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结核杆菌热休克蛋白70与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建
被引量：
3
1
作者
曾曙光
张积仁
+4 位作者
章锦才
吴世卿
刘启才
艾伟健
薛国初
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期433-436,445,共5页
目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物...
目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物PCR扩增获得mtHSP70基因序列。将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒PMD-18T-mtHSP70,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒。将mtHSP70基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含mtHSP70和EGFP基因的重组质粒。Lipofectamine介导下转染B16细胞,并分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达和以Westernblot检测mtHSP70蛋白表达情况。结果酶切见特异酶切图谱,该载体在瞬时表达时获得mtHSP70/EGFP的良好表达。结论含mtHSP70和EGFP基因双顺反子真核表达载体pCMV-mtHSP70-IRES-EGFP构建成功,为研究基于以GFP为报告基因的mtHSP70的肿瘤DNA疫苗对肿瘤的治疗作用及机制奠定了实验基础。
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关键词
结核杆菌
热休克蛋白70
增强型绿色荧光蛋白
真核表达
免疫治疗
肿瘤
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职称材料
题名
结核杆菌热休克蛋白70与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建
被引量：
3
1
作者
曾曙光
张积仁
章锦才
吴世卿
刘启才
艾伟健
薛国初
机构
南方医科大学附属口腔医院/广东省口腔医院
南方医科大学
珠江
医院
肿瘤中心
广州医学院实验医学研究中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期433-436,445,共5页
基金
广东省社会发展基金(2008B030301190)
广东省医学科研基金(A2007109)
文摘
目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物PCR扩增获得mtHSP70基因序列。将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒PMD-18T-mtHSP70,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒。将mtHSP70基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含mtHSP70和EGFP基因的重组质粒。Lipofectamine介导下转染B16细胞,并分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达和以Westernblot检测mtHSP70蛋白表达情况。结果酶切见特异酶切图谱,该载体在瞬时表达时获得mtHSP70/EGFP的良好表达。结论含mtHSP70和EGFP基因双顺反子真核表达载体pCMV-mtHSP70-IRES-EGFP构建成功,为研究基于以GFP为报告基因的mtHSP70的肿瘤DNA疫苗对肿瘤的治疗作用及机制奠定了实验基础。
关键词
结核杆菌
热休克蛋白70
增强型绿色荧光蛋白
真核表达
免疫治疗
肿瘤
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
heat shock protein 70
enhanced green fluorescent protein
eukaryotic expression
immunotherapy, tumor
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
结核杆菌热休克蛋白70与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建
曾曙光
张积仁
章锦才
吴世卿
刘启才
艾伟健
薛国初
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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