HLA-Ⅰ基因单核苷酸多态性与中国南方汉族女性乳腺癌易感性的相关性研究 被引量：3

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作者 佟琳 杨学习 +5 位作者 李粉霞 孙敏英 刘民锋 董建宇 郭昭泽 叶长生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1096-1102,共7页

目的:探讨位于白细胞抗原复合体基因HLA-Ⅰ区域的17个单核苷酸多态性位点与中国南方汉族女性乳腺癌易感性的相关性。方法:应用Sequenom MassArray iPLEX检测系统对所选位点在267例乳腺癌患者和274例健康对照女性中进行基因分型分析。χ... 目的:探讨位于白细胞抗原复合体基因HLA-Ⅰ区域的17个单核苷酸多态性位点与中国南方汉族女性乳腺癌易感性的相关性。方法:应用Sequenom MassArray iPLEX检测系统对所选位点在267例乳腺癌患者和274例健康对照女性中进行基因分型分析。χ2检验分析各位点基因型分布频率在病例组和对照组中的差异,非条件Logistic回归评价多态性位点与乳腺癌遗传易感性的相关性。另外,根据临床治疗中癌组织ER、PR和HER-2状态进行分层分析。结果:所选位点在中国南方汉族女性中均存在多态性,其中rs9260682遗传多态性与乳腺癌易感性显著相关,与AA基因型相比,AT基因型可增加携带者乳腺癌的患病风险(P=0.04),且与HER-2阴性乳腺癌相关(P=0.04);rs9260734位点多态性分布在病例-对照分组中无显著性差异(P=0.25),但AA基因型与PR阴性乳腺癌相关(P=0.048);其余位点与乳腺癌易感性、ER、PR和HER-2状态均无显著相关性。结论:位于HLA-Ⅰ基因区域的多态性位点rs9260682既与乳腺癌易感性相关,又与HER-2阴性乳腺癌相关,而rs9260734位点的AA基因型与PR阴性乳腺癌相关。 展开更多

关键词 HLA-Ⅰ 单核苷酸多态性 乳腺癌 易感性

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IL-10、MD-1基因单核苷酸多态性与哮喘易感性的相关性研究 被引量：12

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作者 孙敏英 李粉霞 +1 位作者 杨学习 李明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1096-1100,共5页

目的：分析IL-10基因rs1800896、rs3024492位点和髓样分化蛋白1（Myeloid differentiation1,MD-1）基因rs7740529、rs2233128位点单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）与哮喘遗传易感性的相关性以及过敏性鼻炎（Allerg... 目的：分析IL-10基因rs1800896、rs3024492位点和髓样分化蛋白1（Myeloid differentiation1,MD-1）基因rs7740529、rs2233128位点单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）与哮喘遗传易感性的相关性以及过敏性鼻炎（Allergic rhini-tis,AR）对哮喘遗传易感性的影响。方法：应用Sequenom MassARRAYSNP分型技术对141例哮喘患者和145例正常对照的四个SNP位点（rs1800896、rs3024492、rs7740529、rs2233128）进行基因分型,再将哮喘患者中确定有过敏性鼻炎和无过敏性鼻炎者分别与正常对照组比较。χ2检验统计分析病例组和对照组的基因型频率;采用非条件Logistic回归校正年龄、性别影响,计算比数比（OR）和95%可信区间（CI）,以此评价各位点多态性与哮喘遗传易感性的相关性以及过敏性鼻炎对哮喘易感性的影响。结果：（1）IL-10rs1800896多态性位点GG、GA、AA三种基因型分布频率在哮喘组、哮喘和过敏性鼻炎共患组、哮喘而无鼻炎组的分布频率和对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.001）,有无过敏性鼻炎对其影响不明显。相较GG或AA基因型,携带基因型GA的个体,哮喘的患病风险明显降低（OR=0.033,95%CI：0.017~0.065）。（2）MD-1rs7740529位点CC、CT、TT三种基因型分布频率在哮喘患者组、哮喘和过敏性鼻炎共患组、哮喘而无鼻炎组的分布频率和对照组相比,差异也均有统计学意义（P≤0.005）,有无过敏性鼻炎对其影响不明显。相比较CC或TT基因型,携带基因型CT的个体,哮喘的患病风险明显降低（OR=0.369,95%CI：0.225~0.606）。（3）IL-10rs3024492位点TA、AA基因型和MD-1rs2233128位点AG、GG基因型在哮喘人群中的分布频率与对照组相比无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-10rs1800896与MD-1rs7740529位点多态性与哮喘的遗传易感性相关,其杂合型的患病风险均明显降低,且有无过敏性鼻炎对其影响不明显。 展开更多

关键词 IL-10 MD-1 哮喘 单核苷酸多态性 易感性

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抗羊口疮病毒蛋白ORFV086多克隆抗体的制备及其应用 被引量：4

3

作者 王小平 郝文波 +1 位作者 罗树红 宁章勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期7-13,共7页

