神经再生素激活PC12细胞ERK1/2的实验研究 被引量：7

1

作者 强亮 顾星星 丁斐 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期369-372,共4页

本实验初步探讨了神经再生素 ( NRF)作用于 PC12细胞的信号传导途径。采用 MTT法检测 NRF对无血清培养的PC12细胞存活率的影响 ;用磷酸化的 Elk单克隆抗体 ,通过 Western blot法观察 NRF的不同浓度 ( 10、10 0、10 0 0 ng/ m l)及不同... 本实验初步探讨了神经再生素 ( NRF)作用于 PC12细胞的信号传导途径。采用 MTT法检测 NRF对无血清培养的PC12细胞存活率的影响 ;用磷酸化的 Elk单克隆抗体 ,通过 Western blot法观察 NRF的不同浓度 ( 10、10 0、10 0 0 ng/ m l)及不同作用时间 ( 0 min、15 min、3 0 min、1h、2 h)对无血清培养的 PC12细胞 ERK1/ 2活性的影响 ;还运用 MEK1/ 2阻断剂 U0 12 6,观察NRF激活 ERK1/ 2是否需要其上游信号蛋白 MEK1/ 2的激活。结果表明 ,NRF作用于无血清培养的 PC12细胞 ,可以激活ERK1/ 2 ,存在明显的剂量效应关系和时间依赖作用 ,在 10 0 0 ng/ ml浓度下最大 ,作用 2 h时达峰值 ;U0 12 6作用后 ,可抑制 NRF作用于 PC12细胞引起的 ERK1/ 2的激活。由此可见 ,NRF对无血清培养的 PC12细胞具有保护作用 ,可能通过激活 ERK1/ 2磷酸化级联途径来介导这些作用。 展开更多

关键词 神经再生素 ERKl/2 U0126 PCI2细胞 信号传导途径 细胞培养

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神经再生素对皮层细胞基因表达影响的基因芯片研究 被引量：8

2

作者 丁斐 顾星星 +1 位作者 王东 顾晓松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期78-80,共3页

目的 :采用基因芯片技术 ,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响。方法 :取ICR胚鼠 (15d)大脑皮层细胞 ,无血清培养。实验组加入神经再生素 (2 μg/ml) ,对照组加入等量基础培养液。培养 6h后 ,抽提实验组和对照... 目的 :采用基因芯片技术 ,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响。方法 :取ICR胚鼠 (15d)大脑皮层细胞 ,无血清培养。实验组加入神经再生素 (2 μg/ml) ,对照组加入等量基础培养液。培养 6h后 ,抽提实验组和对照组皮层细胞总RNA ,经反转录分别用Cy5、Cy3荧光标记成cDNA探针。将荧光标记的cDNA与MGEC 40s基因表达谱芯片杂交 ,芯片扫描、数据处理。结果 :实验组和对照组大脑皮层细胞出现 64条差异性表达的基因。呈现上调的基因有 :钙调素结合蛋白、锌指蛋白激酶、核糖体蛋白等基因 ;下调基因有 :抑制细胞分裂因子等基因。结论 :神经再生素可作用于体外培养的胚鼠大脑皮层细胞 。 展开更多

关键词 神经再生素 皮层细胞 基因表达 基因芯片 研究

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神经再生素对PC12细胞Caspases-3的影响 被引量：6

3

作者 柯开富 张琦 丁斐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期474-477,共4页

目的 :探讨神经再生素抑制PC12细胞凋亡的作用机制。方法 :采用流式细胞仪和RT PCR ,观察神经再生素对无血清状态下PC12细胞Caspases 3活力及Bax、Caspases 3mRNA的影响。结果 :与对照组相比 ,神经再生素可抑制无血清培养的PC12细胞Casp... 目的 :探讨神经再生素抑制PC12细胞凋亡的作用机制。方法 :采用流式细胞仪和RT PCR ,观察神经再生素对无血清状态下PC12细胞Caspases 3活力及Bax、Caspases 3mRNA的影响。结果 :与对照组相比 ,神经再生素可抑制无血清培养的PC12细胞Caspases 3活力 ,并可使Bax、Caspases 3mRNA的表达减少。结论 :神经再生素可以通过抑制Caspases 3基因表达和活化 。 展开更多

关键词 神经再生素 PC12细胞 凋亡 Caspases-3

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大鼠坐骨神经缺损半个月后人工组织神经移植物修复的实验研究 被引量：1

