1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究 被引量：4

1

作者 李晓楠 唐青海 +4 位作者 李羽 王瑾 姚伦广 阚云超 杨海 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第8期131-136,共6页

采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应... 采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 分离培养 免疫过氧化物酶单层细胞染色法

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中国盖塔病毒Ⅲ型变异株的全基因组序列分析 被引量：1

2

作者 许浒 冯子萱 +16 位作者 龚帮俊 张思钰 李超 李金昊 郭镇洋 张雪莉 石佳豪 宋紫雨 彭金美 王倩 周国辉 汤艳东 安同庆 蔡雪辉 冷超粮 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期303-307,共5页

盖塔病毒(GETV)是一种广泛分布于亚洲和泛太平洋国家的蚊媒RNA病毒,其感染宿主众多,对猪致病力强。2024年7月至8月,河南省和湖北省的8个规模化养猪场2个月内集中出现哺乳仔猪发烧、腹泻和死亡等临床症状,仔猪发病率约为10%~20%,死亡率高... 盖塔病毒(GETV)是一种广泛分布于亚洲和泛太平洋国家的蚊媒RNA病毒,其感染宿主众多,对猪致病力强。2024年7月至8月,河南省和湖北省的8个规模化养猪场2个月内集中出现哺乳仔猪发烧、腹泻和死亡等临床症状,仔猪发病率约为10%~20%,死亡率高达100%。为探究疾病暴发的原因,本研究在8个猪场分别采集猪肺脏、脾脏、肠道组织,每个猪场合为1个样品,共8份临床样品。采用RT-qPCR和qPCR方法鉴定各疑似病原,结果显示8份样品中非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、PCV3和猪伪狂犬病毒(PRV)均为阴性。进一步利用RT-PCR在8份样品中扩增出GETV的Nsp3和E2基因,8份样品均为GETV阳性,确定本次疫情由GETV引起。测序获得8份样品的Nsp3和E2基因序列,选取其中1株(HN1)分8段扩增各基因序列,利用SeqMan拼接获得HN1株全基因组序列。参照GenBank中Group Ⅰ-Group Ⅳ型GETV代表株的E2基因、Nsp3基因和全基因组序列,利用Megalign软件分析本研究鉴定的GETV与各型GETV代表株E2序列的相似性;利用MEGA7.0构建上述GETV E2基因和全基因组序列(HN1株)的遗传进化树,分析其遗传变异情况;利用Megalign软件分析各型GETV Nsp3氨基酸突变特征。E2基因编码氨基酸序列相似性比对结果显示,本研究鉴定的各株GETV之间E2氨基酸序列的相似性均达100%,同时与Group Ⅲ型代表株GETVV1株E2基因序列的相似性较高(98.5%~98.6%)。基于E2基因和全基因组序列构建的进化树结果显示,本研究鉴定的GETV均属于Group Ⅲ型(Ⅲ型),形成了一个独立分支,将其命名为GETV Ⅲ型变异株。Nsp3氨基酸序列比对分析发现,GETV Ⅲ型变异株与其他GETV相比在S^(329)、T/I^(381)和G^(503)处存在3个特征性氨基酸突变,可以作为鉴别GETV Ⅲ型变异株的分子特征,且特征性氨基酸突变均位于Nsp3的高变结构域(HVD)内,可能与GETV Ⅲ型变异株毒力增强有关。本研究首次鉴定了GETV Ⅲ型变异株,并首次报道GETV Ⅲ型变异株在我国河南省和湖北省引起疫病的集中暴发,对了解我国GETV流行现状以及对其感染的防控均具有重要的指导意义。 展开更多

关键词 盖塔病毒 Ⅲ型变异株 分子特征

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纳米载体递送系统介导的豌豆蚜四个基因RNA干涉条件筛选 被引量：1

