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circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用 被引量：1
1
作者 姜佳雪 苏金凤 +6 位作者 王娅 欧涛 李晖 徐金东 刘宇鹏 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs... 目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达。建立去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心室肌细胞(NRVCs)肥大模型,通过鬼笔环肽染色检测过表达circMYO9A_006对NRVCs表面积的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circMYO9A_006包含的潜在内部核糖体进入位点(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa及其在细胞内分布情况。分别制备circMYO9A_006-ORF(直接表达MYO9A-208aa)和circMYO9A_006-ATG-mut(不能表达MYO9A-208aa)重组病毒,以空载体病毒和circMYO9A_006重组病毒分别感染NRVCs,检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa对心肌细胞肥大表型的特异调节作用。结果:利用腺病毒可在NMVCs中有效介导circMYO9A_006过表达。过表达circMYO9A_006可显著抑制NMVCs中心肌肥大相关蛋白的表达(P<0.01),并显著抑制PE诱导的NRVCs中心肌肥大相关蛋白的表达和细胞表面积的增加(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果提示,circMYO9A_006包含的2个IRES均具有活性。Western blot检测结果显示,在NRVCs中过表达circMYO9A_006可翻译预期大小为28 kD的MYO9A-208aa蛋白,并主要分布于细胞质中。过表达MYO9A-208aa和circMYO9A_006可一致地抑制NRVCs心肌肥大相关蛋白表达(P<0.01),并可逆转PE诱导的NRVCs肥大反应(P<0.05);而过表达circMYO9A_006-ATG-mut没有抑制NRVCs肥大的作用。结论:circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌肥大 环状RNA MYO9A_006 MYO9A-208aa蛋白 心肌细胞
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丙酮酸激酶同工酶M2介导长非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大作用
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作者 李艺 温艺红 +5 位作者 伍华燕 姜佳雪 欧涛 陈凯茵 刘宇鹏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期544-553,共10页
越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,... 越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,但其在心肌肥厚调节中可能的作用和机制尚不清楚。利用腺病毒介导在乳小鼠心肌细胞(neonatal mouse ventricular cardiomyocytes,NMVCs)和乳大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cardiomyocytes,NRVCs)中过表达RP11-879F14.2,检测对NMVCs中心肌肥厚相关基因,包括肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白(Acta1)以及心钠素(NPPA)表达的影响,结果显示,过表达RP11-879F14.2可显著抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达。RT-qPCR和Western印迹结果证实,当过表达RP11-879F14.2时可显著促进NMVCs中丙酮酸激酶同工酶M2(PKM 2)表达。并且,过表达PKM 2和RP11-879F14.2可一致地抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导NRVCs的表面积增加,而敲降PKM 2可逆转RP11-879F14.2对NMVCs中心肌肥厚相关基因表达的抑制作用。利用Seahorse 96XF细胞能量分析仪检测显示,过表达RP11-879F14.2和PKM 2可一致增加NMVCs中葡萄糖代谢水平,而沉默PKM 2对RP11-879F14.2上调NMVCs中糖酵解、三羧酸(TCA)循环和线粒体电子传递链(ETC)相关基因的表达有显著的抑制作用。因此,PKM 2介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌肥厚 心肌细胞 长非编码RNA 丙酮酸激酶同工酶M2
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心房颤动对冠心病患者心肺适能的影响 被引量：1
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作者 朱珺硕 刘于庭 +4 位作者 许明煜 白冰清 周浩锋 郭兰 马欢 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第6期510-516,共7页
目的探索心房颤动(AF)对冠心病(CHD)患者心肺适能的影响。方法回顾性研究。收集2013年10月至2023年3月广东省人民医院2246例冠心病住院患者的临床资料,使用倾向性评分匹配法将患者分为CHD合并AF组(88例)和CHD无AF组(86例)。通过心肺运... 目的探索心房颤动(AF)对冠心病(CHD)患者心肺适能的影响。方法回顾性研究。收集2013年10月至2023年3月广东省人民医院2246例冠心病住院患者的临床资料,使用倾向性评分匹配法将患者分为CHD合并AF组(88例)和CHD无AF组(86例)。通过心肺运动试验(CPET)测量峰值摄氧量(VO_(2))和二氧化碳通气当量斜率等反映患者运动能力、心血管功能及肺通气与灌注功能的指标。以峰值VO_(2)作为因变量进行多元线性回归分析,探索AF对CHD患者心肺适能的影响。结果CHD合并AF组与CHD无AF组体重、体质指数、利尿剂和他汀药物使用、血脂异常、贫血、运动峰值收缩压、糖化血红蛋白、空腹血糖和估算肾小球滤过率、乳酸脱氢酶、肌钙蛋白、B型利钠肽、左心房内径、肺动脉压力、左心室射血分数等比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与CHD无AF组相比,CHD合并AF组峰值VO_(2)[(15.2±4.6)ml·min^(-1)·kg^(-1)比(20.7±5.5)ml·min^(-1)·kg^(-1)]、无氧阈[(11.7±6.7)ml·min^(-1)·kg^(-1)比(16.5±10.1)ml·min^(-1)·kg^(-1)]、峰值负荷功率[(66.6±29.3)W比(91.0±37.6)W]、峰值氧脉搏[(7.1±3.0)ml/次比(9.9±5.1)ml/次]均降低(均为P<0.001),运动时二氧化碳通气当量斜率(33.6±8.1比28.4±5.6)、峰值心率[(143.2±31.4)次/min比(128.8±26.4)次/min]均增加(均为P<0.01)。多元线性回归分析显示,合并AF是峰值VO_(2)的独立影响因素(β=-0.419,95%CI:-6.829~-2.932,P<0.001)。结论CHD合并AF患者会出现心肺适能下降、外周氧摄取减少和通气效率降低。 展开更多