4

作者 林巍巍 姚健 +3 位作者 施伟 焦海山 李奕 王晓冬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期467-472,共6页

为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用。我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型。15d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为... 为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用。我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型。15d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为阴性对照(6只)。第二次手术后3个月,电生理学、形态学结果显示实验组的再生神经虽略差于自体对照组,但明显优于缺损对照组,腓肠肌的萎缩形态学指标变化则较接近自体对照组。实验结果表明人工组织神经移植物对已缺损15d的大鼠周围神经具有较好修复作用。 展开更多

关键词 坐骨神经 人工组织神经移植物 非新鲜损伤 神经再生 大鼠

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神经生长液对兔周围神经损伤的修复作用研究 被引量：7

5

作者 张俊芳 周鸣鸣 +1 位作者 刘梅 丁斐 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期83-86,共4页

目的:研究神经生长液(nerve growth decoction,NGD)促进兔周围神经损伤的修复作用。方法:大耳白兔40只,雌雄各半,行腓总神经夹伤术。实验分为五组:NGD低、中、高剂量组,弥可保组(阳性对照),空白对照组。口服给药四周后行电生理、组织学... 目的:研究神经生长液(nerve growth decoction,NGD)促进兔周围神经损伤的修复作用。方法:大耳白兔40只,雌雄各半,行腓总神经夹伤术。实验分为五组:NGD低、中、高剂量组,弥可保组(阳性对照),空白对照组。口服给药四周后行电生理、组织学检测和超微结构观察。结果:NGD高、中剂量组和弥可保组在腓总神经传导速度恢复率,脊髓前角运动神经元的存活率及再生髓鞘计数均明显好于空白对照组(P<0.01)。超微结构观察给药组有髓神经纤维的髓鞘形态、厚度、成熟度均优于对照组,变性纤维的数目少于对照组。结论:神经生长液能促进损伤周围神经的再生和功能的恢复。 展开更多

关键词 神经生长液/药理学 神经再生/中药疗法 周围神经损伤 兔 弥可保

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大鼠发育过程中脊髓组织CAPON与Dexras1 mRNA表达的实验研究 被引量：2

6

作者 李欣 程纯 +4 位作者 赵剑 陈梦玲 牛淑琼 高尚峰 沈爱国 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期349-354,共6页

为探讨大鼠发育过程中神经型一氧化氮合酶羧基末端PSD-95/DLG/ZO-1（PDZ）结合配体（carboxy-terminal PDZ ligandof nNOS,CAPON）与Dexras1 mRNA的表达及二者的相关性,本实验采用大鼠发育模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtim... 为探讨大鼠发育过程中神经型一氧化氮合酶羧基末端PSD-95/DLG/ZO-1（PDZ）结合配体（carboxy-terminal PDZ ligandof nNOS,CAPON）与Dexras1 mRNA的表达及二者的相关性,本实验采用大鼠发育模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime-PCR）及原位杂交组织化学（ISH）与免疫组织化学相结合的技术检测脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA的表达变化。结果表明：在胚胎14~18d的脊髓组织中,CAPON mRNA呈低水平表达,生后1d表达升高并达到高峰。从形态上看,表达于尚未分化成熟的前角,随后呈逐渐下降趋势。在生后12w,表达于脊髓后角。而Dexras1 mRNA在胚胎14d呈低水平表达,16~18d时表达升高,同样在生后1d出现表达高峰并定位于尚未分化成熟的前角,随后表达逐渐下降。生后12w,在后角有表达。根据Real-time PCR结果作直线相关分析,在生后脊髓发育过程中CAPON与Dexras1 mRNA表达呈高度相关,于生后1d共定位于脊髓前角。形态学结果显示CAPON与神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达于相同细胞,但亚细胞定位不同。本研究表明,大鼠发育过程中,脊髓组织中CAPON及Dexras1 mRNA存在共表达,提示CAPON可能通过调节nNOS,进而激活Dexras1,在神经元的分化、突触的可塑性及突触发生过程中发挥一定的作用。 展开更多

关键词 神经型一氧化氮合酶 羧基末端PDZ结合配体 Dexras1 发育 实时荧光定量PCR 原位杂交 脊髓

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生长相关蛋白及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达 被引量：3