本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达... 本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,以纯化蛋白作为免疫原,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。应用ELISA和Western blotting方法对所得抗体进行检测。结果显示,重组蛋白pET33b-086主要以包涵体形式存在,分子质量约为100ku;目的蛋白经切胶纯化回收后作为免疫原制备的多克隆抗体效价达1∶128000;纯化的多克隆抗体可用于检测重组及天然ORFV086蛋白,特异性好。本试验制备了ORFV086多克隆抗体,为深入研究ORFV086蛋白在羊口疮病毒感染过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 ORFV086蛋白 原核表达 包涵体 多克隆抗体

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广东汉族女性TRIM31基因单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的相关性研究

4

作者 陈军 杨学习 +3 位作者 姚广裕 李粉霞 孙敏英 叶长生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期911-915,共5页

目的:探讨TRIM31(Tripartite motif containing 31)基因rs1116221位点单核苷酸多态性(Single nucleotide poly-morphisms,SNP)与广东汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法:利用MassARRAY-IPLEX SNP分型技术,对南方医科大学南方医院的216... 目的:探讨TRIM31(Tripartite motif containing 31)基因rs1116221位点单核苷酸多态性(Single nucleotide poly-morphisms,SNP)与广东汉族女性乳腺癌易感性的关系。方法:利用MassARRAY-IPLEX SNP分型技术,对南方医科大学南方医院的216例广东汉族乳腺癌患者及216例同期健康体检者TRIM31基因的多态性位点rs1116221进行基因分型,采用χ2检验方法统计分析病例组与对照组的基因型分布频率的差异,采用非条件Logistic回归计算比数比(Odds ratio,OR)和95%可信区间(Confidence interval,CI)对该位点多态性与乳腺癌易感性的相关性进行评价。在此基础上,在病例组中根据临床雌激素受体(Estrogen receptor,ER)和孕激素受体(Progesterone receptor,PR)的免疫组化结果进一步分层分析。结果:TRIM31基因位点rs1116221在广东汉族女性中存在CC、CT、TT 3种多态性,病例-对照分析显示,该位点基因型分布频率在两组中无统计学差异(P>0.05);进一步分层分析发现,该位点的基因型分布在ER阳性/阴性(+/-)分组中存在差异,且具有统计学意义(P=0.034),携带杂合基因型CT的个体更倾向于ER(+)乳腺癌(OR=2.67,95%CI:1.02～7.02);而在PR阳性/阴性(+/-)分组中无统计学差异。结论:基因TRIM31的rs1116221位点多态性与乳腺癌患病风险之间无明显相关性,但该位点的杂合基因型与乳腺癌ER阳性(+)明显相关。 展开更多

关键词 TRIM31 乳腺癌 单核苷酸多态性 易感性

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抗弓形虫水通道蛋白多肽抗体的制备及鉴定 被引量：3

5

作者 张佳凤 郝文波 +2 位作者 肖斌 廖小青 罗树红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期903-907,918,共6页

目的研制抗弓形虫水通道蛋白(TgAQP)的特异性多肽抗体,并应用于检测弓形虫ME49株中水通道蛋白的表达和亚细胞定位。方法根据TgAQP氨基酸序列设计B细胞抗原多肽,并将合成的多肽与KLH偶联作为免疫原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过... 目的研制抗弓形虫水通道蛋白(TgAQP)的特异性多肽抗体,并应用于检测弓形虫ME49株中水通道蛋白的表达和亚细胞定位。方法根据TgAQP氨基酸序列设计B细胞抗原多肽,并将合成的多肽与KLH偶联作为免疫原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA、Western blot和免疫荧光的方法对所得抗体进行鉴定。结果选定并合成抗原表位多肽,与KLH偶联作为免疫原制备多克隆抗体;经ELISA测定其多肽抗体效价达1∶40 000;Western blot表明制备的抗体能特异地识别天然弓形虫中29.9kDa处的条带,与预测的TgAQP相对分子量大小相符;免疫荧光检测到抗血清识别的蛋白定位于弓形虫胞质中。结论制备了抗弓形虫水通道蛋白多肽的多克隆抗体,为进一步研究弓形虫水通道蛋白的生物学功能和代谢特点奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 水通道蛋白 多肽抗体 亚细胞定位

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C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步临床应用 被引量：4

6

作者 马强 李来庆 +4 位作者 贺安 林冠峰 邹丽萍 李明 吴英松 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第7期670-676,共7页

建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86... 建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86306M)混合包被96孔板,然后用Sm3+标记抗C肽单克隆抗体(Medix No.9103),Eu3+标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No.E86802M),运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法.结果显示:C肽分析灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0.5～22μg/L,平均回收率达到99.6%,分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%.胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L,线性范围为3.6～180 mU/L,平均回收率为99.4%,分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%.C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份,检测结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.98与0.99.总之,自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求,有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂,可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选. 展开更多

关键词 双标记 时间分辨荧光免疫分析 C肽 胰岛素

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HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制 被引量：5

7

作者 马强 贺安 +5 位作者 董志宁 刘天才 邹丽萍 林冠峰 李明 吴英松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期810-812,共3页

