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小鼠水通道蛋白1基因shRNA慢病毒载体构建与鉴定 被引量:2
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作者 章杰 江华 +4 位作者 张盈帆 方帆 宋艳玲 唐乙 芦立轩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-50,53,共4页
目的应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定。方法对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并... 目的应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定。方法对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证。测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列。结果成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-AQP1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功。Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-AQP1-SH2感染BV-2细胞后AQP1 mRNA表达最低,Western blot结果进一步验证结果的准确性。结论成功构建出AQP1基因shRNA慢病毒载体。 展开更多
关键词 RNA干扰 AQP1 慢病毒 脑肿瘤 神经系统损伤 基因治疗
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小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的表达 被引量:2
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作者 章杰 江华 +3 位作者 汪汇 方帆 宋艳玲 芦立轩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期199-204,共6页
目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-c... 目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQP1的表达,为进一步研究AQP1与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQP1基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQP1基因的慢病毒lentivirus-AQP1。体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQP1感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQP1 mRNA和蛋白的表达情况。结果构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-AQP1经PCR鉴定和测序正确。慢病毒lentivirus-AQP1感染神经膜细胞后AQP1表达增加(P<0.05)。结论成功构建了小鼠AQP1基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQP1 mRNA和蛋白表达水平增高。 展开更多
关键词 水通道蛋白1 过表达 慢病毒 神经膜细胞
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同种异体富血小板血浆提取液对脂肪干细胞的体外促增殖作用 被引量:2
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作者 韩超 廖怀伟 +1 位作者 刘丽忠 简雪平 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期259-263,427,共5页
目的:观察不同浓度同种异体富血小板血浆(PRP)提取液对脂肪干细胞(ADSCs)体外增殖的影响,为将同种异体PRP提取液应用于创面修复提供实验依据。方法:取SD大鼠腹股沟脂肪组织进行原代及传代培养;通过将获得的细胞向脂肪、骨和神经方向诱... 目的:观察不同浓度同种异体富血小板血浆(PRP)提取液对脂肪干细胞(ADSCs)体外增殖的影响,为将同种异体PRP提取液应用于创面修复提供实验依据。方法:取SD大鼠腹股沟脂肪组织进行原代及传代培养;通过将获得的细胞向脂肪、骨和神经方向诱导分化,鉴定其干细胞特性;三次离心法制备同种异体PRP提取液,加入DMEM/F12配制成6.67%、3.35%和1.67%的培养液;将第3代ADSCs分为4组:实验组(A、B和C组)分别以含体积分数为6.67%、3.35%和1.67%PRP提取液的培养液培养,对照组(D组)ADSCs用仅含10%胎牛血清、DMEM/F12的基础培养液培养;在培养24和48h后采用MTT法观察ADSCs生长状态。结果:原代培养成功获得贴壁生长细胞,呈成纤维细胞样,并成功向脂肪细胞、骨细胞和神经细胞方向诱导分化,即具有多向分化潜能,证明所培养的细胞为ADSCs;酶标仪测定,A、B、C、D组在培养24h后吸光度(A)值分别为0.434 3±0.084 3、0.351 6±0.076 6、0.258 1±0.060 0和0.259 2±0.073 6,在培养48h后A值分别为1.016 8±0.443 6、0.741 7±0.109 7、0.367 8±0.034 2和0.395 7±0.106 2;A组和B组的A值均高于C组和D组(均P<0.05);A组的A值高于B组(P<0.05);C组A值与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A和B组细胞增殖率明显升高,而C组细胞增殖率呈负增长。结论:适当浓度的同种异体PRP提取液可显著促进ADSCs体外增殖,有望应用于创面修复。 展开更多
关键词 富血小板血浆提取液 脂肪干细胞 细胞增殖 大鼠 Wistar
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IL-1β对华勒变性早期雪旺细胞增殖与凋亡的影响 被引量:4
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作者 罗晓荷 陈刚 +2 位作者 王宜梅 王炜 朱飞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1579-1583,共5页
目的探讨周围神经系统华勒变性(WD)早期白细胞介素-1β(IL-1β)对雪旺细胞(SCs)增殖和凋亡的影响,并研究相关作用机制。方法取6~8周龄健康雄性SD大鼠双侧坐骨神经制备WD体外模型,分别给予0 ng/ml IL-1β(对照组)和5 ng/ml IL-1β(实验组... 目的探讨周围神经系统华勒变性(WD)早期白细胞介素-1β(IL-1β)对雪旺细胞(SCs)增殖和凋亡的影响,并研究相关作用机制。方法取6~8周龄健康雄性SD大鼠双侧坐骨神经制备WD体外模型,分别给予0 ng/ml IL-1β(对照组)和5 ng/ml IL-1β(实验组)干预培养。培养48 h后免疫荧光染色检测SCs增殖标志物Ki67表达情况;Tunel法细胞凋亡染色检测细胞凋亡情况。培养24 h Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果免疫荧光染色显示干预48 h后实验组Ki67阳性率高于对照组(P<0.05);Tunel法染色显示干预48 h后实验组SCs凋亡率较对照组降低(P<0.05);Western blot显示干预24 h后实验组较对照组中SCs凋亡抑制蛋白Bcl-2/凋亡促进蛋白Bax表达量比例升高(P<0.05)。结论WD早期适当浓度IL-1β具有促进SCs增殖和抑制SCs凋亡的积极作用,并认为IL-1β可通过Bcl-2/Bax通路抑制SCs凋亡。 展开更多
关键词 白细胞介素-1Β 雪旺细胞 华勒变性 细胞增殖 细胞凋亡
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肋软骨耳再造术后感染、外露的修复方法 被引量:2
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作者 刘远生 李文芳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第2期289-290,共2页
目的:观察采用扩张皮瓣结合肋软骨雕刻耳支架移植进行耳廓再造术后耳廓感染、支架外露的并发症情况,探索耳廓再造术后耳廓感染及支架外露的预防及治疗方法。方法:42例先天性小耳畸形患者,于肋软骨耳廓再造术后发生耳廓感染6例,肋软骨支... 目的:观察采用扩张皮瓣结合肋软骨雕刻耳支架移植进行耳廓再造术后耳廓感染、支架外露的并发症情况,探索耳廓再造术后耳廓感染及支架外露的预防及治疗方法。方法:42例先天性小耳畸形患者,于肋软骨耳廓再造术后发生耳廓感染6例,肋软骨支架外露者36例,根据不同情况,5例切开行清创术术后直接缝合,10例经切开行清创术发现有肋软骨坏死,颞浅筋膜覆盖后植皮。15例行清创术后切除部分坏死肋软骨后予以再次取肋软骨修复耳支架,颞浅筋膜覆盖后植皮。6例经切开清创后经局部转移皮瓣加游离植皮修复。6例清创术后经耳廓旁皮瓣转移修复。结果:40例患者术后再造耳效果良好。1例缝合后因张力过大再次破裂感染,1例因软骨吸收形状欠佳。结论:在利用肋软骨进行耳再造术时,即使发生了再造耳感染、支架外露等并发症,经适当的积极治疗,仍可获得满意的效果。 展开更多
关键词 耳廓再造 支架外露
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