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小鼠上皮细胞培养及其在EOB研究中的应用
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作者 卢泽艳 邵义祥 《安徽农业科学》 CAS 2012年第23期11684-11687,共4页
小鼠眼睑发育需要表皮角质形成细胞的增殖、分化、凋亡及迁移的协调作用。表皮角质形成细胞是研究眼睑闭合不全机制重要的细胞模型。表皮角质形成细胞培养时,贴壁差,增殖力低,生活力弱,生长条件要求高,传代次数有限。对近年来表皮角质... 小鼠眼睑发育需要表皮角质形成细胞的增殖、分化、凋亡及迁移的协调作用。表皮角质形成细胞是研究眼睑闭合不全机制重要的细胞模型。表皮角质形成细胞培养时,贴壁差,增殖力低,生活力弱,生长条件要求高,传代次数有限。对近年来表皮角质形成细胞的体外培养方法及其在遗传性眼睑闭合不全研究中的应用进行综述,以期为表皮角质形成细胞的长期培养和研究人类先天性眼睑发育缺陷机制提供参考。 展开更多
关键词 皮肤角质形成细胞 体外培养 眼睑闭合不全
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角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析 被引量:4
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作者 吴刘成 刘春 +2 位作者 蒋荧梅 王生存 邵义祥 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期1-5,共5页
对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增... 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。 展开更多
关键词 B6-Co突变系小鼠 Map3k1基因 PCR扩增 序列分析
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TGFα/EGFR通路相关蛋白在B6-Co小鼠眼睑中的表达 被引量:2
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作者 缪进 李瑶 +2 位作者 刘春 宋鸿雁 邵义祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第1期28-31,共4页
目的研究转化生长因子α(transforming growth factorα,TGFα)/表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路相关蛋白在B6-Co胎鼠眼睑中的表达情况,探讨B6-Co小鼠眼睑发育异常的原因。方法取胚胎16.5 d、17.5 d、18.... 目的研究转化生长因子α(transforming growth factorα,TGFα)/表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路相关蛋白在B6-Co胎鼠眼睑中的表达情况,探讨B6-Co小鼠眼睑发育异常的原因。方法取胚胎16.5 d、17.5 d、18.5 d的B6和B6-Co胎鼠头部,做冰冻切片,通过免疫荧光法检测各时间点TGFα在眼睑部位的原位表达情况;提取蛋白,采用Western blot法检测TGFα表达及EGFR、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化蛋白表达情况。结果免疫荧光检测结果示,TGF氉α主要表达于眼睑间质区,3个时间点B6-Co胎鼠眼睑中TGFα表达的荧光强度均高于同一时间点在B6胎鼠眼睑中的表达。Western blot检测结果示,3个时间点B6-Co胎鼠眼睑中TGFα、p-EGFR的表达与B6胎鼠相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。p-ERK在胚胎16.5 d和17.5 d时,B6-Co胎鼠眼睑中的表达量分别为3.79±0.32和3.77±0.16,均显著高于在相应时间点B6胎鼠眼睑中的表达量1.48±0.11和1.45±0.07,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 TGFα/EGFR通路的下游因子ERK可能是导致B6-Co小鼠眼睑异常发育的重要因子。 展开更多
关键词 B6-Co小鼠 眼睑 转化生长因子Α 表皮生长因子受体 细胞外调节蛋白激酶
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应用16S rDNA克隆文库法分析B6-Co小鼠角膜炎细菌组成 被引量:1
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作者 宋鸿雁 仇保丰 +6 位作者 刘春 朱顺星 缪进 王生存 吴刘成 王旭 邵义祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第12期1124-1127,共4页
目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析... 目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析B6-Co小鼠角膜细菌组成,B6小鼠作为对照。结果 B6-Co角膜混浊小鼠中共鉴定出20种细菌,隶属于15个属,包括葡萄球菌属、假单胞菌属、链球菌属、微球菌属、棒状杆菌属等。葡萄球菌属和假单胞菌属为优势群,葡萄球菌属丰度为19.7%~53.1%,假单胞菌属的丰度为17.4%~32.8%。其中葡萄球菌属主要是表皮葡萄球菌,丰度为13.8%~20.9%;缓慢葡萄球菌,丰度为14.0%~30.9%;金黄色葡萄球菌,丰度为7.4%~20.3%。此外,棒状杆菌和微球菌也比较常见。10 d龄B6小鼠未检测出细菌。结论 B6-Co突变系小鼠角膜细菌组成与人类角膜炎病原菌相似,是研究人类角膜炎诊断方法、发病机理及临床用药的很好的动物模型。 展开更多
关键词 细菌性角膜炎 16S r DNA克隆文库 细菌组成 B6-Co小鼠
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B6-Co突变系小鼠眼睑组织差异表达蛋白筛选 被引量:1
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作者 侯小凡 宋鸿雁 +2 位作者 杨纤纤 宋添铖 邵义祥 《动物医学进展》 北大核心 2018年第5期69-72,共4页
为从蛋白质水平上探讨B6-Co突变系小鼠眼睑发育缺陷的发生机制,利用蛋白质组学技术分析B6-Co突变系小鼠和B6小鼠眼睑组织蛋白质组,以寻找B6-Co突变系小鼠眼睑组织的差异表达蛋白。取胚胎期16.5dB6-Co小鼠与B6小鼠眼睑组织,提取眼睑组织... 为从蛋白质水平上探讨B6-Co突变系小鼠眼睑发育缺陷的发生机制,利用蛋白质组学技术分析B6-Co突变系小鼠和B6小鼠眼睑组织蛋白质组,以寻找B6-Co突变系小鼠眼睑组织的差异表达蛋白。取胚胎期16.5dB6-Co小鼠与B6小鼠眼睑组织,提取眼睑组织总蛋白,通过双向凝胶电泳技术检测,共筛选出29个差异蛋白点,其中7个蛋白点表达上调,22个蛋白点表达下调;再利用质谱分析结合数据库检索,共鉴定出6个表达上调蛋白,18个表达下调蛋白。研究结果表明,B6-Co小鼠胚胎期差异蛋白表达与该突变系小鼠的眼睑发育缺陷密切相关,但其相关机制有待深入研究。 展开更多
关键词 眼睑 双向凝胶电泳 差异蛋白 质谱
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