3

作者 张琨 郭士刚 +3 位作者 常美玲 余明玉 阚云超 李丹丹 《昆虫学报》 北大核心 2025年第6期728-735,共8页

【目的】评估纳米载体递送系统介导豌豆蚜Acyrthosiphon pisum基因的RNA干涉条件。【方法】选择豌豆蚜表皮发育相关基因几丁质合成酶2(chitin synthase 2,CHS2)基因,代谢相关酶液泡型H^(+)-ATP酶AC39(vacuolar H^(+)ATPase AC39,VhaAC39... 【目的】评估纳米载体递送系统介导豌豆蚜Acyrthosiphon pisum基因的RNA干涉条件。【方法】选择豌豆蚜表皮发育相关基因几丁质合成酶2(chitin synthase 2,CHS2)基因,代谢相关酶液泡型H^(+)-ATP酶AC39(vacuolar H^(+)ATPase AC39,VhaAC39)基因、水通道蛋白(water-specific aquaporin,Wsa)基因和N6-甲基腺苷(N6 methyladenosine,m6A)修饰关键酶甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase-like protein 14,METTL14)基因作为研究对象,通过纳米载体递送系统在豌豆蚜4龄若蚜中分别注射上述4个基因不同浓度(10~5000 ng/μL,5~250 ng/头)的dsRNA,注射后48 h时利用qRT-PCR检测这上述4个基因的表达量,筛选dsRNA最适浓度;将这4个基因的dsRNA以最适浓度通过纳米载体递送系统注射豌豆蚜4龄若蚜后12,24,36,48,60和72 h时qRT-PCR检测这4个基因的表达量,筛选纳米载体递送系统介导RNA干涉的最佳时间。【结果】与注射dsEGFP的对照组相比,豌豆蚜4龄若蚜注射50 ng/μL(25 ng/头)dsCHS2后48 h时,CHS2表达量显著下降47.5%;豌豆蚜4龄若蚜注射50~200 ng/μL(25~100 ng/头)dsMETTL14后48 h时METTL14的表达量显著下降,呈剂量依赖效应;豌豆蚜4龄若蚜注射50 ng/μL(25 ng/头)dsVhaAC39后48 h时VhaAC39表达量显著下降53.4%,而注射dsWsa后48 h时Wsa的表达量没有显著变化。与注射dsEGFP的对照组相比,CHS2,METTL14和VhaAC39表达量均在注射靶基因dsRNA后48 h时下降最显著,Wsa在注射dsWsa后60 h时下降最显著。【结论】对豌豆蚜使用纳米载体介导的RNA干涉的dsRNA的最佳浓度约为50 ng/μL(25 ng/头),干涉效果较好的时间段为处理后48-60 h时,该研究为使用纳米递送系统实现蚜虫RNA干涉提供了参考。 展开更多

关键词 豌豆蚜 DSRNA RNA干涉 纳米载体递送系统 RNA农药

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昆虫体细胞遗传性别决定信号通路的研究进展 被引量：2

4

作者 段建平 孟现鑫 +3 位作者 李莹 姚伦广 阚云超 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期93-101,共9页

昆虫遗传性别决定可分为体细胞性别决定、生殖细胞分化和剂量补偿效应3个层次。昆虫体细胞性别决定信号通路基本上都遵循从初始信号到关键基因,再到双性基因的信息流传递基本模式。不同昆虫间,体细胞性别决定初始信号(如X染色体剂量、M... 昆虫遗传性别决定可分为体细胞性别决定、生殖细胞分化和剂量补偿效应3个层次。昆虫体细胞性别决定信号通路基本上都遵循从初始信号到关键基因,再到双性基因的信息流传递基本模式。不同昆虫间,体细胞性别决定初始信号(如X染色体剂量、M强雄基因、母系印迹及与PIWI相作用的RNA等)很复杂,关键基因(如sxl和tra/fem)有所变化,但双性基因(如dsx)很保守,且重要基因的剪接方式(如选择性剪接)非常保守。结合作者昆虫性别决定的研究工作,本文总结了双翅目、膜翅目和鳞翅目代表性昆虫种类的性别决定初始信号、关键基因及双性基因的研究进展及一般规律,为昆虫性别决定分子机制的进一步揭示、昆虫不育技术(SIT)的开发以及昆虫性别的人为操控提供理论基础。 展开更多

关键词 昆虫 性别决定 初始信号 关键基因 双性基因

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农业害虫生物防治的现状及发展趋势综述 被引量：9

5

作者 邢万静 阚云超 乔惠丽 《安徽农业科学》 CAS 2014年第18期5803-5806,共4页

针对目前农业害虫的生物防治方法,分别介绍了生物天敌、生物农药、昆虫信息素、昆虫生长调节剂在农业害虫防治中的研究现状,阐述了各种生物防治方法的应用优势,并分析了农业害虫生物防治中存在的问题及其发展趋势。

关键词 生物防治 农业害虫 生物农药 昆虫信息素 昆虫生长调节剂

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植物乳杆菌、苹果醋酸杆菌和酿酒酵母三种微生物对黑腹果蝇行为和发育的影响 被引量：2

