实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量：20

1

作者 王瑾 林丽萍 +1 位作者 郜彦彦 吴国平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第24期170-174,共5页

根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加... 根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加时间(Tp值)具有良好正相关线性关系,R2为0.985 1。通过模拟沙门氏菌人工污染25 g鸡肉样品,经37℃保温4 h,提取样品制备DNA模板用于实时荧光定量环介导等温扩增检测,结果表明灵敏度达450 CFU/g,共需时约7 h。随机从市场购买冷冻鸡肉样品21份,采用国标沙门氏菌检测方法和鸡肉样品实时荧光定量环介导等温扩增检测进行对比检测,结果两种方法均检测出同一份样品为沙门氏菌阳性,其余20份样品均为沙门氏菌阴性,表明本研究建立的鸡肉沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测,其灵敏性和准确性与国标检测方法相当,但检测时间可缩短至7 h。 展开更多

关键词 沙门氏菌 鸡肉 实时荧光定量环介导等温扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

青钱柳多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响 被引量：7

2

作者 刘姚 傅凌韵 +2 位作者 叶振南 李楠 王文君 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第23期291-295,共5页

为探讨青钱柳多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响。以青钱柳多糖为研究对象,通过D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子树脂分离纯化,得到青钱柳多糖组分(CPC),采用凝胶渗透色谱(GPC)和多角度极光散射(MALLS)法分析其分子质量;采用... 为探讨青钱柳多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响。以青钱柳多糖为研究对象,通过D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子树脂分离纯化,得到青钱柳多糖组分(CPC),采用凝胶渗透色谱(GPC)和多角度极光散射(MALLS)法分析其分子质量;采用不同质量浓度的多糖作用于3T3-L1脂肪细胞,采用MTT法和油红O染色检测多糖对脂肪细胞增殖分化的影响,同时测定细胞葡萄糖的消耗和细胞外甘油含量。结果表明:CPC含有3个组分,其黏均分子质量(Mη)分别为50300、3951g/mol和1406g/mol;在一定的质量浓度范围内,CPC对前脂肪细胞的生长表现为增殖趋势,且呈现一定的量效关系;与对照组相比,青钱柳多糖能够降低3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗,降低3T3-L1脂肪细胞细胞外甘油含量,其抑制率分别高达9.61%和30.8%。提示青钱柳多糖在一定质量浓度范围能够促进脂肪细胞的增殖,降低葡萄糖的消耗和细胞外甘油含量。 展开更多

关键词 青钱柳多糖 3T3-L1脂肪细胞 黏均分子质量(Mη) 增殖 分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法 被引量：6

3

作者 杨武英 王弘 +6 位作者 洪艳平 王丹 徐振林 沈玉栋 柯法钧 陈薪竹 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期251-258,共8页

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链... 从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。 展开更多

关键词 呋喃它酮 呋喃它酮代谢物 单链抗体 间接竞争酶联免疫分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

金银花不同部位营养成分分析 被引量：10

4

作者 李冬梅 夏日耀 +3 位作者 杜莲朵 李文钻 罗秋水 熊建华 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第18期190-194,共5页

为分析金银花植物的营养特性,采摘金银花植物的花蕾、叶片、嫩茎和籽为原料,参照相关国家标准方法测定并比较其常量营养素、活性成分、矿物质、氨基酸含量。结果表明,金银花各部位均含有丰富的营养,并各有特色,花蕾含有最高的粗蛋白、... 为分析金银花植物的营养特性,采摘金银花植物的花蕾、叶片、嫩茎和籽为原料,参照相关国家标准方法测定并比较其常量营养素、活性成分、矿物质、氨基酸含量。结果表明,金银花各部位均含有丰富的营养,并各有特色,花蕾含有最高的粗蛋白、粗多糖、绿原酸、异绿原酸A、铁、钾、磷、必需氨基酸和总氨基酸含量,次高的灰分、粗脂肪、VC、钠、铜含量,4部位中营养最为丰富;叶片中含有最高的灰分、木犀草苷、VC、黄酮、锌、铜、钙、锰、镁含量,次高的粗蛋白、绿原酸、异绿原酸A、多酚、铁、钾、必需氨基酸和总氨基酸含量,营养不逊色于花蕾;茎和籽的营养成分稍低,但茎含有最高的钠、次高的黄酮、锌、锰,并且绿原酸和木犀草苷的量达到国家药典对金银花的含量标准,籽含有丰富的粗脂肪,可作为野生植物油料。 展开更多

