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KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响 被引量:6
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作者 黄吴键 袁进 +1 位作者 邓星 安靓 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期256-261,共6页
目的囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊... 目的囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。 展开更多
关键词 植入前胚胎 KSOM 营养成分
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Semaphorin 3a对小鼠胚胎视交叉发育的作用 被引量:1
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作者 郝彦利 陈新安 董为人 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2007年第4期447-449,共3页
目的:探讨细胞因子Semaphorin 3a(Sema 3a)在小鼠胚胎视交叉发育过程中发挥的作用。方法:E13至E15小鼠胚胎的眼球至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F12的培养液中,在37℃的恒温的滚动培养箱中培养5h。实验组中将Sema 3... 目的:探讨细胞因子Semaphorin 3a(Sema 3a)在小鼠胚胎视交叉发育过程中发挥的作用。方法:E13至E15小鼠胚胎的眼球至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F12的培养液中,在37℃的恒温的滚动培养箱中培养5h。实验组中将Sema 3a抗体加入培养液中。培养结束后,将脑厚片以4%多聚甲醛固定,将DiI颗粒置于一侧视盘。7d后,在手术显微镜下,暴露被标记的视神经纤维,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果:用Sema 3a抗体阻抑Sema 3a的功能,可引起E13跨越中线的视神经纤维减少以及神经纤维走行错误。结论:在视交叉形成的早期,Sema 3a可能吸引视神经纤维跨过中线,并且这个过程可能是短暂的。 展开更多
关键词 SEMA3A 视交叉 发育
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外源性基因经乳腺导管注射在大鼠乳腺组织中表达的机制研究
3
作者 李新安 安靓 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1774-1776,1784,共4页
目的研究外源性基因经乳腺导管注射在乳腺组织中表达的机制。方法依据乳腺发育时期的不同(即9周龄未孕、妊娠7d、妊娠12d、妊娠18d、产后7d、产后14d)将36只SD大鼠分为6个实验组(6只/组),以绿色荧光蛋白(GFP)高效表达质粒pCE-29与脂质... 目的研究外源性基因经乳腺导管注射在乳腺组织中表达的机制。方法依据乳腺发育时期的不同(即9周龄未孕、妊娠7d、妊娠12d、妊娠18d、产后7d、产后14d)将36只SD大鼠分为6个实验组(6只/组),以绿色荧光蛋白(GFP)高效表达质粒pCE-29与脂质体混合后,经乳腺管导入各组大鼠第5对乳腺。48h后取材冰冻切片,荧光显微镜下观察各组GFP的表达情况,如有表达则对该张冰冻切片行HE染色,前后图像对比以确定GFP表达位置。另取不同发育时期正常大鼠乳腺组织制作石蜡切片,HE染色。结果pCE-29质粒由乳头管导入后,实验组中妊娠12d组和产后7d组中各有2只有GFP表达,图像对比后确定GFP是在乳腺腺泡细胞中表达;石蜡切片HE染色后观察大鼠乳腺组织,在从妊娠初始到产后的发生变化过程中,在妊娠12d和产后7d时处于分裂期的腺细胞较多,而其他时期处于分裂期的腺细胞较少。结论在妊娠12d和产后7d这两个时期,外源性基因经乳腺管注射可以转入腺泡上皮细胞而得到表达。表达的机制可能是在妊娠期及分娩后,由于体内激素作用,乳腺干细胞在以上两个时期不断分化,启动腺细胞分裂增殖,分裂期的腺细胞进行DNA复制,因此可能接受外源性基因的机率大。本实验为外源性基因经乳腺管注射在动物乳腺的表达提供了重要的研究资料。 展开更多
关键词 外源性基因 乳腺 绿色荧光蛋白
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LPS直接及间接作用致小鼠急性肺损伤模型的建立 被引量:21