6

作者 王露 魏博帆 +4 位作者 李苗苗 李晓哲 王博 阚云超 乔惠丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期460-470,共11页

【目的】肠道微生物在宿主的多种生命活动中发挥重要作用。本研究旨在通过研究植物乳杆菌Lactobacillus plantarum,苹果醋酸杆菌Acetobacter malorum和酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 3种微生物对黑腹果蝇Drosophila melanogaster觅... 【目的】肠道微生物在宿主的多种生命活动中发挥重要作用。本研究旨在通过研究植物乳杆菌Lactobacillus plantarum,苹果醋酸杆菌Acetobacter malorum和酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 3种微生物对黑腹果蝇Drosophila melanogaster觅食、产卵和发育的影响,进一步阐明肠道微生物与宿主的互作调控机制。【方法】采用引诱实验检测体外培养的植物乳杆菌、苹果醋酸杆菌和酿酒酵母对交配前后黑腹果蝇成虫的引诱力以及这3种微生物的单一微生物和其中2种或3种微生物的混合物对非处女蝇的引诱力。采用产卵选择实验检测黑腹果蝇非处女蝇对单一微生物和其中2种或3种微生物的混合物的产卵偏好。将黑腹果蝇卵在接种分别含有植物乳杆菌、苹果醋酸杆菌和酿酒酵母的培养基和正常培养基(对照)上培养,测量幼虫体重;同时将卵在分别含有活菌或灭活的这3种单一微生物的培养基上和正常培养基上培养,统计化蛹数,以检测不同微生物对黑腹果蝇幼虫发育的影响。将黑腹果蝇幼虫在分别含有植物乳杆菌、苹果醋酸杆菌和酿酒酵母的培养基及正常培养基中培养72 h,qRT-PCR检测胰岛素信号通路的关键基因InR在黑腹果蝇幼虫中的相对表达量变化。【结果】苹果醋酸杆菌主要影响黑腹果蝇的产卵,酿酒酵母和植物乳杆菌则可同时影响黑腹果蝇觅食和产卵,且与单一微生物相比,非处女黑腹果蝇更趋向于含有2种或3种微生物的混合物。产卵选择实验表明,3种单一供试微生物及其中2种或3种微生物的混合物对黑腹果蝇的产卵选择具有显著的吸引力,其中混合物的影响最大,然后依次是苹果醋酸杆菌、酿酒酵母、植物乳杆菌。3种微生物均可促进黑腹果蝇幼虫的发育,活菌在接种早期加快幼虫到蛹的发育,灭活菌的促进作用则相对滞后。与对照比较,InR在接种苹果醋酸杆菌的培养基上培养的黑腹果蝇幼虫中的表达量显著降低,而在分别接种植物乳杆菌和酿酒酵母的培养基上培养的幼虫中则被显著促进表达。【结论】苹果醋酸杆菌可引诱黑腹果蝇的产卵,酿酒酵母和植物乳杆菌对黑腹果蝇的觅食和产卵都有具有引诱力;同时微生物的多样性可增加黑腹果蝇的觅食和产卵偏好。植物乳杆菌、苹果醋酸杆菌和酿酒酵母可能通过不同的调控机制影响黑腹果蝇幼虫的生长发育。 展开更多

关键词 黑腹果蝇 肠道微生物 植物乳杆菌 苹果醋酸杆菌 酿酒酵母 引诱力 产卵

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玉米AGO基因的克隆与表达分析 被引量：5

7

作者 许鑫 李丹丹 +2 位作者 李双江 阚云超 李春奇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期449-453,共5页

以玉米自交系‘昌7-2’三叶期前后2个时间点(种子萌发后5d和8d)幼苗不同组织部位的总RNA为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对玉米中6个Argonaute(AGO)蛋白家族基因(AGO1、AGO2、AGO4、AGO5、AGO7和AGO10)在幼苗不同发育时期及不同组... 以玉米自交系‘昌7-2’三叶期前后2个时间点(种子萌发后5d和8d)幼苗不同组织部位的总RNA为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对玉米中6个Argonaute(AGO)蛋白家族基因(AGO1、AGO2、AGO4、AGO5、AGO7和AGO10)在幼苗不同发育时期及不同组织部位的表达谱进行了研究。结果表明:(1)AGO1、AGO2、AGO4和AGO7在种子萌发后5d和8d幼苗不同组织中均有表达,种子萌发后5d幼苗中的平均表达量均高于萌发8d的幼苗,且在地上部分新生组织或细胞分裂比较旺盛的组织中表达较多,表明AGO1、AGO2、AGO4和AGO7可能在玉米幼苗发育早期的分生组织分裂生长中发挥调控作用。(2)AGO5和AGO10只在叶片和茎尖中表达,其他组织中不表达;其中AGO5主要集中在新生叶和种子萌发后8d的茎尖中,AGO10在玉米叶发育过程中可能存在着迁移的现象。 展开更多

