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柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析 被引量:4
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作者 宋远斌 何思杰 +4 位作者 余楠 陈欣欣 王斌 车小燕 曾其毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1713-1717,共5页
目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16... 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 VP1蛋白 VP2蛋白 VP3蛋白 VP4蛋白 克隆 原核表达 抗原反应性
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西尼罗河病毒NS1的克隆、表达及抗原性分析 被引量:2
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作者 郭勇晖 温坤 +3 位作者 潘玉先 丘立文 丁细霞 车小燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期545-548,共4页
目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗... 目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗体并应用Western Blot方法分析WNV-NS1重组蛋白的抗原性。结果重组质粒pGEX-5X-3-WNV-NS1经IPTG诱导,高效表达GST-NS1融合蛋白,经变性纯化和复性获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,经Western Blot证实WNV-NS1重组蛋白可与各型登革病毒免疫小鼠血清及部分4型登革病毒NS1交叉单抗识别。结论成功获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,该蛋白与登革病毒NS1具有抗原交叉反应性,其结果为建立西尼罗河病毒的血清学诊断和鉴别诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 西尼罗河病毒 登革病毒 非结构蛋白 原核表达
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抗Ⅳ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量:4
3
作者 丁细霞 狄飚 车小燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期777-779,783,共4页
目的:研制Ⅳ型登革病毒(DENV-4)非结构蛋白1(NS1)特异性的单克隆抗体(mAbs),并鉴定其特异性。方法:在表达具有良好抗原性的重组DENV4-NS1蛋白的基础上,用重组DENV4-NS1蛋白和灭活的DENV-4免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓... 目的:研制Ⅳ型登革病毒(DENV-4)非结构蛋白1(NS1)特异性的单克隆抗体(mAbs),并鉴定其特异性。方法:在表达具有良好抗原性的重组DENV4-NS1蛋白的基础上,用重组DENV4-NS1蛋白和灭活的DENV-4免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光测定法(IFA)和Western blot分析对mAb的特异性进行鉴定;通过竞争抑制试验对mAb识别的抗原位点进行分析。结果:获得15株特异性针对DENV4-NS1的mAbs,与其他3型DENV的NS1不产生交叉反应。mAb的Ig亚类测定均为IgG1。竞争抑制试验显示,15株mAbs存在2个不同识别抗原位点。结论:成功地获得特异性针对DENV4-NS1蛋白的mAbs,为进一步研究DENV4-NS1蛋白的结构与功能及研制DENV-4的临床诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 非结构蛋白1 单克隆抗体
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流式细胞术鉴定特异性识别曲霉孢子单克隆抗体 被引量:1
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作者 余楠 袁小澎 +3 位作者 晋晶 郝卫 王艳芳 车小燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期487-489,共3页
目的筛选可以与悬浮状态下曲霉孢子结合的特异性单克隆抗体。方法采用流式细胞术检测与曲霉活孢子结合的单抗。结果 2株单抗MA3和Con2可特异性结合悬浮状态下的烟曲霉孢子,其中单抗MA3可结合烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉等常见致病... 目的筛选可以与悬浮状态下曲霉孢子结合的特异性单克隆抗体。方法采用流式细胞术检测与曲霉活孢子结合的单抗。结果 2株单抗MA3和Con2可特异性结合悬浮状态下的烟曲霉孢子,其中单抗MA3可结合烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉等常见致病曲霉孢子。结论成功筛选到2株特异性结合曲霉孢子的单抗。 展开更多
关键词 流式细胞术 曲霉单抗 鉴定
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免疫蛋白质组技术小鼠血清样品处理方法的比较分析
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作者 江凌晓 蔡建飘 +3 位作者 郝卫 潘玉先 王艳芳 车小燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第19期3479-3481,共3页
目的:建立适用于侵袭性真菌感染免疫蛋白质组学研究的小鼠血清样品处理方法。方法:用白蛋白和IgG去除试剂盒及CLEANUP试剂盒处理血清,比较处理与未经处理样品的二维凝胶电泳图谱,以及ECL显色图谱的差异。并对该处理方法的稳定性和重复... 目的:建立适用于侵袭性真菌感染免疫蛋白质组学研究的小鼠血清样品处理方法。方法:用白蛋白和IgG去除试剂盒及CLEANUP试剂盒处理血清,比较处理与未经处理样品的二维凝胶电泳图谱,以及ECL显色图谱的差异。并对该处理方法的稳定性和重复性进行初步评价。结果:用白蛋白和IgG去除试剂盒及CLEANUP试剂盒处理小鼠血清样品的二维凝胶电泳图谱有更好的分辨率,其ECL显色图有更高的特异性和敏感性。且该处理方法重复性较好。结论:建立稳定的侵袭性真菌感染小鼠血清样品的处理方法,为进一步开展基于双向电泳的免疫蛋白质组学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 免疫蛋白质类 小鼠 血清
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