7

作者 丁斐 崔学芝 顾晓松 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期211-214,共4页

为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白 (GAP-4 3 )及其 m RNA的表达 ,采用正常 SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型 ,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织 ,以 Western Blot和 RT-PCR法检测 GAP-4 3及其 m RNA的表达。RT-PCR... 为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白 (GAP-4 3 )及其 m RNA的表达 ,采用正常 SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型 ,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织 ,以 Western Blot和 RT-PCR法检测 GAP-4 3及其 m RNA的表达。RT-PCR法检测结果显示 ,正常大鼠坐骨神经组织中 GAP-4 3 m RNA表达量较低 ,而损伤坐骨神经的远侧段 GAP-4 3 m RNA的表达量明显增加 ,于损伤第 2周时达高峰。用抗 GAP-4 3抗体进行 Western Blot检测 ,结果表明 ,正常坐骨神经 43 k Da处出现弱阳性反应的蛋白区带 ,而损伤后坐骨神经远侧段 43 k Da处阳性反应条带着色明显加深 ,损伤后第 3周时阳性反应着色最强。本研究结果提示 ,GAP-4 3及其 m RNA在大鼠损伤坐骨神经远侧段组织中表达增强 ,其 m RNA表达上调高峰在神经损伤后的第 2周 ;而其蛋白合成增加最为明显的时间是在神经损伤后的第 3周。 展开更多

关键词 生长相关蛋白 MRNA 大鼠 表达 坐骨神经损伤

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N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化 被引量：1

8

作者 沈爱国 严美娟 +3 位作者 龚蕾蕾 关晓颖 程纯 顾建新 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期220-224,共5页

为了分析与 N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶 - 、 、 (β-1,4-galactosyltransferase , , ,β-1,4-Gal T- , , ) m RNA在正常和损伤坐骨神经组织的表达变化。本研究采用 RT-PCR方法 ,分析 β-1,4-Gal T- 、 、 在小鼠坐骨神经中... 为了分析与 N-糖链合成相关β-1,4-半乳糖基转移酶 - 、 、 (β-1,4-galactosyltransferase , , ,β-1,4-Gal T- , , ) m RNA在正常和损伤坐骨神经组织的表达变化。本研究采用 RT-PCR方法 ,分析 β-1,4-Gal T- 、 、 在小鼠坐骨神经中的表达存在。以扩增的 c DNA片断标记探针 ,Northern blot分析β-1,4-Gal T- 、 、 m RNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的表达变化。结果表明 :通过 RT-PCR方法 ,检测到 β-1,4-Gal T- 、 、 在小鼠坐骨神经中的表达存在 ;采用 Northern blot方法 ,发现β-1,4-Gal T- 、 、 在正常大鼠坐骨神经中有表达 ,并在坐骨神经损伤后发生表达变化 ,但三种同功酶的表达变化各不相同。结论 :本实验发现 β-1,4-Gal T- 、 、 在坐骨神经有表达 ,并在坐骨神经损伤后发生表达变化。提示与 展开更多

关键词 大鼠 坐骨神经 RT-PCR Β-1 4-半乳糖基转移酶 表达 蛋白修饰

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β-1,4-半乳糖苷键在周围神经损伤后的表达变化

9

作者 沈爱国 周鸣鸣 +3 位作者 丁斐 顾晓松 王汉洲 顾建新 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期272-276,共5页

为了探讨正常和损伤的周围神经中β-1,4-半乳糖苷键的表达定位和表达变化 ,本研究用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素 -I免疫组织化学方法结合 S-10 0和 neurofilam ent免疫双标记 ,研究了大鼠坐骨神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键... 为了探讨正常和损伤的周围神经中β-1,4-半乳糖苷键的表达定位和表达变化 ,本研究用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素 -I免疫组织化学方法结合 S-10 0和 neurofilam ent免疫双标记 ,研究了大鼠坐骨神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的合成影响。结果表明 ,β-1,4-半乳糖苷键主要分布在正常和损伤坐骨神经的 Schwann细胞中 ,图像分析表明β-1,4-半乳糖苷键的表达在周围神经损伤后 1～ 2 d内有所增高 ,以后随时间延长表达量逐步下降。本研究结果提示 ,周围神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的表达有影响 ,Schwann细胞表达的β-1。 展开更多

关键词 β—1 4-半乳糖苷键 周围神经损伤 表达变化 蓖麻凝集素-1

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大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析

10

作者 姚登兵 顾晓松 +1 位作者 丁斐 王云丹 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期282-285,共4页