关键词 玉米 幼苗 AGO基因 表达谱

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家蚕化学感受蛋白CSP16的表达及结合特性分析 被引量：5

8

作者 郭兴国 陈莹 +3 位作者 邢秋婷 邢万静 阚云超 乔惠丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期613-621,共9页

【目的】化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)在昆虫化学信号的感受识别和生长发育调节等生理过程具有重要作用。本研究旨在探索CSP16在家蚕Bombyx mori中的功能。【方法】利用RT-q PCR分析csp16在家蚕不同发育时期和不同组织的... 【目的】化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)在昆虫化学信号的感受识别和生长发育调节等生理过程具有重要作用。本研究旨在探索CSP16在家蚕Bombyx mori中的功能。【方法】利用RT-q PCR分析csp16在家蚕不同发育时期和不同组织的表达特征,用原核表达系统对家蚕CSP16进行表达纯化,并通过荧光结合实验检测该蛋白与不同配体化合物的结合特性。【结果】RT-q PCR结果表明,csp16在家蚕1-5龄幼虫中呈规律性表达,各龄期眠蚕中表达量最高,5龄第3天幼虫中主要表达于头、表皮、精巢和卵巢等。蜕皮激素(20E)处理后csp16在不同龄期幼虫和5龄幼虫不同组织中的表达量上调。纯化后CSP16的荧光结合实验表明,CSP16与醇类、酯类、醛类、酚类和苯环类等化合物的亲和力都较弱。【结论】csp16在家蚕不同龄期幼虫眠蚕中表达量最高,蜕皮激素使csp16在家蚕取食幼虫中的表达量出现上调,提示其可能参与家蚕幼虫的蜕皮过程。 展开更多

关键词 家蚕 化学感受蛋白 RT-qPCR分析 蜕皮激素 结合特征

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鸡Mx蛋白抗病毒作用研究进展 被引量：2

9

作者 冀君 许鑫 +4 位作者 唐青海 邱礽 唐存多 阚云超 姚伦广 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第11期79-83,共5页

Mx蛋白是在脊椎动物机体细胞受病毒感染或诱生剂处理时由Ⅰ型干扰素诱导表达的一种抗病毒蛋白。Mx蛋白具有良好的抗病毒能力,靶向许多RNA病毒,诸如流感病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病毒等,对某些DNA病毒,例如乙型肝炎病毒也有一定的作用... Mx蛋白是在脊椎动物机体细胞受病毒感染或诱生剂处理时由Ⅰ型干扰素诱导表达的一种抗病毒蛋白。Mx蛋白具有良好的抗病毒能力,靶向许多RNA病毒,诸如流感病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病毒等,对某些DNA病毒,例如乙型肝炎病毒也有一定的作用。近年来,基于鸡的Mx蛋白抗病毒作用及机制的相关研究逐渐增多,取得了一些进展。论文就近年来鸡Mx蛋白的抗病毒机制与分子生物学特点进行综述,针对鸡Mx蛋白在抗病毒与品种鸡抗病育种筛选等应用前景进行分析与探讨。 展开更多

关键词 MX蛋白 抗病毒作用 抗病育种 鸡

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猪Cdk2基因的克隆及其功能研究 被引量：2

10

作者 唐青海 张辉 +1 位作者 危艳武 刘长明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1522-1531,共10页

