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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肝星状细胞增殖活化的影响 被引量:11
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作者 刘曼 何月 张吉翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期809-812,817,共5页
目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L)。RT-PC... 目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L)。RT-PCR分析不同浓度3-MA对HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响,Western blot法检测不同浓度3-MA对HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响;MTT法检测3-MA对HSC增殖的影响,流式细胞术分析3-MA对HSC细胞周期的影响。结果低、中、高剂量3-MA作用于HSC后,HSC-T6细胞自噬水平随3-MA浓度升高逐渐下降,α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量均明显低于对照组(P<0.05),LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,低、中、高剂量时3-MA对HSC增殖的影响均显著下降(P<0.05),G2期比例与对照组比较均明显增加(P<0.05)。结论 3-MA可下调大鼠HSC-T6细胞LC3Ⅱ的表达,抑制α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白的表达,使HSC-T6细胞周期停滞于G2期,抑制HSC增殖活化。 展开更多
关键词 肝纤维化 自噬 3-甲基腺嘌呤 肝星状细胞 细胞增殖
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Nrf2过表达对乙醇刺激下肝星状细胞激活与增殖及合成Ⅰ型胶原的影响 被引量:2
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作者 刘曼 何月 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1590-1596,共7页
目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空... 目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)过表达对乙醇诱导下大鼠肝星状细胞系HSC-T6激活与增殖及I型胶原mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用脂质体介导法对HSC-T6进行pEGFP-Nrf2重组质粒及pEGFP-N1空载质粒瞬时转染,将细胞分为正常对照组、乙醇刺激组、乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组和乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组。采用RT-PCR及Western blotting方法对HSC-T6中Nrf2、Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA及蛋白表达水平进行检测,采用MTT法对HSC-T6细胞增殖水平进行检测,采用流式细胞术对HSC-T6细胞周期分布进行检测。结果:(1)荧光显微镜下观察显示pEGFP-Nrf2质粒成功转染HSC-T6,转染后48h Nrf2 mRNA及蛋白表达水平较其余组显著升高(P<0.05)。(2)乙醇刺激组与乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组之间细胞增殖水平、Ⅰ型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),均明显高于正常对照组(P<0.05),细胞周期分布G1期比例下降,S期比例升高(P<0.05),而乙醇刺激+pEGFP-Nrf2质粒组细胞增殖水平及I型胶原、α-SMA mRNA及蛋白表达水平与乙醇刺激组及乙醇刺激+pEGFP-N1空载质粒组相比均显著下降(P<0.05),细胞周期分布G1期比例显著上升,S期比例显著下降(P<0.05),呈G1/S期阻滞。结论:Nrf2过表达可显著抑制乙醇对HSC-T6 Ⅰ型胶原及α-SMA mRNA及蛋白表达的促进作用,使HSC-T6细胞周期发生G1/S期阻滞,抑制乙醇诱导的HSC-T6增殖水平的升高,提示其对乙醇诱导的HSC-T6细胞活化具有负性调控作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 核因子E2相关因子2 Ⅰ型胶原 Α-平滑肌肌动蛋白
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丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi与细胞存亡 被引量:2
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作者 邓欢 刘亮明 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1860-1863,共4页
The serine protease HtrA2/Omi is released from the mitochondrial intermembrane space following apoptotic stimuli.Once in the cytosol,HtrA2/Omi has been implicated in promoting cell death in caspase-dependent or caspas... The serine protease HtrA2/Omi is released from the mitochondrial intermembrane space following apoptotic stimuli.Once in the cytosol,HtrA2/Omi has been implicated in promoting cell death in caspase-dependent or caspase-independent pathway.On the other hand,HtrA2/Omi can refold and degrade misfolded proteins in the mitochondria during cell stress. 展开更多
关键词 HtrA2/Omi 线粒体 细胞凋亡
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