目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activatedSepharose4B交联,用亲和层析的方法,提取PNP-43,并将提取的PNP-4... 目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activatedSepharose4B交联,用亲和层析的方法,提取PNP-43,并将提取的PNP-43进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦凝胶电泳(IEF)分析,考马斯亮蓝染色,取SDS-PAGE后染色的43kDa蛋白区带胶条,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱检测(MALDI-TOF-MS),测定肽质量指纹图谱,在相应的蛋白质谱数据库(MS-Fit)中检索。结果:⑴、经层析系统紫外检测,亲和层析后洗脱,在280nm波长处显示一个的紫外吸收峰。⑵、亲和层析获得的蛋白,经SDS-PAGE分析,在43.0kDa标准蛋白位置出现单一蛋白条带。⑶、经IEF分析,PNP-43的等电点(pI)为5.8。⑷、经MALDI-TOF-MS检测,测定肽质量指纹图谱,通过MS-Fit检索未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。结论:用亲和层析的方法,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的PNP-43,通过质谱分析和MS-Fit检索提示未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。为进一步深入研究PNP-43的结构与功能提供了科学依据。 展开更多

关键词 损伤坐骨神经 43kDa蛋白 亲和层析 MALDI-TOF-MS 大鼠

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胚胎大鼠海马神经干细胞分离培养和分化 被引量：2

11

作者 吴星 张沛云 +1 位作者 罗莉 徐昌芬 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期109-111,F003,共4页

目的:研究胎鼠脑海马组织去掉的神经干细胞的分离、培养、增殖及分化特点。方法:采用无血清培养、单细胞克隆技术及免疫细胞化学方法,观察海马源性神经干细胞的体外扩增和贴壁分化情况。结果:从大鼠胚胎脑海马分离的细胞具有增殖能力,... 目的:研究胎鼠脑海马组织去掉的神经干细胞的分离、培养、增殖及分化特点。方法:采用无血清培养、单细胞克隆技术及免疫细胞化学方法,观察海马源性神经干细胞的体外扩增和贴壁分化情况。结果:从大鼠胚胎脑海马分离的细胞具有增殖能力,可以传代培养,子代细胞免疫组化显示神经巢蛋白(nestin)阳性。经含血清培养基培养,贴壁可分化为微管相关蛋白-2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞。结论:用本方法分离培养的细胞具有自我复制和多向分化的能力,是中枢神经系统的干细胞。 展开更多

关键词 神经干细胞 海马 免疫细胞化学 细胞分化

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地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用 被引量：1

12

作者 沈爱国 龚蕾蕾 +3 位作者 丁斐 严美娟 王汉洲 顾建新 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期365-368,共4页

为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- ... 为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。 展开更多

关键词 地高辛标记 小鼠 β—1 4—半乳糖基转移酶I RNA探针 RNA原位杂交探针 RT—PCR

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β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究

13

作者 沈爱国 何江虹 +3 位作者 丁斐 朱敏 王汉洲 顾建新 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期277-282,共6页

为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1... 为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在 展开更多

关键词 Β-1 4-半乳糖基转移酶 表达 亚细胞结构 定位 肝癌细胞

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Myostatin:TGF-β超家族的新成员 被引量：1

14

作者 张冬雷 丁斐 +1 位作者 刘梅 顾晓松 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期99-102,共4页

关键词 TGF-Β 转化生长因子Β TGF-Β超家族 基因 序列 信号传导

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地高辛标记的大鼠NGF RNA探针的制备和应用

15

作者 沈宓 丁斐 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期435-438,共4页

制备用地高辛标记的神经生长因子(NGF)的RNA探针并用其研究NGF在海马组织中的表达。设计NGF引物,构建NGF/pGEMT重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针... 制备用地高辛标记的神经生长因子(NGF)的RNA探针并用其研究NGF在海马组织中的表达。设计NGF引物,构建NGF/pGEMT重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针。运用点膜杂交的方法检测探针的敏感度;运用该探针的原位杂交法分析NGF在海马中的表达。本研究成功地构建了NGF/pGEMT质粒,获得了正、反义digNGFRNA探针,并应用该探针在海马中观察到NGFmRNA的表达。本研究的结果为深入探讨NGF在海马发育和损伤过程中的表达奠定了基础。 展开更多

关键词 地高辛标记 大鼠 RNA探针 制备 神经生长因子 海马 原位分子杂交

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