本研究旨在克隆猪Cdk2基因,并研究其编码蛋白CDK2的生物学功能。采用RT-PCR扩增猪Cdk2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸特征,并预测编码蛋白的生物学功能;利用半定量RT-PCR方法分析该基因在猪各个脏器和组织中的表达情... 本研究旨在克隆猪Cdk2基因,并研究其编码蛋白CDK2的生物学功能。采用RT-PCR扩增猪Cdk2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸特征,并预测编码蛋白的生物学功能;利用半定量RT-PCR方法分析该基因在猪各个脏器和组织中的表达情况;共聚焦显微镜观察CDK2的亚细胞定位,采用过表达和shRNA干扰技术研究CDK2在细胞周期和细胞增殖中的调控作用。结果表明,猪Cdk2基因开放阅读框(ORF)为897bp(GenBank:JX967576),该基因与绵羊、牛、山羊、人、金仓鼠、小鼠、仓鼠和沟鼠Cdk2的核苷酸相似性依次为94.2%、94.0%、93.8%、93.4%、91.8%、91.0%、90.6%和89.9%,与牛、山羊和绵羊的亲缘关系最近;Cdk2编码298aa,CDK2分子质量为34ku。Cdk2mRNA在猪10个不同脏器和组织中均有表达。CDK2定位于细胞质和细胞核中,并通过蛋白酶体途径降解。猪CDK2在PK-15细胞中过表达引起S期细胞比例显著减少及G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05),而G0/G1期无显著变化;相反,CDK2表达量降低引起S期细胞比例显著减少及G0/G1期细胞比例显著增加,而G2/M期无显著变化。本研究成功克隆了猪Cdk2基因并对其编码蛋白生物学功能进行了初步研究。 展开更多

关键词 猪Cdk2 基因克隆 细胞周期 细胞增殖

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组织化学方法定位陆地棉色素腺体中的多酚羟基萘醌类化合物 被引量：3

11

作者 刘宗才 焦铸锦 白小玲 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期116-118,共3页

运用组织化学方法探测陆地棉(Gossypium hirsutum L.)色素腺体内所含的主要次生代谢物质,FastBlue BB验证了色素腺体内含有大量的多酚类物质,FeCl3检测证实色素腺体不仅是萘醌类物质的积累场所也是产生场所,醋酸铅检测证实萘醌类物质在... 运用组织化学方法探测陆地棉(Gossypium hirsutum L.)色素腺体内所含的主要次生代谢物质,FastBlue BB验证了色素腺体内含有大量的多酚类物质,FeCl3检测证实色素腺体不仅是萘醌类物质的积累场所也是产生场所,醋酸铅检测证实萘醌类物质在色素腺体的分泌细胞内产生、在色素腺体的腔内积累.其中,醋酸铅检测方法为亚显微研究色素腺体内次生代谢物质的产生和转运有重要的应用价值. 展开更多

关键词 组织化学 陆地棉(Gossypium hirsutum L.) 色素腺体 次生代谢物质

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利用全长转录本优化柞蚕基因组注释 被引量：1

12

作者 李莹 雷煜宇 +5 位作者 梁世梅 章贤 杜杰 杨新峰 李闪闪 段建平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1244-1251,共8页

【目的】优化柞蚕Antheraea pernyi基因组注释,更好地扩展其在比较基因组学及品种改良研究中的应用。【方法】对柞蚕进行全长转录组测序分析;经全长转录本与参考基因组比对,鉴定新基因及新转录本,并对这些新基因和新转录本进行功能注释... 【目的】优化柞蚕Antheraea pernyi基因组注释,更好地扩展其在比较基因组学及品种改良研究中的应用。【方法】对柞蚕进行全长转录组测序分析;经全长转录本与参考基因组比对,鉴定新基因及新转录本,并对这些新基因和新转录本进行功能注释及长链非编码RNAs(lncRNAs)预测。利用大量的蛋白质编码转录本和lncRNAs对柞蚕基因组中基因结构进行修订。最后创建矫正后的柞蚕基因组基因注释。【结果】新发现1997个蛋白编码基因和3399个lncRNA基因,分别由2402个和3574个全长转录本数据支持。发现柞蚕基因组含25021个基因,其中19825个基因是蛋白编码基因,包括7个保幼激素酸甲基转移酶基因。【结论】本研究促进了对柞蚕基因组基因注释信息的认识,为柞蚕及相关物种功能基因组及比较基因组学研究提供了很有用的数据资源。 展开更多