关键词 金银花 不同部位 营养成分 活性成分 分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

采后赣南脐橙热水处理的保鲜效果 被引量：4

5

作者 林丽萍 叶明娥 +2 位作者 陈于陇 张凤英 吴国平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期252-256,265,共6页

为研究热水处理技术在柑橘类水果采后保鲜中的应用可行性。试验以江西省赣南脐橙为试材,设计2因素(温度和时间)5水平均匀试验,分别考查热水处理后赣南脐橙贮藏品质相关指标(呼吸速率、可溶性固形物含量和硬度)和贮藏发霉情况,并研究了... 为研究热水处理技术在柑橘类水果采后保鲜中的应用可行性。试验以江西省赣南脐橙为试材,设计2因素(温度和时间)5水平均匀试验,分别考查热水处理后赣南脐橙贮藏品质相关指标(呼吸速率、可溶性固形物含量和硬度)和贮藏发霉情况,并研究了热水处理对赣南脐橙青、绿霉病原菌(意大利青霉和指状青霉)孢子的致死作用机制。综合分析,得出赣南脐橙热水处理较优条件为:50℃,5 min。该条件处理后的赣南脐橙呼吸速率最低,为42.89 mg CO_2/(kg·h)。25℃温箱保藏20 d,该处理组赣南脐橙均未发病,优于对照组。加赣南脐橙皮到病原菌孢子悬液中进行热水处理,病原菌孢子死亡率检测及Hoechst 33342/PI荧光双染色结果显示,赣南脐橙皮成分与热对病原菌有协同抑杀作用,病原菌孢子细胞膜受到损伤。50℃,5 min热水处理应用于赣南脐橙采后保鲜具有可行性。 展开更多

关键词 赣南脐橙 热水处理 保鲜效果 病原菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

一株临床2型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析 被引量：13

6

作者 付梦玉 林丽萍 +2 位作者 郭道初 张凤英 吴国平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期1897-1904,共8页

为了确定2013年9月至2013年11月江西省某规模猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,本试验将病猪剖杀,采取脑脊液和关节液在血平板上划线进行细菌分离培养,将分离到的菌株进行生化试验、16SrDNA序列分析及基因血清分型鉴定,... 为了确定2013年9月至2013年11月江西省某规模猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,本试验将病猪剖杀,采取脑脊液和关节液在血平板上划线进行细菌分离培养,将分离到的菌株进行生化试验、16SrDNA序列分析及基因血清分型鉴定,进一步对其进行毒力基因(gdh、orf2、fbps、sly、epf、mrp)检测和药敏性测定。结果显示,分离菌株在血平板上形成灰色"半透明"边缘整齐的有草绿色狭窄溶血环的光滑型圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、16SrDNA序列分析及基因血清型分型,确定其病原为2型猪链球菌,命名为JMS2。毒力因子基因检测结果显示,JMS2主要毒力因子分布为gdh+/orf2+/fbps+/sly-/epf-/mrp-,预示JMS2可能不是强毒力菌株。药敏试验结果显示,JMS2对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、复方新诺明等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。本研究对临床防控猪链球菌病具有参考意义。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 分离鉴定 毒力因子基因 药敏试验

在线阅读 下载PDF 职称材料

GC-FID法同时测定腌制鱼干中9种N-亚硝胺类化合物 被引量：14

7

作者 夏日耀 梁棋 +4 位作者 杜莲朵 张建军 罗秋水 杜娟 熊建华 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期213-218,223,共7页

在气相色谱-氢火焰检测器的基础上建立了同时测定腌制鱼干中9种N-亚硝胺类化合物的方法。采用碱液加热处理结合二氯甲烷萃取的方法提取腌制鱼干的N-亚硝胺,经棷壳活性炭净化,C18固相萃取(SPE,Solid Phase extraction)小柱富集,样液用DB-... 在气相色谱-氢火焰检测器的基础上建立了同时测定腌制鱼干中9种N-亚硝胺类化合物的方法。采用碱液加热处理结合二氯甲烷萃取的方法提取腌制鱼干的N-亚硝胺,经棷壳活性炭净化,C18固相萃取(SPE,Solid Phase extraction)小柱富集,样液用DB-WAXETR极性柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)进行色谱分离,柱温采用程序升温。结果显示:该方法下的9种N-亚硝胺类化合物在0.05~5μg/mL浓度范围内线性良好(R2>0.999);检出限和定量限范围分别为0.05~0.29μg/mL和0.18~0.95μg/mL;回收率和RSD分别为76.8%~129.5%和2.29%~15.5%。对市售的50种腌制鱼干进行检测,N-亚硝基二乙胺(NDEA,N-nitrosodiethylamine)、N-亚硝基哌啶(NDIP,N-Nitrosopiperidine)N-亚硝基吡咯烷(NPYR,N-Nitrosopyrrolidine)检出率分别达到20%、20%、24%,只有一种样品的N-亚硝基二甲胺(NDMA,N-nitrosodimethylamine)超过国标限量规定(4μg/kg)。 展开更多

