背景与目的已有的研究证明低氧可诱导肿瘤细胞自噬发生,自噬水平与肿瘤放疗敏感性相关,因而调控自噬信号通路是增强放疗敏感性极具潜力的治疗策略。本研究旨在探讨联合应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)下调低氧环境中...背景与目的已有的研究证明低氧可诱导肿瘤细胞自噬发生,自噬水平与肿瘤放疗敏感性相关,因而调控自噬信号通路是增强放疗敏感性极具潜力的治疗策略。本研究旨在探讨联合应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)下调低氧环境中人肺腺癌A549细胞的自噬水平后对其放疗敏感性的影响。方法实验设低氧对照组及低氧+3-MA(自噬抑制剂)组,分别采用电镜检测自噬体变化,Western blot检测自噬标记蛋白-微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 lightchain3,LC3)蛋白表达,分析LC3II/LC3I比值变化。随后每组再给予直线加速器(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)照射后采用M法检测细胞增殖活性。结果与低氧对照组相比,低氧+3-MA组自噬体数量、LC3II/LC3I比值均下降。给予照射后,与低氧对照组比较,低氧+3-MA组细胞增殖活性下降。结论在低氧环境中,A549细胞保护性自噬增加,抑制自噬可增强A549细胞的放疗敏感性。展开更多
文摘背景与目的已有的研究证明低氧可诱导肿瘤细胞自噬发生,自噬水平与肿瘤放疗敏感性相关,因而调控自噬信号通路是增强放疗敏感性极具潜力的治疗策略。本研究旨在探讨联合应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)下调低氧环境中人肺腺癌A549细胞的自噬水平后对其放疗敏感性的影响。方法实验设低氧对照组及低氧+3-MA(自噬抑制剂)组,分别采用电镜检测自噬体变化,Western blot检测自噬标记蛋白-微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 lightchain3,LC3)蛋白表达,分析LC3II/LC3I比值变化。随后每组再给予直线加速器(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy)照射后采用M法检测细胞增殖活性。结果与低氧对照组相比,低氧+3-MA组自噬体数量、LC3II/LC3I比值均下降。给予照射后,与低氧对照组比较,低氧+3-MA组细胞增殖活性下降。结论在低氧环境中,A549细胞保护性自噬增加,抑制自噬可增强A549细胞的放疗敏感性。
文摘目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默人结肠癌HT-29细胞livin表达对HT-29细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:合成靶向livin的双链siRNA(livin-siRNA),转染HT-29细胞,RT-PCR及Western blotting检测HT-29细胞中livin mRNA及蛋白的表达,MTT实验检测HT-29细胞的增殖,流式细胞术检测HT-29细胞周期分布及凋亡,细胞侵袭实验检测HT-29细胞侵袭性的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性的变化。结果:Livin-siRNA转染后48 h,与空白组、阴性对照组及脂质体组相比,livin-siRNA转染组HT-29细胞中livin mRNA水平明显下降(0.073±0.007 vs 0.395±0.082、0.423±0.025、0.418±0.032,P<0.05),其蛋白表达也明显下调(0.106±0.003 vs 0.456±0.065、0.473±0.078、0.491±0.045,P<0.05)。转染96 h后,livin-siRNA组HT-29细胞增殖能力明显低于对照组及脂质体组(0.564±0.102 vs0.833±0.127、0.860±0.153,P<0.05),且细胞凋亡率升高[(16.5±2.8)%vs(2.4±0.5)%、(3.7±1.0)%,P<0.05]。侵袭实验显示,livin-siRNA转染后,穿过Matrigel膜的HT-29细胞数量明显少于对照组及脂质体组[(31.3±4.5)vs(101.3±8.6)、(97.4±7.8)个,P<0.05)]。livin-siRNA组HT-29细胞的caspase-3活性低于对照组(0.160±0.023 vs 0.347±0.058,P<0.05)。结论:siRNA沉默livin的表达可抑制HT-29细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭。