关键词 冠心病 心房颤动 心肺运动试验 峰值摄氧量
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环状RNA MYO9A_043通过下调CPEB4表达发挥抑制小鼠心脏成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：2
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作者 陈泽润 李艺 +7 位作者 梁俣 苏金凤 高原 欧涛 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1225-1232,共8页
目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-q... 目的:研究环状RNA MYO9A_043(circular RNA MY09A_043, circMY09A_043)对小鼠心肌纤维化的调控作用和机制。方法:利用重组腺病毒circMYO9A_043介导其在C57BL/6乳小鼠心脏成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts, mCFs)中过表达,通过RT-qPCR和Western blot实验检测纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain, Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(collagen type Ⅲ alpha 1 chain, Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2, Acta2)的表达。利用划痕实验检测mCFs的迁移能力。利用RNA测序分析和RT-qPCR验证circMYO9A_043对mCFs中胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)等基因的下调作用。利用腺病毒介导mCFs过表达CPEB4,检测CPEB4对纤维化相关基因表达的影响。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测CPEB4与纤维化相关基因的结合作用。进一步通过放线菌素D处理实验,检测mCFs中CPEB4对Col1a1、Col3a1和Acta2 mRNA的稳定作用。结果:利用腺病毒可以有效介导circMYO9A_043在mCFs中过表达。circMYO9A_043可显著下调Col1a1、Col3a1和Acta2表达,抑制mCFs的迁移能力(P<0.05)。circMYO9A_043可显著降低mCFs中CPEB4的表达(P<0.01),过表达CPEB4可逆转circMYO9A_043对纤维化相关基因表达的抑制作用。RIP实验显示CPEB4与mCFs中纤维化相关基因的mRNA有显著结合作用(P<0.01),而放线菌素D处理实验结果显示CPEB4可显著增强上述基因mRNA的稳定性(P<0.05)。结论:circMYO9A_043通过下调CPEB4的表达而抑制mCFs纤维化表型。 展开更多
关键词 心肌纤维化 心脏成纤维细胞 环状RNA MYO9A_043 胞质多腺苷酸化元件结合蛋白4
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狭缝引导配体13′UTR通过miR-34a-5p/SIRT1轴调节内皮细胞表型 被引量：1
5
作者 欧涛 胡志琴 +5 位作者 高原 伍华燕 陈凯茵 徐金东 方咸宏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期362-372,共11页
在高等生物的进化过程中,mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)序列显著增加,提示3′UTR在生物功能调节中可能发挥重要作用。我们发现狭缝引导配体1(slit guidance ligand 1,SLIT1)3′UTR在肥厚型心肌病(HCM)患者心肌中水... 在高等生物的进化过程中,mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)序列显著增加,提示3′UTR在生物功能调节中可能发挥重要作用。我们发现狭缝引导配体1(slit guidance ligand 1,SLIT1)3′UTR在肥厚型心肌病(HCM)患者心肌中水平降低,但其对肥厚心肌中血管功能调节的作用机制不清楚。利用腺病毒介导在主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)中过表达SLIT13′UTR,检测HAECs中一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthases,eNOS)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)表达。分别采用划痕实验和基于Matrigel胶的管腔形成实验检测HAECs的迁移和成管腔能力。结果发现,过表达SLIT13′UTR会升高HAECs中p-eNOS、eNOS和VEGFA水平(P<0.01),并促进HAECs迁移和成管腔能力(P<0.01)。生物信息学预测提示,SLIT13′UTR上有多个微RNA(miRNA)的潜在结合位点,反义RNA纯化技术(RNA antisense purification,RAP)筛选和利用Ago2抗体进行RNA结合蛋白质免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)结果显示,SLIT13′UTR与miR-34a-5p存在结合作用,而过表达SLIT13′UTR的HAECs中miR-34a-5p水平显著降低(P<0.05)。Western印迹结果证实,miR-34a-5p可逆转过表达SLIT13′UTR对去乙酰化酶SIRT1的上调作用(P<0.05)。在HAECs中转染miR-34a-5p和si-SIRT1,可一致地抑制过表达SLIT13′UTR引起的p-eNOS、eNOS和VEGFA增加(P<0.05,P<0.01),及促进HAECs迁移和成管腔的能力(P<0.01,P<0.001)。因此,SLIT13′UTR可以特异性吸附miR-34a-5p,通过miR-34a-5p/SIRT1轴发挥促进内皮细胞迁移和管腔生成的作用。 展开更多
关键词 狭缝引导配体1 3′非翻译区 血管内皮细胞 微RNA
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