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题名HBV启动子调控的GFP在肿瘤细胞中的表达
被引量：1
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作者
茆灿泉
黄常志
赵玫
范云霞
徐枫
杜菲
杨树德
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机构
卫生部北京医院临检中心
中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所
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出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2001年第1期55-58,共4页
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基金
国家自然科学基金! (3 9670 696)
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文摘
目的 :研究HBV启动子调控下的GFP报告基因在肿瘤细胞中的表达。方法 :采用DNA重组技术 ,将GFPs65T和HBV的EⅡmCMV启动子 (增强子 )亚克隆到哺乳动物表达载体pcDNA3 中 ,构建了pcDNA3 GFP ,pcDNA3 GFP EⅡ ,pcDNA3 GFP EⅡ w3种含GFP的重组质粒 ,在Lipofectin介导下分别转染Hela和Bel740 2肿瘤细胞 ,经G418抗性筛选 ,挑选阳性克隆并扩大培养用于荧光和Westernblotting检测 ,利用GELDoc2 0 0 0数字成像系统对GFP蛋白表达进行定量分析。结果 :酶切和电泳表明重组质粒构建正确 ;获得了稳定转染各质粒的阳性细胞克隆 ;经Westernblotting检测 ,亲本和空载细胞的GFP值在本底范围 ,GFP转染的各细胞 ,均可检测到 2 7kD的GFP目的蛋白 ;EⅡmCMV启动子调控的Hela GFP EⅡ ,Hela GFP EⅡ w表达的GFP量均低于Hela GFP ;pcDNA3 GFP EⅡ w在Bel740 2细胞中的表达量明显高于其在Hela细胞中的表达量。结论 :HBV启动子调控下的GFP报告基因能够在肝癌Bel740 2细胞中表达并具有一定的专一性。
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关键词
基因转染
GFP
HBV
肝肿瘤
启动子
基因调控
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Keywords
gene
GFP
HBV
transfection
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分类号
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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