关键词 柞蚕 基因组注释 全长转录组 蛋白编码基因 lncRNA 保幼激素酸甲基转移酶基因

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比克氏棉休眠种子内色素腺体的解剖学观察 被引量：1

13

作者 刘宗才 白小玲 焦铸锦 《安徽农业科学》 CAS 2013年第20期8817-8818,8823,共3页

通过半薄切片,研究了比克氏棉休眠种子内色素腺体的分布、发育状态。根据色素腺体的发育状态,分为不具分泌腔的色素腺体即"色素腺体原"以及具有分泌腔的色素腺体2种类型。不具分泌腔的色素腺体主要位于分化程度较低的胚轴、... 通过半薄切片,研究了比克氏棉休眠种子内色素腺体的分布、发育状态。根据色素腺体的发育状态,分为不具分泌腔的色素腺体即"色素腺体原"以及具有分泌腔的色素腺体2种类型。不具分泌腔的色素腺体主要位于分化程度较低的胚轴、子叶顶端等组织部位。具有分泌腔的色素腺体主要分布在靠近子叶基部分化程度较高的组织部位。该研究验证了比克氏棉休眠种子内子叶和胚轴含有色素腺体,并首次发现子叶内部分色素腺体已发育出分泌腔。 展开更多

关键词 比克氏棉 色素腺体 分泌细胞

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过量表达甲酸脱氢酶提高大肠杆菌合成L-2-氨基丁酸的效率

14

作者 李莹 史红玲 +3 位作者 王喆 冉璐妮 薛闯 唐存多 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1048-1054,1072,共8页

为了实现L-2-氨基丁酸(L-ABA)的高效生物合成,借助pACYCDuet-1和pET28a共表达系统,构建了携带L-苏氨酸脱氨酶(L-TD)、L-亮氨酸脱氢酶(L-L-DH)和不同活性甲酸脱氢酶(FDH)编码基因的重组大肠杆菌,分别命名为:E.coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1... 为了实现L-2-氨基丁酸(L-ABA)的高效生物合成,借助pACYCDuet-1和pET28a共表达系统,构建了携带L-苏氨酸脱氨酶(L-TD)、L-亮氨酸脱氢酶(L-L-DH)和不同活性甲酸脱氢酶(FDH)编码基因的重组大肠杆菌,分别命名为:E.coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1-Ec TD-Es LeuDH:pET28a-Cb FDH和E.coli BL21(DE3)/p ACYCDuet-1-Ec TD-Es Leu DH:p ET28a-Cb FDH^(M)。经诱导表达后,L-苏氨酸脱氨酶和L-亮氨酸脱氢酶在两个重组大肠杆菌中的表达水平基本一致,而后者的甲酸脱氢酶酶活表达水平为(342.00±9.40)IU/mL,显著高于前者的(196.00±6.20)IU/mL。在50 mL反应体系中,200 mmol/L L-苏氨酸经220 r/min、30℃下反应6 h时,前者L-ABA得率为71%,后者为85%。结果表明,提高甲酸脱氢酶的表达水平可以显著提高L-ABA的合成效率。此外,优化反应温度后,在35℃下反应6 h时,L-ABA的得率可达90%。 展开更多

关键词 L-2-氨基丁酸 L-苏氨酸 共表达 微生物细胞工厂 全细胞催化 生物工程

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家蚕雌特异剪接体dsx^F2的转基因品系建立及功能分析

15

作者 段建平 郭惠珍 +4 位作者 马三垣 王峰 阚云超 姚伦广 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期61-66,共6页

家蚕双性基因dsx通过选择性剪接产生性别特异剪接体而影响体细胞性别发育,之前对Bmdsx进行c DNA末端快速扩增(RACE)分析时获得一个雌特异剪接体Bmdsx^(F2)。为揭示Bmdsx^(F2)的生物学功能,构建由A4启动子驱动Bmdsx^(F2)表达的转基因异... 家蚕双性基因dsx通过选择性剪接产生性别特异剪接体而影响体细胞性别发育,之前对Bmdsx进行c DNA末端快速扩增(RACE)分析时获得一个雌特异剪接体Bmdsx^(F2)。为揭示Bmdsx^(F2)的生物学功能,构建由A4启动子驱动Bmdsx^(F2)表达的转基因异位表达载体,通过显微注射和荧光筛选,获得2个Bmdsx^(F2)转基因品系L1和L2。RT-PCR结果显示Bmdsx^(F2)在2个转基因品系雄蚕中都成功异位表达;连续6代观察都未发现L1和L2的个体发育表型异常;W染色体特异性PCR检测表明所有转基因雌性个体的染色体组型都为ZW型,没有ZZ型;连续6代调查L1和L2的个体性别比例都遵循1∶1的正常比例;实时荧光定量PCR检测在2个转基因品系雄性个体中,Bmdsx^(F2)的下游靶基因SP1和Vg都明显上调表达,而PBP的表达则明显下调,表明雌特异剪接体Bmdsx^(F2)能够调控Bmdsx下游靶基因的表达,暗示Bmdsx^(F2)同样可参与家蚕体细胞性别发育调控。 展开更多

