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1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究
被引量：
4
1
作者
李晓楠
唐青海
+4 位作者
李羽
王瑾
姚伦广
阚云超
杨海
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017年第8期131-136,共6页
采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应...
采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。
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关键词
猪传染性胃肠炎病毒
分离培养
免疫过氧化物酶单层细胞染色法
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职称材料
猪ELF4基因的克隆、蛋白表达及其多克隆抗体制备
被引量：
3
2
作者
王瑾
唐青海
+5 位作者
谷雅静
李晓楠
李羽
王雪雨
姚伦广
阚云超
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期425-435,共11页
本研究旨在克隆猪转录因子ELF4基因,体外表达ELF4蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体。采用RTPCR扩增猪ELF4基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列特征,将其克隆至原核表达载体pET28a,构建重组表达载体pET28a-pELF4,转化Ros...
本研究旨在克隆猪转录因子ELF4基因,体外表达ELF4蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体。采用RTPCR扩增猪ELF4基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列特征,将其克隆至原核表达载体pET28a,构建重组表达载体pET28a-pELF4,转化Rosetta(DE3)菌株,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达,重组pELF4蛋白(rpELF4)经纯化免疫鸡制备抗pELF4抗体。结果表明,pELF4开放阅读框为1 989bp(GenBank No.:KU097322),编码662个氨基酸,该基因与已经测定的人、牛、小鼠的ELF4的核苷酸相似性依次为89.4%、90.7%和81.1%,与牛等大动物的亲缘关系相对较近,与人和小鼠亲缘关系相对较远;结果显示,成功表达了重组蛋白pELF4,rpELF4分子量为95ku,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,在37℃条件下,以终浓度为0.8mmol·L-1IPTG诱导8h包涵体表达量达到最高。第4次免疫后第13天,鸡抗rpELF4抗体滴度达到1︰256 000倍以上。本试验利用原核表达系统成功制备了重组pELF4蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的鸡抗pELF4多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。
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关键词
猪ELF4蛋白
原核表达
免疫
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职称材料
题名
1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究
被引量：
4
1
作者
李晓楠
唐青海
李羽
王瑾
姚伦广
阚云超
杨海
机构
南阳师范学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/昆虫生物反应器河南省工程实验室
衡阳
师范学院
生命科学与环境
学院
/
生物
药物研究所
出处
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017年第8期131-136,共6页
基金
河南省重点科技攻关项目(142102110101)
河南省高等学校重点科研项目(16A230023)
+1 种基金
南阳师范学院研究生创新基金项目(2016CX008)
衡阳师范学院引进人才专项(16D20)
文摘
采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。
关键词
猪传染性胃肠炎病毒
分离培养
免疫过氧化物酶单层细胞染色法
Keywords
transmissible gastroenteritis virus
isolation and culture
immunoperoxidase monolayer as-say
SI gene
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪ELF4基因的克隆、蛋白表达及其多克隆抗体制备
被引量：
3
2
作者
王瑾
唐青海
谷雅静
李晓楠
李羽
王雪雨
姚伦广
阚云超
机构
南阳师范学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/昆虫生物反应器河南省工程实验室
衡阳
师范学院
生命科学与环境
学院
生物
药物研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期425-435,共11页
基金
国家自然科学基金青年基金(31101837)
河南省重点科技攻关项目(142102110101)
+1 种基金
衡阳师范学院引进人才专项项目
河南省高等学校重点科研项目(16A230023)
文摘
本研究旨在克隆猪转录因子ELF4基因,体外表达ELF4蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体。采用RTPCR扩增猪ELF4基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列特征,将其克隆至原核表达载体pET28a,构建重组表达载体pET28a-pELF4,转化Rosetta(DE3)菌株,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达,重组pELF4蛋白(rpELF4)经纯化免疫鸡制备抗pELF4抗体。结果表明,pELF4开放阅读框为1 989bp(GenBank No.:KU097322),编码662个氨基酸,该基因与已经测定的人、牛、小鼠的ELF4的核苷酸相似性依次为89.4%、90.7%和81.1%,与牛等大动物的亲缘关系相对较近,与人和小鼠亲缘关系相对较远;结果显示,成功表达了重组蛋白pELF4,rpELF4分子量为95ku,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,在37℃条件下,以终浓度为0.8mmol·L-1IPTG诱导8h包涵体表达量达到最高。第4次免疫后第13天,鸡抗rpELF4抗体滴度达到1︰256 000倍以上。本试验利用原核表达系统成功制备了重组pELF4蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的鸡抗pELF4多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。
关键词
猪ELF4蛋白
原核表达
免疫
Keywords
porcine ELF4 protein
prokaryotic expression
immunization
分类号
S828 [农业科学—畜牧学]
S813.1 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究
李晓楠
唐青海
李羽
王瑾
姚伦广
阚云超
杨海
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪ELF4基因的克隆、蛋白表达及其多克隆抗体制备
王瑾
唐青海
谷雅静
李晓楠
李羽
王雪雨
姚伦广
阚云超
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
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职称材料
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