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血管紧张素Ⅱ和高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4信号通路及炎性因子表达的影响
被引量：
2
1
作者
王瑜
刘思逸
+4 位作者
程玉花
张莉
江磊
吕金雷
陈钦开
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期253-257,270,共6页
目的探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中...
目的探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率最高的siRNA,用于后续实验。第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响。采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况。结果高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88mRNA的表达水平(均P<0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P<0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显。siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高糖及AngⅡ组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖环境和AngⅡ刺激系膜细胞TLR4/MyD88信号通路激活,特异性TLR4siRNA基因可以部分阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号的激活,厄贝沙坦也可部分阻断TLR4信号通路,高糖和AngⅡ共刺激增强由TLR4介导的天然免疫炎症效应,TLR4/MyD88信号通路在此效应中扮演重要角色;TLR4siRNA基因沉默技术为寻找DN的治疗方法提供了新思路,也为临床上使用ARB延缓DN进程提供了新的理论依据。
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关键词
糖尿病肾病
高糖
血管紧张素Ⅱ
系膜细胞
TOLL样受体4
天然免疫应答
炎性因子
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职称材料
题名
血管紧张素Ⅱ和高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4信号通路及炎性因子表达的影响
被引量：
2
1
作者
王瑜
刘思逸
程玉花
张莉
江磊
吕金雷
陈钦开
机构
南昌大学附属第一医院肾内科
江西九江学院
附属
医院
肾
内科
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期253-257,270,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81060063
No.81660129)
文摘
目的探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率最高的siRNA,用于后续实验。第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响。采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况。结果高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88mRNA的表达水平(均P<0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P<0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显。siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高糖及AngⅡ组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖环境和AngⅡ刺激系膜细胞TLR4/MyD88信号通路激活,特异性TLR4siRNA基因可以部分阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号的激活,厄贝沙坦也可部分阻断TLR4信号通路,高糖和AngⅡ共刺激增强由TLR4介导的天然免疫炎症效应,TLR4/MyD88信号通路在此效应中扮演重要角色;TLR4siRNA基因沉默技术为寻找DN的治疗方法提供了新思路,也为临床上使用ARB延缓DN进程提供了新的理论依据。
关键词
糖尿病肾病
高糖
血管紧张素Ⅱ
系膜细胞
TOLL样受体4
天然免疫应答
炎性因子
Keywords
diabetic nephropathy
high-glucose
AngiotensinⅡ
mesangial cell
Toll-like receptor 4
innate immune response
inflammatory factors
分类号
R587.24 [医药卫生—内分泌]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
血管紧张素Ⅱ和高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4信号通路及炎性因子表达的影响
王瑜
刘思逸
程玉花
张莉
江磊
吕金雷
陈钦开
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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