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AURKB通过DHX9激活NF-κB信号通路促进骨肉瘤细胞恶性表型
1
作者
钟彦鑫
刘宇
+5 位作者
童未来
谢新生
聂江波
杨枫
刘志礼
刘家明
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期2308-2316,共9页
目的探讨AURKB在促进骨肉瘤细胞恶性表型中的具体调控机制。方法分别转染HA-Vector和HA-AURKB于293T细胞中,采用免疫沉淀结合液相色谱-串联质谱技术筛选AURKB的潜在互作分子,免疫共沉淀和Western blotting验证其互作分子。通过RNA干扰技...
目的探讨AURKB在促进骨肉瘤细胞恶性表型中的具体调控机制。方法分别转染HA-Vector和HA-AURKB于293T细胞中,采用免疫沉淀结合液相色谱-串联质谱技术筛选AURKB的潜在互作分子,免疫共沉淀和Western blotting验证其互作分子。通过RNA干扰技术,干扰骨肉瘤细胞中AURKB的表达;设置对照组:转染对照组慢病毒143B细胞,sh-AURKB组:转染干扰AURKB慢病毒143B细胞,sh-con+Flag-DHX9组:对照组转染过表达DHX9慢病毒,sh-AURKB+Flag-DHX9组:沉默AURKB组转染过表达DHX9慢病毒。采用EDU、Transwell实验分别观测细胞的增殖、迁移和侵袭活性。机制分析采用Co-IP、体内泛素化实验等检测AURKB和DHX9的相互作用、DHX9磷酸化水平、DHX9泛素化水平。Western blotting检测AURKB及DHX9对NF-κB的信号激活作用。结果AURKB在骨肉瘤细胞系高表达。沉默骨肉瘤143B细胞中AURKB的表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。而AURKB与DHX9存在相互作用,且AURKB及DHX9在骨肉瘤组织中均高表达,沉默AURKB能够降低DHX9的蛋白表达,过表达AURKB后DHX9磷酸化水平升高(P<0.05)。沉默AURKB后不影响DHX9的转录翻译,但可以加快DHX9降解速度及增加DHX9泛素化水平。此外,过表达DHX9可以逆转沉默AURKB对IKBα蛋白及磷酸化p65的影响,促进p65入核激活NF-κB信号通路,并且增强了骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论AURKB通过调控DHX9激活NF-κB信号通路,促进骨肉瘤细胞恶性表型。
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关键词
骨肉瘤
AURKB
DHX9
磷酸化
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题名
AURKB通过DHX9激活NF-κB信号通路促进骨肉瘤细胞恶性表型
1
作者
钟彦鑫
刘宇
童未来
谢新生
聂江波
杨枫
刘志礼
刘家明
机构
南昌大学
第一
附属
医院
骨科
脊柱脊髓系统疾病江西省重点实验室
南昌大学第一附属医院医学研究公共服务中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期2308-2316,共9页
基金
江西省“双千计划”首批培养类项目
江西省自然科学基金(20192ACBL21041,20232ACB206043)。
文摘
目的探讨AURKB在促进骨肉瘤细胞恶性表型中的具体调控机制。方法分别转染HA-Vector和HA-AURKB于293T细胞中,采用免疫沉淀结合液相色谱-串联质谱技术筛选AURKB的潜在互作分子,免疫共沉淀和Western blotting验证其互作分子。通过RNA干扰技术,干扰骨肉瘤细胞中AURKB的表达;设置对照组:转染对照组慢病毒143B细胞,sh-AURKB组:转染干扰AURKB慢病毒143B细胞,sh-con+Flag-DHX9组:对照组转染过表达DHX9慢病毒,sh-AURKB+Flag-DHX9组:沉默AURKB组转染过表达DHX9慢病毒。采用EDU、Transwell实验分别观测细胞的增殖、迁移和侵袭活性。机制分析采用Co-IP、体内泛素化实验等检测AURKB和DHX9的相互作用、DHX9磷酸化水平、DHX9泛素化水平。Western blotting检测AURKB及DHX9对NF-κB的信号激活作用。结果AURKB在骨肉瘤细胞系高表达。沉默骨肉瘤143B细胞中AURKB的表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。而AURKB与DHX9存在相互作用,且AURKB及DHX9在骨肉瘤组织中均高表达,沉默AURKB能够降低DHX9的蛋白表达,过表达AURKB后DHX9磷酸化水平升高(P<0.05)。沉默AURKB后不影响DHX9的转录翻译,但可以加快DHX9降解速度及增加DHX9泛素化水平。此外,过表达DHX9可以逆转沉默AURKB对IKBα蛋白及磷酸化p65的影响,促进p65入核激活NF-κB信号通路,并且增强了骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论AURKB通过调控DHX9激活NF-κB信号通路,促进骨肉瘤细胞恶性表型。
关键词
骨肉瘤
AURKB
DHX9
磷酸化
Keywords
osteosarcoma
aurora kinase B
DHX9
phosphorylation
分类号
R738.1 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
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1
AURKB通过DHX9激活NF-κB信号通路促进骨肉瘤细胞恶性表型
钟彦鑫
刘宇
童未来
谢新生
聂江波
杨枫
刘志礼
刘家明
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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