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人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
1
作者
王艳
陈庆状
+4 位作者
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015年第3期264-268,共5页
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试...
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
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关键词
热休克蛋白75
重组腺病毒载体
C17.2神经干细胞
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职称材料
抑制线粒体通透性转换孔的开放削弱淀粉样β蛋白介导的炎症对神经干细胞的凋亡作用
被引量：
4
2
作者
陈庆状
朱宁
+3 位作者
林继宗
王艳
王克万
王勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014年第9期1380-1384,共5页
目的:探讨抑制线粒体通透性转换孔的开放对神经干细胞的保护作用。方法:实验设有对照组、条件培养液对照组、Aβ1-42作用组和CsA预处理组。液相芯片技术检测炎性因子的表达,流式细胞术检测神经干细胞的凋亡率,Western blot检测神经干细...
目的:探讨抑制线粒体通透性转换孔的开放对神经干细胞的保护作用。方法:实验设有对照组、条件培养液对照组、Aβ1-42作用组和CsA预处理组。液相芯片技术检测炎性因子的表达,流式细胞术检测神经干细胞的凋亡率,Western blot检测神经干细胞活性caspase-3蛋白的表达。结果:Aβ1-42作用小胶质细胞96 h后,IL-6和TNF-α分别为对照组的7.92和1.22倍。在炎性介质的作用下,神经干细胞凋亡率达到41.17%,与对照组比较差异有显著性(P<0.001),而抑制线粒体通透性转换孔开放后,凋亡率明显降低,同时caspase-3的激活也显著性被抑制。结论:抑制线粒体通透性转换孔的开放可显著性降低神经干细胞的凋亡率,极大地削弱了炎症对神经干细胞造成的凋亡效应,提示抑制线粒体通透性转换孔的开放对神经干细胞具有保护作用。
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关键词
淀粉样Β蛋白
线粒体通透性转换孔
小胶质细胞
神经干细胞
炎性反应
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职称材料
题名
人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
1
作者
王艳
陈庆状
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
机构
南方医
科
大学珠江
医院
药剂
科
广州市中西医结合
医院
药剂
科
南方医
科
大学珠江
医院
烧伤
科
南海区第三人民医院药剂科
出处
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015年第3期264-268,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.30973162)
广东省自然科学基金项目(No.S2012010008199
No.S2013010015546)
文摘
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
关键词
热休克蛋白75
重组腺病毒载体
C17.2神经干细胞
Keywords
heat shock protein 75
recombinant adenovirus vector
C17.2 neural stem cells
分类号
R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
抑制线粒体通透性转换孔的开放削弱淀粉样β蛋白介导的炎症对神经干细胞的凋亡作用
被引量：
4
2
作者
陈庆状
朱宁
林继宗
王艳
王克万
王勇
机构
南方医
科
大学珠江
医院
药剂
科
广东省佛山市
南海区第三人民医院药剂科
中山大学
第三
附属
医院
肝胆外
科
南方医
科
大学南方
医院
神经外
科
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014年第9期1380-1384,共5页
基金
广东省自然科学基金资助项目(编号:S2012010008199
S2013010015546)
文摘
目的:探讨抑制线粒体通透性转换孔的开放对神经干细胞的保护作用。方法:实验设有对照组、条件培养液对照组、Aβ1-42作用组和CsA预处理组。液相芯片技术检测炎性因子的表达,流式细胞术检测神经干细胞的凋亡率,Western blot检测神经干细胞活性caspase-3蛋白的表达。结果:Aβ1-42作用小胶质细胞96 h后,IL-6和TNF-α分别为对照组的7.92和1.22倍。在炎性介质的作用下,神经干细胞凋亡率达到41.17%,与对照组比较差异有显著性(P<0.001),而抑制线粒体通透性转换孔开放后,凋亡率明显降低,同时caspase-3的激活也显著性被抑制。结论:抑制线粒体通透性转换孔的开放可显著性降低神经干细胞的凋亡率,极大地削弱了炎症对神经干细胞造成的凋亡效应,提示抑制线粒体通透性转换孔的开放对神经干细胞具有保护作用。
关键词
淀粉样Β蛋白
线粒体通透性转换孔
小胶质细胞
神经干细胞
炎性反应
Keywords
Amyloid beta-protein
Mitochondrial permeability transition pore
Microglia
Neuralstem cells
Inflammatory response
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
王艳
陈庆状
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抑制线粒体通透性转换孔的开放削弱淀粉样β蛋白介导的炎症对神经干细胞的凋亡作用
陈庆状
朱宁
林继宗
王艳
王克万
王勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014
4
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