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作者 陈英华 吕嘉文 +2 位作者 翟启良 谢哲凡 胡国栋 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期439-443,共5页
目的呼吸系统的急性炎症所致的急性肺损伤(ALI)是临床常见的急症、重症,也是目前实验研究的热点。在对其发病机制和治疗手段的探讨过程中,动物模型的有效建立极其重要。方法本实验比较了气道内直接滴入和腹腔注射给入两种LPS给入方式,... 目的呼吸系统的急性炎症所致的急性肺损伤(ALI)是临床常见的急症、重症,也是目前实验研究的热点。在对其发病机制和治疗手段的探讨过程中,动物模型的有效建立极其重要。方法本实验比较了气道内直接滴入和腹腔注射给入两种LPS给入方式,通过组织学病理评价、炎症细胞的细胞学反应,炎症反应细胞分泌物蛋白水平的变化等炎症反应指标,评价了LPS两种不同的给入方式对小鼠急性肺损伤(ALI)模型建立的有效性。结果组织学水平显示,气道内直接滴入LPS肺组织炎性细胞浸润的病理改变较腹腔注射LPS组更明显,肺损伤的组织学病理改变也更明显;细胞学水平,气道内直接给入LPS组肺泡灌洗液可见较多中性粒细胞渗出,而腹腔注射LPS组肺泡灌洗液中性粒细胞渗出少,与腹腔注射生理盐水组无差别;细胞因子水平,气道内直接滴入LPS肺组织组肺泡灌洗液蛋白水平明显升高,高于生理盐水对照组和腹腔注射LPS组。结论气道内直接滴入LPS是一种有效的小鼠急性肺损伤模型制备方法,可通过LPS的直接气道内分散和刺激至直接肺损伤。 展开更多
关键词 内毒素 急性肺损伤 气道内滴入 腹腔注射
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VILI大鼠血清对内皮细胞通透性的影响及其作用机制的研究 被引量:1
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作者 胡国栋 蔡绍曦 +1 位作者 陈英华 陈波 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期998-1002,共5页
目的研究大潮气量机械通气后大鼠血清炎性介质对内皮细胞骨架及单层细胞通透性的影响及乌司他丁的治疗作用,探讨机械通气生物伤引起肺水肿的细胞和分子机制。方法将30只SD大鼠分成3组:正常潮气量机械通气组;大潮气量机械通气组;大潮气... 目的研究大潮气量机械通气后大鼠血清炎性介质对内皮细胞骨架及单层细胞通透性的影响及乌司他丁的治疗作用,探讨机械通气生物伤引起肺水肿的细胞和分子机制。方法将30只SD大鼠分成3组:正常潮气量机械通气组;大潮气量机械通气组;大潮气量机械通气+乌司他丁组。收集机械通气后的3组大鼠的血清,并将这3组血清分别作用于ECV-304细胞,观察聚合型肌动蛋白的变化,并测定血清刺激后的单层内皮细胞通透性的变化。结果和正常潮气量机械通气相比,大潮气量机械通气大鼠血清中的炎性介质可以导致内皮细胞周边肌动蛋白带消失,细胞中央出现明显应力纤维,细胞骨架重排,而大潮气量机械通气开始时注射乌司他丁的大鼠血清对内皮细胞骨架重排影响减轻,3组机械通气后的大鼠血清作用于单层内皮细胞后,内皮细胞通透系数变化百分比(Pa%)分别为(6.95±1.66)%,(27.50±7.77)%,(17.71±4.66)%。结论大潮气量机械通气大鼠血清中的炎性介质可诱导内皮细胞骨架中重组,应力纤维形成,增加其通透性,而乌司他丁可减轻大潮气量大鼠血清中炎性介质对内皮细胞骨架的影响,应力纤维生成减少,改善了内皮细胞的通透性。 展开更多
关键词 机械通气 炎性介质 细胞骨架 通透性
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阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染
6
作者 黄吴键 袁进 +1 位作者 安靓 李进 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第6期35-38,I0005,共5页
目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复... 目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复合物在细胞的分布情况。结果与对照组单纯使用PEI转染相比较,联合使用组虽然精子活力和活率有一定程度的下降,但是无论胞质还是胞核荧光物质的携带量都有很大程度的提高,实现了对精子的核内转染。结论本实验为我们以后开展大动物精子载体法的研究提供了一个成功的模式。 展开更多
关键词 电穿孔 JetPEI-FluoF 小鼠精子 核内转染 精子载体法
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