关键词 气相色谱法-氢火焰检测器 N-亚硝胺 腌制鱼干

在线阅读 下载PDF 职称材料

茶叶中甲萘威农残表面增强拉曼光谱(SERS)结合快速前处理检测方法的建立 被引量：3

8

作者 朱晓宇 艾施荣 +5 位作者 彭雄鑫 李红 杨普香 李文金 陈涛 吴瑞梅 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第10期242-247,共6页

采用表面增强拉曼光谱(SERS)技术结合快速前处理方法,分析绿茶中甲萘威农药残留,对比纳米竹炭(NBC)和N-丙基乙二胺(PSA)填料及用量去除茶叶基质效应的效果。结果表明,PSA对茶叶基质的净化效果较差,而NBC净化效果明显,其最优用量为30 mg... 采用表面增强拉曼光谱(SERS)技术结合快速前处理方法,分析绿茶中甲萘威农药残留,对比纳米竹炭(NBC)和N-丙基乙二胺(PSA)填料及用量去除茶叶基质效应的效果。结果表明,PSA对茶叶基质的净化效果较差,而NBC净化效果明显,其最优用量为30 mg。以金溶胶为增强基底,结合密度泛函理论,得到定性定量分析茶叶中甲萘威农药残留的3个特征谱峰:1103、1213、1557 cm^(-1)。以1557 cm^(-1)的峰强度,建立茶叶中甲萘威农药残留线性分析方程,该方程在0.28～5.56 mg/kg范围内,线性关系良好,决定系数R^2为0.9744,方法回收率在76.5%～94.9%之间,相对标准偏差(RSD)在3.87%～6.98%之间。该方法分析茶叶中甲萘威农药残留的最低检出浓度可达到0.83 mg/kg,符合国家规定标准1 mg/kg,单个样本检测时间在10 min内完成。研究表明,采用SERS技术结合快速前处理方法分析茶叶中农药残留是可行的。 展开更多

关键词 表面增强拉曼光谱 甲萘威 快速前处理 农药残留

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于信息熵理论的超高效液相色谱-串联质谱法测定淡水鱼肉中4种硝基呋喃类代谢物的残留量 被引量：2

9

作者 李青青 罗秋水 +4 位作者 周强 徐芊 张建军 梁棋 熊建华 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1261-1270,共10页

基于信息熵理论,以5-吗啉甲基-3-氨基-2-口恶唑烷基酮(AMOZ)、3-氨基-2-口恶唑烷基酮(AOZ)、1-氨基-2-乙内酰(AHD)和氨基脲(SEM)等4种硝基呋喃类代谢物回收率综合评分M为评价指标,采用单因素和响应面试验优化了淡水鱼中硝基呋喃类代谢... 基于信息熵理论,以5-吗啉甲基-3-氨基-2-口恶唑烷基酮(AMOZ)、3-氨基-2-口恶唑烷基酮(AOZ)、1-氨基-2-乙内酰(AHD)和氨基脲(SEM)等4种硝基呋喃类代谢物回收率综合评分M为评价指标,采用单因素和响应面试验优化了淡水鱼中硝基呋喃类代谢物残留检测的衍生条件。淡水鱼样品用盐酸溶液水解后加入适量内标溶液,用350μL 0.05 mol·L^(-1)邻硝基苯甲醛(衍生试剂)溶液(介质为甲醇)于46℃避光振荡衍生2.5 h。将所得溶液酸度调节至pH 7.4±0.2,用乙酸乙酯提取2次。收集提取液,氮吹至干,加入正己烷用于除杂,50%(体积分数)乙腈溶液用于复溶残渣,离心,取下层相过滤,滤液用超高效液相色谱-串联质谱法分析。在色谱分析中,以Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,体积比1∶1的0.1%(体积分数)甲酸溶液和乙腈的混合溶液等度洗脱。在质谱分析中,以大气压电喷雾离子源电离,多反应监测(MRM)模式检测。在定量分析时,以基质匹配法以及内标法降低基质干扰和提高方法的灵敏度。结果显示:因素衍生试剂体积、衍生温度和衍生时间以及交互因素衍生试剂体积与衍生温度对回收率综合评分M的影响极显著(p<0.01),最优衍生条件下二次多项式模型的预测值(M预测=1.0204)和试验值(M试验=0.9992)基本一致;4种硝基呋喃类代谢物工作曲线的线性范围均为0.02~50.00μg·L^(-1),检出限(3S/N)为0.02~0.19μg·kg-1。按照标准加入法进行回收试验,回收率为85.1%~116%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.64%~9.8%。方法用于55批实际样品的分析,AOZ、AMOZ和SEM检出率分别为1.82%,1.82%和3.64%,其中AOZ和AMOZ的最高检出量分别为0.24,0.13μg·kg-1,SEM的检出量在测定下限以下。 展开更多

