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Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究
被引量：
2
1
作者
周磊
李东旭
+3 位作者
冒魏佳
刘孜斐
高雪
万永杰
《南京农业大学学报》
北大核心
2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可...
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。
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关键词
基因编辑
CRISPR/Cas9
先导编辑(PE)
MSTN
湖羊
骨骼肌卫星细胞
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职称材料
题名
Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究
被引量：
2
1
作者
周磊
李东旭
冒魏佳
刘孜斐
高雪
万永杰
机构
南京
农业
大学动物科技学院
南通市启东市农业技术推广中心
出处
《南京农业大学学报》
北大核心
2025年第2期419-426,共8页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFF1000702)
江苏现代农业产业技术体系建设专项(JATS[2023]156)。
文摘
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。
关键词
基因编辑
CRISPR/Cas9
先导编辑(PE)
MSTN
湖羊
骨骼肌卫星细胞
Keywords
gene editing
CRISPR/Cas9
prime editor(PE)
MSTN
Hu sheep
skeletal muscle satellite cells
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究
周磊
李东旭
冒魏佳
刘孜斐
高雪
万永杰
《南京农业大学学报》
北大核心
2025
2
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