关键词 家蚕 双性基因 雌特异剪接体 转基因 靶基因

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植物乳杆菌植酸酶理性设计及表达鉴定

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作者 唐存多 杨田田 +4 位作者 李莹 王喆 何建菊 杨露露 史红玲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期9-15,共7页

植酸酶能将植酸水解成肌醇衍生物,并释放出无机磷酸,是一种重要的生物催化剂。植酸酶的热稳定性和比活性是决定其潜在应用价值的2个关键因素。该研究从植物乳杆菌中克隆到了具有233个氨基酸残基、高活性的植酸酶基因(LpPHY233),并在大... 植酸酶能将植酸水解成肌醇衍生物,并释放出无机磷酸,是一种重要的生物催化剂。植酸酶的热稳定性和比活性是决定其潜在应用价值的2个关键因素。该研究从植物乳杆菌中克隆到了具有233个氨基酸残基、高活性的植酸酶基因(LpPHY233),并在大肠杆菌中实现了高水平的异源表达,其表达水平是植物乳杆菌的800倍。基于理性设计的结果,通过二硫键工程显著提高了Lp PHY233的温度特性和催化性能。突变体Lp PHY233S58C/K61C的最适反应温度较Lp PHY233提高了15℃。此外,它还具有良好的pH特性和动力学参数,在食品加工和饲料添加剂领域具有较大的应用前景。该研究结果为植酸酶的进一步分子修饰和工业应用提供了坚实的理论基础。 展开更多

关键词 植酸酶 蛋白质工程 二硫键 植物乳杆菌 理性设计

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玉米非编码RNA Zm-1701在逆境胁迫下的表达研究

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作者 刘铁梅 刘宗才 +4 位作者 李丹丹 高美娟 张琨 阚云超 李春奇 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期137-141,共5页

分别用20%PEG6000,150 mmol·L-1NaCl,100μmol·L-1ABA对3叶期的玉米根进行胁迫处理,通过分析3种胁迫应答基因的表达情况确定胁迫的有效时间点,进一步研究玉米非编码RNAZm-1701在玉米受到干旱和盐胁迫处理时的表达情况.结果表... 分别用20%PEG6000,150 mmol·L-1NaCl,100μmol·L-1ABA对3叶期的玉米根进行胁迫处理,通过分析3种胁迫应答基因的表达情况确定胁迫的有效时间点,进一步研究玉米非编码RNAZm-1701在玉米受到干旱和盐胁迫处理时的表达情况.结果表明,玉米根在受到干旱和盐胁迫后,根中非编码RNAZm-1701的表达量都有上升的趋势,且Zm-1701对盐胁迫的反应灵敏程度高于干旱胁迫.表明该ncRNA可能参与到玉米的胁迫早期应答反应过程中. 展开更多

关键词 玉米 胁迫 非编码RNA

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豫西南猪主要病毒性传染病流行病学调查 被引量：9

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作者 鲍印 翟洪月 +7 位作者 李慧敏 袁志乔 马玉静 丁雨善 阚云超 姚伦广 田志军 冷超粮 《河南农业科学》 北大核心 2021年第1期152-157,共6页

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和247... 为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和2476份血液样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗原和抗体检测。结果表明,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的感染具有普遍性,病原平均阳性率分别达到了42.20%(192/455)、56.85%(328/577)、45.03%(136/302)和28.85%(73/253),且部分存在以PRRSV为主的混合感染。抗体检测结果显示,CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和PRV gB抗体的平均阳性率分别为78.37%(1841/2349)、75.93%(1565/2061)、84.62%(682/806)、33.12%(627/1893)和94.00%(1504/1600)。此外,CSFV、PCV2和PRV的病原检出率在2019年大幅下降。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 病毒性传染病 流行病学调查

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有翅和无翅豌豆蚜中翅型分化信号通路相关微小RNA及其靶基因的表达差异 被引量：6

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作者 杨宗霖 王艺 +4 位作者 马田田 霍春月 刘晓 阚云超 李丹丹 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1260-1270,共11页

