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采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库
被引量：
9
1
作者
陈振瑞
李长征
+5 位作者
贺微
周烨
张哲欢
刘叔文
谭万龙
周辰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期1059-1062,1065,共5页
目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感...
目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。
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关键词
哺乳动物细胞表面展示
肾癌
抗体基因库
全长人源抗体
流式细胞仪
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职称材料
VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化
被引量：
2
2
作者
张瑞涛
李晓娟
+3 位作者
李润明
胡义平
姜世勃
刘叔文
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期1960-1964,共5页
目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD...
目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用。结果体外实验显示,VIR576能逆转HIVgp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05)。溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合。结论VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化。VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究。
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关键词
HIV
进入抑制剂
VIR576
抗原特异性T细胞活化
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职称材料
题名
采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库
被引量：
9
1
作者
陈振瑞
李长征
贺微
周烨
张哲欢
刘叔文
谭万龙
周辰
机构
南方医科大学
南方
医院泌尿外科
南方医科大学
基因工程研究所
南方医科大学药学院抗病毒中心
香港Dgen生物技术有限公司
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期1059-1062,1065,共5页
基金
香港Dgen Biotech Ltd科研基金
文摘
目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。
关键词
哺乳动物细胞表面展示
肾癌
抗体基因库
全长人源抗体
流式细胞仪
Keywords
mammalian display
renal cell carcinoma
antibody library
full-length fully human antibody
flow cytometry
分类号
R737.11 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化
被引量：
2
2
作者
张瑞涛
李晓娟
李润明
胡义平
姜世勃
刘叔文
机构
南方医科大学
药学院
抗
病毒
研究
中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期1960-1964,共5页
基金
国家自然科学基金(30672496和30729001)
科技部973项目(2006CB504200)
+1 种基金
教育部新世纪优秀人才基金(NCET-06-0753)
霍英东高等院校青年教师基金(111045)
文摘
目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用。结果体外实验显示,VIR576能逆转HIVgp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05)。溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合。结论VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化。VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究。
关键词
HIV
进入抑制剂
VIR576
抗原特异性T细胞活化
Keywords
human immunodeficiency virus
entry inhibitors
VIR576
antigen-specific T cell activation
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库
陈振瑞
李长征
贺微
周烨
张哲欢
刘叔文
谭万龙
周辰
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化
张瑞涛
李晓娟
李润明
胡义平
姜世勃
刘叔文
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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