 +1 位作者 练惠辉 王勤 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期55-58,共4页

本实验用中性蛋白酶酶解制得的南瓜粉,通过测定该南瓜粉对ACE和ALP活力的影响,研究了南瓜粉对血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,考察其降血压作用及潜在的抗肿... 本实验用中性蛋白酶酶解制得的南瓜粉,通过测定该南瓜粉对ACE和ALP活力的影响,研究了南瓜粉对血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,考察其降血压作用及潜在的抗肿瘤作用;同时提取并初步纯化南瓜多糖,通过fenton反应产生羟基自由基(·OH),测定南瓜粉清除·OH能力,以及通过FRAP法测定其总还原能力,利用纸层析法分析南瓜多糖的单Z糖组成。结果表明,该南瓜粉对ACE和ALP均有抑制作用,具有一定的降血压作用和潜在的抗肿瘤作用;南瓜多糖是由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖和鼠李糖四种单糖组成,具有良好的抗氧化活性。 展开更多

关键词 南瓜 ACE ALP 多糖 抗氧化

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银杏外种皮提取物对酪氨酸酶的抑制作用 被引量：6

10

作者 王勤 钟雪 +2 位作者 邱凌 庄江兴 陈清西 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期379-381,401,共4页

以银杏外种皮为材料,采用水、乙醇和乙醇-乙醚三种不同的方法分离提取其中的活性物质(分别命名为1#,2#,3#),研究它们对蘑菇酪氨酸酶催化L-多巴(L-DOPA)氧化活力的影响。结果表明,这3种提取物均对蘑菇酪氨酸酶有抑制作用,1#,2#和3#对酶... 以银杏外种皮为材料,采用水、乙醇和乙醇-乙醚三种不同的方法分离提取其中的活性物质(分别命名为1#,2#,3#),研究它们对蘑菇酪氨酸酶催化L-多巴(L-DOPA)氧化活力的影响。结果表明,这3种提取物均对蘑菇酪氨酸酶有抑制作用,1#,2#和3#对酶抑制作用的IC50分别为2.25、1.75和0.32mg/mL。抑制作用动力学结果表明:三种提取物对酶的抑制作用均表现为混合型,相应的抑制常数KI依次为2.11、1.62和0.29mg/mL;KIS依次为2.80、2.33和0.45mg/mL。结果显示,采用乙醇-乙醚提取的银杏外种皮提取物对酪氨酸酶抑制作用最强。 展开更多

关键词 银杏外种皮 提取方法 酪氨酸酶 抑制作用 动力学

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几丁质酶的结构特征与功能 被引量：9

11

作者 黄乾生 谢晓兰 陈清西 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第A02期232-235,共4页

几丁质酶在各种生物中起着非常重要的生理作用.最近几年,在哺乳动物中发现多种几丁质酶及类几丁质酶蛋白,它们在免疫炎症反应中起着非常重要的作用.本文综述了人几丁质酶Chitotriosidase和AMCase以及类几丁质酶YKL39,YKL40和Oviductins... 几丁质酶在各种生物中起着非常重要的生理作用.最近几年,在哺乳动物中发现多种几丁质酶及类几丁质酶蛋白,它们在免疫炎症反应中起着非常重要的作用.本文综述了人几丁质酶Chitotriosidase和AMCase以及类几丁质酶YKL39,YKL40和Oviductins的结构特征与功能特点,探讨它们与相关疾病的关系.并阐述了它们之间的进化关系. 展开更多

关键词 人几丁质酶 类几丁质酶 免疫 结构特征

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有机溶剂对棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶活力的影响 被引量：5

12

作者 黄小红 陈清西 +1 位作者 王君 关雄 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第1期78-81,共4页

