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当归乙醇提取物抑制黑色素瘤B16-F10细胞增殖、诱导凋亡的作用及机制研究
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作者 柯佳杰 沈煜洲 +3 位作者 许雅苹 陈煜沛 陈培元 吴黉坦 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第1期51-60,共10页
目的:探究当归乙醇提取物(EEA)对黑色素瘤细胞B16-F10细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法评价细胞存活率;细胞克隆形成法检测细胞增殖能力;倒置显微镜观察细胞汇合度及形态变化;Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡;流... 目的:探究当归乙醇提取物(EEA)对黑色素瘤细胞B16-F10细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法评价细胞存活率;细胞克隆形成法检测细胞增殖能力;倒置显微镜观察细胞汇合度及形态变化;Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡;透射电镜(TEM)观察细胞线粒体形态结构变化;免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期、凋亡、线粒体生物发生和动力学相关蛋白的表达情况。结果:与空白对照组相比,10~400μg/mL EEA处理24 h和48 h后,细胞存活率降低(P<0.05,P<0.01);100μg/mL和200μg/mL EEA处理24 h后,细胞汇合度下降,出现皱缩变圆、体积缩小等形态改变及染色质固缩等凋亡特征;10~200μg/mL EEA处理14 d后,细胞克隆数目减少(P<0.01);200μg/mLEEA处理24h后,细胞内线粒体变圆变短,其内容物严重破坏甚至消失;20~200μg/mL EEA处理24 h后,G0/G1期细胞比例增加(P<0.01),早期细胞凋亡率增加(P<0.01),活化胱天蛋白酶-9(cleaved caspase-9)和Bax蛋白表达升高(P<0.01),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、Bcl-2、Bad、Bcl-XL、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),动力相关蛋白1(DRP1)和Fission 1蛋白(FIS1)表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:EEA对B16-F10细胞具有显著抑制作用,其机制可能与诱导细胞G1/S期阻滞,激活内源性线粒体途径细胞凋亡,破坏线粒体生物发生与动力学平衡有关。 展开更多
关键词 当归乙醇提取物 B16-F10细胞 细胞周期 凋亡 线粒体生物发生与动力学
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PD-1高表达细菌质膜囊泡的构建及对小鼠肺癌移植瘤组织的靶向性评估
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作者 徐秀杰 张静云 +7 位作者 范峻晨 蒋灵馨 张娜 郑猛超 龙雨飞 高贵花 颜涛玲 兰天舒 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第3期239-246,共8页
目的:构建程序性死亡受体1(PD-1)高表达的细菌质膜纳米囊泡(BMV)BMV-PD-1,评估其对小鼠肺癌移植瘤组织的靶向性。方法:通过质粒转化将PD-1与膜孔蛋白细胞溶素A(ClyA)融合质粒ClyA-PD-1-EGFP转入大肠杆菌BL21-Codonplus,使用激光共聚焦... 目的:构建程序性死亡受体1(PD-1)高表达的细菌质膜纳米囊泡(BMV)BMV-PD-1,评估其对小鼠肺癌移植瘤组织的靶向性。方法:通过质粒转化将PD-1与膜孔蛋白细胞溶素A(ClyA)融合质粒ClyA-PD-1-EGFP转入大肠杆菌BL21-Codonplus,使用激光共聚焦显微镜、SDS-PAGE和WB法检测融合蛋白ClyA-PD-1-EGFP的表达。提取质膜并采用挤出法,利用挤出器制备BMV-PD-1。采用透射电子显微镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)技术分别对BMV-PD-1的形态、粒径和膜电位进行检测,用WB鉴定PD-1蛋白的携带情况。采用激光共聚焦成像检测Lewis肺癌LLC细胞对BMV-PD-1的摄取。建立肺癌LLC细胞C57BL/6J小鼠皮下移植瘤模型,采用小动物活体成像系统评估BMV-PD-1的肿瘤靶向性。结果:激光共聚焦显微成像结果显示,质粒ClyA-PD-1-EGFP被转入BL21-Codonplus并成功表达蛋白。SDS-PAGE结果表明,ClyA-PD-1-EGFP在BL21-Codonplus中过表达。WB分析表明,PD-1在细菌中表达且在BMV-PD-1上呈高表达(P<0.001)状态。NTA和TEM分析表明,BMV-PD-1是一种粒径为(145±14)nm、表面呈负电性的球状囊泡。激光共聚焦成像显示,PD-1高表达能显著提升肺癌细胞对BMV-PD-1的摄取(P<0.01),小动物活体成像也进一步证实PD-1高表达能有效提升BMV-PD-1的肿瘤靶向性(P<0.01)。结论:本研究成功构建了PD-1高表达的细菌纳米囊泡BMV-PD-1,发现PD-1高表达可显著提高BMV-PD-1的肺癌LLC细胞移植瘤组织的靶向性,为进一步开发以BMV-PD-1为载体的肿瘤靶向药物递送系统奠定基础。 展开更多
关键词 PD-1 细菌囊泡 细胞摄取 肺癌靶向
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