关键词 信息熵 超高效液相色谱-串联质谱法 硝基呋喃类代谢物 淡水鱼

在线阅读 下载PDF 职称材料

江西名茶中10种金属元素含量的测定 被引量：1

10

作者 柯法钧 杨武英 +3 位作者 王丹 洪艳平 陈薪竹 王玉波 《食品与机械》 北大核心 2020年第7期72-77,共6页

对K、Ca、Na、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 8种必需元素火焰原子吸收光谱法的最佳工作条件(乙炔流量、空心阴极灯灯流量和燃烧器高度)进行优化,对铅、镉两种有毒元素石墨炉原子吸收光谱法的最佳工作条件(灰化温度、灰化时间、原子化温度及原子... 对K、Ca、Na、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 8种必需元素火焰原子吸收光谱法的最佳工作条件(乙炔流量、空心阴极灯灯流量和燃烧器高度)进行优化,对铅、镉两种有毒元素石墨炉原子吸收光谱法的最佳工作条件(灰化温度、灰化时间、原子化温度及原子化时间)进行优化,绘制各元素的标准曲线,考察方法的检出限和精密度,优化样品前处理条件及测定样品加标回收率,并对江西名茶中对应的10种金属元素的含量进行测定比较。结果表明,建立的各元素原子吸收光谱法在相应浓度区间内线性关系良好,相关系数为0.9918~0.9992,精密度为0.77%~3.32%,检出限为0.004~0.050μg/mL,回收率为99.25%~102.25%,均符合要求。10种金属元素在8种茶叶中的含量差异性显著,其排序基本为K>Mg>Mn>Ca>Fe>Na>Zn>Cu>Pb>Cd;遂川狗牯脑中K、Ca、Fe含量最高,庐山云雾中Na含量最高,靖安白茶中Mg、Zn含量最高,井冈山翠绿中Mn含量最高,武夷红茶中Cu含量最高,8种茶叶中Pb、Cd含量均较低。试验建立的原子吸收光谱法操作简便、干扰较少、灵敏度高,适用于各种茶叶中相应元素含量的测定;8种江西名茶中K、Ca、Na、Mg 4种常量元素和Fe、Cu、Mn、Zn 4种微量元素含量都比较丰富,Pb、Cd两种有毒元素含量均低于国家标准。 展开更多