以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.... 以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.结果表明:甲醇、乙醇和乙二醇对酶有先扬后抑的作用,正丙醇和丙三醇对酶有失活作用.低含量的丙酮 (体积分数为 12. 5% )对酶有可逆失活作用,随着丙酮含量的提高,其酶促反应的动力学参数也随之改变,Vmax值降低,Kmapp值不变.在 278nm波长激发下,天然酶内源荧光在 339nm处有特征的荧光发射,其强度随着丙酮含量的上升而减弱,荧光发射峰也逐渐蓝移.这表明丙酮改变了酶的构象. 展开更多

关键词 葡糖苷 改变 含量 离子交换柱层析 影响 有机溶剂 天然 丙酮 氨基 甲醇

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SDS变性剂对杂色鲍碱性磷酸酶的活力与构象的影响 被引量：3

13

作者 洪燕飞 廖金花 +1 位作者 吴国欣 陈清西 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期140-144,共5页

以十二烷基磺酸钠(SDS)为变性剂,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明酶的剩余活力随着SDS浓度增高而下降,但当下降到67%时,随着SDS浓度增高,酶活力几乎不再发生明显变化.这说明杂色鲍ALP对SDS具有高度的耐受性.研究SDS... 以十二烷基磺酸钠(SDS)为变性剂,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明酶的剩余活力随着SDS浓度增高而下降,但当下降到67%时,随着SDS浓度增高,酶活力几乎不再发生明显变化.这说明杂色鲍ALP对SDS具有高度的耐受性.研究SDS对杂色鲍ALP的pH稳定性的影响,发现该酶的pH稳定性区域由5.9～10.0区域漂移到7.6～10.6区域,显示酶的pH稳定性往碱性区域偏移.进一步以荧光和紫外光谱为监测手段,研究杂色鲍ALP经SDS微扰后的分子构象变化情况.其结果表明随着SDS浓度增高,荧光发射强度逐渐发生变化,但发射峰未发生明显变化;紫外吸收强度发生变化,但吸收峰也未发生明显变化.这说明该酶活性中心对SDS变性剂并不敏感.这在以往文献中未见过报道. 展开更多

关键词 碱性磷酸酶 SDS 杂色鲍 变性剂 十二烷基磺酸钠 pH稳定性 浓度增高 发生变化 稳定性区域 酶活性中心 ALP 监测手段 紫外光谱 变化情况 分子构象 发射强度 吸收强度 耐受性 酶活力 吸收峰 下降 荧光 微扰

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鸡Rad51蛋白的体外表达与纯化及其抗血清的制备

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作者 刘宽灿 王恒 +2 位作者 孟艳敏 叶军 袁立 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期243-245,250,共4页

目的:Rad51蛋白在双链断裂的DNA修复的同源重组中发挥重要作用。因而其过量表达在细胞内的基因操作中被用于在提高基因同源重组的效率。当前在鸡中还未有针对该蛋白的特异性抗体。为此我们对鸡的Rad51进行了体外表达与纯化,并制备了cRa... 目的:Rad51蛋白在双链断裂的DNA修复的同源重组中发挥重要作用。因而其过量表达在细胞内的基因操作中被用于在提高基因同源重组的效率。当前在鸡中还未有针对该蛋白的特异性抗体。为此我们对鸡的Rad51进行了体外表达与纯化,并制备了cRad51抗体,为该蛋白质在鸡细胞中的功能研究及探讨其用于鸡细胞中提高同源重组的研究提供有效工具。方法:对鸡Rad51基因进行全长克隆并构建原核表达载体pET-28a(+),用IPTG诱导该蛋白在Rosseta菌株中表达,纯化后注射BALB/c小鼠获得抗体。结果:成功制备鸡Rad51特异多克隆抗体,ELISA显示该抗体血清效价达51 200,该抗体血清可以用于Western等的蛋白检测技术。结论:针对鸡基因产物制备抗体的技术方法有效可行;首次成功获得鸡Rad51蛋白及多克隆抗体,为与该蛋白相关的研究提供了有效工具。 展开更多

关键词 鸡的Rad51 蛋白表达 抗体制备

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