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应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
被引量：
2
1
作者
徐劲松
蔡绍曦
+3 位作者
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期82-85,共4页
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T／A连接构建文库,将连...
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T／A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落．PCR进行鉴定。结果扩增消减cDNA文库获得3 000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用 PCR进行扩增,90％的克隆中均有200-600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论用SSH法及T／A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库．该消减 cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础。
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关键词
哮喘
嗜酸细胞
抑制消减杂交
基因文库
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职称材料
题名
应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
被引量：
2
1
作者
徐劲松
蔡绍曦
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
机构
南方医科大学
南方
医院呼吸科
南方医科大学热带卫生医学系
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期82-85,共4页
基金
国家自然科学基金(30270593)
广东省自然科学基金(A001031)
文摘
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库。方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T／A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落．PCR进行鉴定。结果扩增消减cDNA文库获得3 000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用 PCR进行扩增,90％的克隆中均有200-600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段。结论用SSH法及T／A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库．该消减 cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础。
关键词
哮喘
嗜酸细胞
抑制消减杂交
基因文库
Keywords
asthma
eosinophil
suppressed subtractive hybridization
library
分类号
R562.25 [医药卫生—呼吸系统]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库
徐劲松
蔡绍曦
邹飞
佟万成
万为人
赵海金
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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