关键词 江西名茶 金属元素 火焰原子吸收法 石墨炉原子吸收法

在线阅读 下载PDF 职称材料

龙安柚果皮精油水蒸气蒸馏法提取工艺及抗氧化、抑菌活性研究 被引量：9

11

作者 赵静 向丹 +3 位作者 喻娜 赵榆 何静 王文君 《中国南方果树》 北大核心 2019年第6期21-24,共4页

取市售龙安柚鲜果的外层果皮,采用水蒸气蒸馏法提取精油,通过单因素试验及正交试验考察料液比、提取液浓度(NaCl溶液质量分数)和提取(蒸馏)时间对精油得率的影响,对提取工艺进行优化,并测定精油抗氧化和抑菌活性。结果表明,当蒸馏时间为... 取市售龙安柚鲜果的外层果皮,采用水蒸气蒸馏法提取精油,通过单因素试验及正交试验考察料液比、提取液浓度(NaCl溶液质量分数)和提取(蒸馏)时间对精油得率的影响,对提取工艺进行优化,并测定精油抗氧化和抑菌活性。结果表明,当蒸馏时间为60min、NaCl溶液质量分数为2%、料液比为1∶1.5时,精油得率(以外层果皮鲜重计)最高,平均为1.37%;龙安柚果皮精油具有较强的还原能力和清除DPPH自由基的作用,对DPPH的半抑制浓度为3.22mg/mL;龙安柚果皮精油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑制作用,且随着精油浓度增加,抑菌效果增强。 展开更多

关键词 龙安柚 柚皮精油 水蒸气蒸馏 抗氧化 抑菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

肉桂醛水乳剂制备及其柑橘青霉抑菌效果测定 被引量：4

12

作者 林丽萍 陈妍妍 +2 位作者 田博文 廖安平 陈金印 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期19-24,共6页

为开展稳定有效、环境友好的柑橘植物源保鲜剂配方研究,该文对肉桂醛水乳剂的制备及其对柑橘青霉抑菌效果进行了研究。固定体系总量及油相(质量分数为10%的肉桂醛)用量,改变复合乳化剂的用量(质量分数分别为4%、6%和8%),采用低能量输入... 为开展稳定有效、环境友好的柑橘植物源保鲜剂配方研究,该文对肉桂醛水乳剂的制备及其对柑橘青霉抑菌效果进行了研究。固定体系总量及油相(质量分数为10%的肉桂醛)用量,改变复合乳化剂的用量(质量分数分别为4%、6%和8%),采用低能量输入,乳化剂在水中法制备水乳剂。综合分析水乳剂稳定性、分散性及贮藏性能指标,用量为6%得到的水乳剂的性能最好。优选出8个不同的肉桂醛水乳剂抑制柑橘青霉的效果无显著差异,最小抑菌浓度均为250μg/g,均显著优于同浓度的肉桂醛抑菌效果。以低能量输入法,可以获得稳定有效肉桂醛水乳剂的初级配方。 展开更多

关键词 肉桂醛水乳剂 制备 抑菌效果 柑橘青霉

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗呋喃唑酮代谢物单链抗体基因构建及蛋白结构分析和活性鉴定 被引量：2

13

作者 陈薪竹 王玉波 +6 位作者 王丹 洪艳平 杜华英 戴棚 邓炜杰 熊建华 杨武英 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第24期67-73,共7页

从单克隆杂交瘤细胞出发,构建抗3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)衍生物单链抗体基因,并对其蛋白质进行理化性质分析及结构预测和活性鉴定。首先以呋喃唑酮代谢物AOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞1D2为原料,提取总RNA后克... 从单克隆杂交瘤细胞出发,构建抗3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)衍生物单链抗体基因,并对其蛋白质进行理化性质分析及结构预测和活性鉴定。首先以呋喃唑酮代谢物AOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞1D2为原料,提取总RNA后克隆重链(V_(H))、轻链(V_(L))可变区基因,然后使用重叠延伸聚合酶链式反应技术用连接肽(G_(4)S)_(3)将V_(H)、V_(L)基因连接构建抗AOZ衍生物单链抗体基因,经测序后采用生物信息软件对抗体编码的氨基酸序列进行推导并展开生物信息学分析,再将此基因与Plip6/GN表达载体连接后进行表达并采用直接竞争酶联免疫分析法(direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay,dcELISA)鉴定其活性。结果表明:抗AOZ衍生物单链抗体基因全长750 bp,编码250个氨基酸,相对分子质量为27012.20,理论等电点为9.13,属于碱性氨基酸;其二级结构预测结果显示抗体蛋白含20处α-螺旋、25处β-转角、114处无规卷曲、91处延伸带结构;三级结构预测的正面俯视图显示重、轻链由连接肽相连形成一个“环桶状”结构,侧面显示为“口袋状”,这与常规单链抗体的结构特征一致,dcELISA结果也显示该抗体具有良好的抗原结合活性。本研究为后续AOZ残留检测免疫分析方法的建立及抗AOZ衍生物单链抗体的改造奠定一定基础。 展开更多

关键词 呋喃唑酮 3-氨基-2-噁唑烷酮 单链抗体 结构预测和活性鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料