【目的】前期研究发现麦长管蚜Sitobion avenae孤雌蚜有翅和无翅个体中存在很多差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA),本研究旨在进一步明确这些miRNA在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum中发挥作用的发育阶段,探索miRNA调控孤雌蚜翅两型性分化... 【目的】前期研究发现麦长管蚜Sitobion avenae孤雌蚜有翅和无翅个体中存在很多差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA),本研究旨在进一步明确这些miRNA在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum中发挥作用的发育阶段,探索miRNA调控孤雌蚜翅两型性分化的机制。【方法】选择在麦长管蚜有翅蚜和无翅蚜中显著差异表达,且靶基因为蜕皮激素、胰岛素信号通路及翅型发育关键基因的5个miRNA(Let-7,miR-92a,miR-92b,miR-92a-1-p5和miR-277),利用qPCR检测这些miRNA及其靶标基因在豌豆蚜3-4龄若蚜和成虫有翅和无翅个体中的表达谱;同时利用双荧光素酶活性检测法对上述miRNA的靶基因进行验证。【结果】表达谱分析发现,这5个miRNA在豌豆蚜成虫中表达量均高于其在若蚜中的表达量,而其预测的靶基因在4龄若蚜中的表达量均高于其在成虫中的表达量,表明miRNA对其靶基因的调控作用可能集中在成虫阶段。分析豌豆蚜有翅和无翅个体中5个miRNA的表达情况发现,在成虫有翅个体中5个miRNA的表达量均高于无翅个体中的,其中miR-277表达差异最显著,成虫有翅个体中的表达量是无翅个体中表达量的7.5倍;其次为Let-7,表达差异达3倍。而Let-7在3龄有翅若蚜和无翅若蚜中表达差异最显著,有翅个体中的表达量是无翅个体中的37.8倍;其次为miR-277,表达差异达7.6倍。比较5个miRNA与其靶基因在豌豆蚜3-4龄若蚜及成虫有翅和无翅个体中的表达发现,miRNA Let-7和miR-92b的表达趋势分别与其靶基因abrupt和Foxo的基本相反。荧光素酶活性检测结果显示,Let-7的真实靶标为abrupt,共转染Let-7模拟物后与对照相比,荧光素酶活性下降53%,达极显著水平。其他miRNA与靶标基因的互作不显著。【结论】首次发现miRNA对豌豆蚜孤雌蚜翅型分化相关基因的调控可能发生在成虫阶段。Let-7可能通过调控abrupt基因参与孤雌蚜翅型分化。该研究为进一步探索miRNA参与孤雌蚜翅两型性分化的机制奠定了基础。 展开更多

关键词 豌豆蚜 孤雌生殖 翅型分化 miRNA 靶基因 表达谱

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猪圆环病毒2型的分离鉴定及高免卵黄抗体的研制 被引量：5

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作者 丁雨善 翟洪月 +6 位作者 李明亮 鲍印 杨德全 李娜 姚伦广 阚云超 冷超粮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1256-1260,1274,共6页

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)特异性高免卵黄抗体(IgY),本研究首先对2017年~2018年河南部分地区规模化养猪场采集的19份疑似感染PCV2猪的病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行PCV2全基因组测序分析、病毒分离鉴定、制备灭活疫苗免疫蛋鸡并... 为制备猪圆环病毒2型(PCV2)特异性高免卵黄抗体(IgY),本研究首先对2017年~2018年河南部分地区规模化养猪场采集的19份疑似感染PCV2猪的病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行PCV2全基因组测序分析、病毒分离鉴定、制备灭活疫苗免疫蛋鸡并制备其IgY,对制备的IgY经中和试验检测其中和活性。比较氯仿法与水稀释-硫酸铵沉淀法制备的IgY的纯度差异。结果显示,河南省部分地区的PCV2阳性率为63.2%(12/19)。PCV2全基因组序列分析显示,12株PCV2之间的同源性为96.9%~100%,与其它PCV2代表株之间的同源性为95.1%~99.9%。遗传进化分析显示,8株PCV2属于PCV2d亚型,4株属于PCV2b亚型。病毒分离结果显示,7份阳性样品可以分离出病毒,其中一株病毒效价达106.5 TCID50/mL。用该株病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫蛋鸡能够诱导其产生较高水平的特异性IgY。中和试验结果显示,该IgY对PCV2具有较高的中和活性,中和效价达1:181。此外,通过比较氯仿法和水稀释-硫酸铵沉淀法制备IgY的效果显示,两种方法均较为理想,但前者获得的样品纯度更高。本研究为进一步开展IgY抗PCV2研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 病毒分离 高免卵黄抗体 制备方法

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