目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间... 目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性(r=0.961)。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒e抗体 光激化学发光 试剂盒

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siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

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作者 牟霞 陈瑶 +1 位作者 王穗海 李明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期682-685,共4页

目的探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼... 目的探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响。方法采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1(VCC-1)基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果Western blot结果显示RNA干扰组(shVCC1-1组)细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01),MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组(P<0.05)。结论 siRNA靶向抑制VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。 展开更多

关键词 VCC-1 肝癌 SMMC7721细胞 SIRNA

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百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

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作者 马强 林冠峰 +2 位作者 邹丽萍 李明 吴英松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1509-1512,共4页

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交... 目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。 展开更多

关键词 百日咳 S1亚基 时间分辨免疫荧光分析法

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狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒研制 被引量：4

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作者 黄黉 林冠峰 +3 位作者 陈少琅 刘天才 李明 吴英松 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期562-565,569,共5页

目的研制狂犬病毒(RV)核蛋白(NP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500mEU/mL,灵敏度为1.018mEU/mL,精密度良好,分析内... 目的研制狂犬病毒(RV)核蛋白(NP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500mEU/mL,灵敏度为1.018mEU/mL,精密度良好,分析内精密度为2.7%～9.3%,分析间精密度为3.5%～12.2%。将15份疫苗样品用本法与国内常用ELISA检测试剂盒同时检测,其相关系数r为0.85,稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定半年,37℃稳定7d。结论试剂盒各项已检测指标达到临床检验要求,有望进一步作临床检测试验。 展开更多

关键词 狂犬病毒 核蛋白 定量检测 双抗夹心时间分辨免疫荧光分析

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靶向糖基转移酶shRNA表达质粒对LoVo细胞侵袭和增殖能力的抑制作用 被引量：3

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作者 贺富丽 马强 张健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1071-1078,共8页

通过构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)干扰表达质粒,研究了shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.设计了靶向GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA... 通过构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)干扰表达质粒,研究了shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.设计了靶向GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染人结肠癌LoVo细胞,通过G418筛选建立稳定低表达GnT-Ⅴ基因的细胞株.分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测shRNA对GnT-Ⅴ基因mRNA及蛋白质表达的影响.并通过CCK-8增殖实验、异质黏附实验、划痕愈合实验、趋化运动实验、细胞侵袭实验评价pGPU6/GFP/Neo GnT-ⅤshRNA对人结肠癌LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.实验成功地构建了GnT-Ⅴ shRNA表达质粒,并且该质粒明显下调GnT-Ⅴ的表达,LoVo GnT-Ⅴ/1564和LoVo GnT-Ⅴ/2224的mRNA水平的抑制率分别为82%和71.5%,蛋白质水平的抑制率分别为68%和56%.选择干扰效率较高的LoVo GnT-Ⅴ/1564进行进一步实验.CCK-8增殖实验显示,与阴性对照组相比,LoVo GnT-Ⅴ/1564的增殖受到明显抑制(P<0.001),尤以72h为著;下调GnT-Ⅴ表达可增强LoVo细胞的黏附能力(t=-3.357,P<0.01),而显著抑制LoVo细胞的趋化运动能力(t=44.051,P<0.001);划痕实验结果也显示抑制GnT-Ⅴ表达延长LoVo细胞的愈合时间;用Matrigel胶介导的细胞侵袭实验结果显示,LoVo GnT-Ⅴ/1564和LoVo GnT-Ⅴ/NC的穿膜细胞数分别为(5.10±1.25)个和(39.55±2.16)个,GnT-Ⅴ/1564组较阴性对照组明显减少(t=61.626,P<0.001).结果表明,靶向GnT-Ⅴ的shRNA真核表达质粒可以显著降低GnT-Ⅴ的表达,从而抑制LoVo细胞的增殖、迁移和侵袭能力,因此,该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗结直肠癌的有效靶点. 展开更多

关键词 GnT-Ⅴ RNAI 结直肠癌 侵袭能力

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基因芯片在痘病毒对宿主基因转录调控中的应用

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作者 陈达香 郝文波 +2 位作者 陈瑜 陈慧芹 罗树红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期569-575,共7页

痘病毒(Poxvirus)是病毒颗粒最大的一类DNA病毒,结构复杂;感染人和动物后常引起局部或全身化脓性皮肤损害,给畜牧业带来严重的经济损失同时也威胁着人类健康。痘病毒可通过多种策略调控宿主基因的转录进而影响其免疫应答。基因芯片通过... 痘病毒(Poxvirus)是病毒颗粒最大的一类DNA病毒,结构复杂;感染人和动物后常引起局部或全身化脓性皮肤损害,给畜牧业带来严重的经济损失同时也威胁着人类健康。痘病毒可通过多种策略调控宿主基因的转录进而影响其免疫应答。基因芯片通过对宿主细胞在病毒感染前后基因表达谱的检测,为病毒的致病机制及病毒感染对宿主的调控机制的研究提供了便利手段。本文综述了有关基因芯片在痘病毒研究中的应用。 展开更多

关键词 痘病毒 基因芯片 基因表达谱

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