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一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建被引量：8: 1; 作者郭爱华刘志锋 +3 位作者孙学刚李海玉邓鹏姜勇《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页; 目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、... 展开更多; 关键词 HIV-1反式激活因子蛋白质转导结构域融合蛋白细胞内转导; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究被引量：3: 2; 作者杨丽萍刘志锋 +2 位作者黎永明李志杰姜勇《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-557,共5页; 目的构建基于TAT技术的p38MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定。方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高... 展开更多; 关键词 Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶蛋白转导; 在线阅读下载PDF 职称材料

Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定被引量：1: 3; 作者王斌李娟 +2 位作者张磊张琳张璐《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期197-201,共5页; 目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体... 展开更多; 关键词 Rac1-GTPase 慢病毒绿色荧光蛋白生物学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

MEK信号通路对H_2O_2诱导细胞角蛋白7在细胞中表达与定位的影响被引量：3: 4; 作者唐昭亮胡水旺 +2 位作者樊启黄姜枫姜勇《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第8期789-793,共5页; 目的细胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)与肿瘤发展以及炎症反应密切相关,氧化应激在此过程中扮演着重要的角色,文中旨在通过构建小鼠Krt7的真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达、定位以及在氧化应激反应下的变化情况。方法提取C5... 展开更多; 关键词细胞角蛋白分子克隆氧化应激信号通路; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建被引量：8: 1; 作者郭爱华刘志锋孙学刚李海玉邓鹏姜勇; 机构南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页; 基金国家高技术研究发展(863)计划课题(2001AA234061) 广东省科技计划项目(A1090202) +1 种基金广州市科技计划项目(2001-Z-035-01-1)~~; 文摘目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定正确,再经蛋白透析、过滤处理。将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中,用荧光显微镜观察。结果重组质粒pET14b-His-TAT融合表达载体和pET14b-His-TAT-EGFP重组载体经酶切、DNA测序鉴定证实构建成功。表达纯化出了高纯度His-TAT-EGFP融合蛋白并具有较高细胞内转导活性。结论成功改建pET14b-His-TAT-Flag重组载体,正确构建pET14b-His-TAT-EGFP载体,His-TAT-EGFP融合蛋白高效表达,并具有明确的细胞内转导活性。; 关键词 HIV-1反式激活因子蛋白质转导结构域融合蛋白细胞内转导; Keywords human immunodeficiency virus type-1 trans-activator protein transduction domain recombinant protein intracellular transduction; 分类号 R341 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究被引量：3: 2; 作者杨丽萍刘志锋黎永明李志杰姜勇; 机构南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-557,共5页; 基金广东省科技计划项目(A1090202) 广州市科技计划项目(2001-z-035-01-1) 广东省自然科学基金重点项目(13058)~~; 文摘目的构建基于TAT技术的p38MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定。方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高渗刺激下,通过检测p38底物ATF2的磷酸化水平,以观察由TAT转导进入细胞His-TAT-p38及其无活性突变体对内源性p38活性的影响。结果酶切和测序结果表明,载体构建正确;SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白;Westernblot表明,融合蛋白His-TAT-p38及其突变体能够以一种时间和浓度依赖性方式高效转导进入细胞;导入His-TAT-p38蛋白后,结果发现导入的野生型p38可增强内源性p38的功能,而无活性突变体则竞争性抑制了内源性p38MAPK蛋白的功能,从而阻止或抑制其对内源性底物ATF2的磷酸化,使得信号不能传递下去,进而抑制p38MAPK通路的活动。结论成功建立了基于TAT的蛋白转运系统,并证实TAT能够以浓度和时间依赖方式高效转运蛋白进入真核细胞;进入细胞的His-TAT-p38和His-TAT-p38无活性突变体蛋白均具有较高的生物学活性,在高渗刺激作用下前者可以增加p38磷酸化水平,而后者则显著抑制p38信号通路的活性。; 关键词 Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶蛋白转导; Keywords human immunodeficiency virus type-1 p38 mitogen-activated protein kinase protein transduction; 分类号 R341 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定被引量：1: 3; 作者王斌李娟张磊张琳张璐; 机构南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室南方医科大学组织学与胚胎学教研室; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期197-201,共5页; 基金国家自然科学基金(30770821) 广东省自然科学基金重点项目(92510515000008) +1 种基金广东省科技计划项目(2005B50301010); 文摘目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体慢病毒上清,用其感染大鼠前皮质神经元,分别进行Rac1生物学活性检测、细胞转染效率鉴定与神经元形态学观察。结果构建的Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒经酶切与测序鉴定正确,包装的慢病毒滴度为1×106TU/ml。用制备的慢病毒上清感染原代培养的前皮质神经元,Rac1生物学活性检测结果显示Rac1N17慢病毒显著抑制表皮生长因子诱导的Rac1活性的升高,而Rac1L61慢病毒感染神经元Rac1活性显著升高。感染效率鉴定显示病毒上清可感染80%以上的前皮质神经元。形态学观察显示经慢病毒感染后的神经元其胞体与树突分支清晰可见。结论成功制备了Rac1N17和Rac1L61慢病毒,并成功实现了慢病毒感染前皮质神经元,为进一步研究Rho蛋白家族信号通路提供了一个重要工具。; 关键词 Rac1-GTPase 慢病毒绿色荧光蛋白生物学活性; Keywords Rac1-GTPase lentivirus green fluorescent protein biological activity; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名MEK信号通路对H_2O_2诱导细胞角蛋白7在细胞中表达与定位的影响被引量：3: 4; 作者唐昭亮胡水旺樊启黄姜枫姜勇; 机构南方医科大学病理生理学教研室/广东省蛋白质组学重点实验室; 出处《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第8期789-793,共5页; 基金国家自然科学基金(81030055) 广东省自然科学基金(10251051501000003) 教育部长江学者和创新团队发展计划项目(IRT0731); 文摘目的细胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)与肿瘤发展以及炎症反应密切相关,氧化应激在此过程中扮演着重要的角色,文中旨在通过构建小鼠Krt7的真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达、定位以及在氧化应激反应下的变化情况。方法提取C57/BL6小鼠肺组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Krt7编码序列,构建重组质粒pcDNA3-Krt7-HA。经脂质体转染NIH 3T3细胞,采用Western blot检测Krt7表达,免疫荧光检测其在细胞中的表达、定位以及在过氧化氢(H2O2)刺激下的变化情况。结果重组质粒构建成功。Western blot显示该质粒能够在NIH 3T3细胞中有效表达,免疫荧光检测表达产物主要分布在细胞质中,随着H2O2刺激时间的增加细胞内颗粒状蛋白聚集物的形成愈发明显且在60 min处发生入核现象。MEK通路抑制剂PD98059可明显抑制这一过程。结论成功构建了带HA标签的Krt7真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,H2O2诱导Krt7在NIH 3T3细胞内的形态及定位变化依赖于MEK介导的信号通路。; 关键词细胞角蛋白分子克隆氧化应激信号通路; Keywords Cytokeratin Molecular cloning Oxidative stress Signaling pathway; 分类号 Q257 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建	郭爱华刘志锋孙学刚李海玉邓鹏姜勇	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	8	在线阅读下载PDF 职称材料
2	基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究	杨丽萍刘志锋黎永明李志杰姜勇	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定	王斌李娟张磊张琳张璐	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	MEK信号通路对H_2O_2诱导细胞角蛋白7在细胞中表达与定位的影响	唐昭亮胡水旺樊启黄姜枫姜勇	《医学研究生学报》 CAS 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料