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人DJ-1蛋白在NIH3T3细胞中的表达与定位
1
作者
唐靖
刘靖华
+5 位作者
蓝兴国
李志杰
刘亚伟
赵明哲
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期530-534,共5页
采用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）示踪的方法,研究人DJ-1蛋白在真核细胞中的定位及其对刺激的反应.将克隆在pGEX-KG上的DJ-1亚克隆到载体pEGFP-C2上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染NIH3T3细胞;并用荧光显微镜观察pEGFP-...
采用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）示踪的方法,研究人DJ-1蛋白在真核细胞中的定位及其对刺激的反应.将克隆在pGEX-KG上的DJ-1亚克隆到载体pEGFP-C2上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染NIH3T3细胞;并用荧光显微镜观察pEGFP-DJ-1在细胞内的定位以及在血清刺激时的移位;探讨在氧化应激时DJ-1对细胞的保护作用,以及其在细胞内定位的变化.重组质粒在NIH3T3细胞中得到高效表达,绿色荧光弥散分布于胞质、胞核中,但以胞质居多;血清刺激后,细胞中的绿色荧光从胞质移位到胞核;在200～600 μmol/L H2O2刺激下,DJ-1能有效保护细胞抵抗氧化应激,并且也能从胞质移位到胞核.上述研究结果为进一步研究DJ-1蛋白的功能提供了一个重要依据.
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关键词
DJ-1蛋白
增强型绿色荧光蛋白
双氧水
血清
转染
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职称材料
一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选
被引量：
2
2
作者
刘瑜
刘亚伟
+3 位作者
李海玉
刘靖华
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期491-497,共7页
以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide...
以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide,CPP).采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamHⅠ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在KpnⅠ和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamHⅠ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选.酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了105个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选.
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关键词
细胞穿透多肽
随机多肽文库
跨膜转运
内化
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职称材料
题名
人DJ-1蛋白在NIH3T3细胞中的表达与定位
1
作者
唐靖
刘靖华
蓝兴国
李志杰
刘亚伟
赵明哲
邓鹏
姜勇
机构
南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室和病理生理学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期530-534,共5页
基金
国家重点基础研究发展规划(973规划)项目(No.2002CB513005)
广东省科技计划项目(No.A1090202)
+1 种基金
广州市科技计划项目(No.2001-z-035-01-1)
广东省自然科学基金重点项目(No.13058)资助~~
文摘
采用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）示踪的方法,研究人DJ-1蛋白在真核细胞中的定位及其对刺激的反应.将克隆在pGEX-KG上的DJ-1亚克隆到载体pEGFP-C2上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染NIH3T3细胞;并用荧光显微镜观察pEGFP-DJ-1在细胞内的定位以及在血清刺激时的移位;探讨在氧化应激时DJ-1对细胞的保护作用,以及其在细胞内定位的变化.重组质粒在NIH3T3细胞中得到高效表达,绿色荧光弥散分布于胞质、胞核中,但以胞质居多;血清刺激后,细胞中的绿色荧光从胞质移位到胞核;在200～600 μmol/L H2O2刺激下,DJ-1能有效保护细胞抵抗氧化应激,并且也能从胞质移位到胞核.上述研究结果为进一步研究DJ-1蛋白的功能提供了一个重要依据.
关键词
DJ-1蛋白
增强型绿色荧光蛋白
双氧水
血清
转染
Keywords
human DJ- 1 protein
enhanced green fluorescence protein
H2O2
serum
transfection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选
被引量：
2
2
作者
刘瑜
刘亚伟
李海玉
刘靖华
邓鹏
姜勇
机构
南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室和病理生理学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期491-497,共7页
基金
国家973计划项目(No.2002CB513005)
国家高技术研究发展(863)计划课题(No.2001AA234061)
+2 种基金
广州市科技计划项目(No.2001-Z-035-01-1)
广东省自然科学基金重点项目(No.13058)
广东省科技计划项目(NO.A1090202)~~
文摘
以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide,CPP).采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamHⅠ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在KpnⅠ和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamHⅠ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选.酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了105个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选.
关键词
细胞穿透多肽
随机多肽文库
跨膜转运
内化
Keywords
cell penetrating peptide
random peptide library
translocation across cell membrane
internalization
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人DJ-1蛋白在NIH3T3细胞中的表达与定位
唐靖
刘靖华
蓝兴国
李志杰
刘亚伟
赵明哲
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选
刘瑜
刘亚伟
李海玉
刘靖华
邓鹏
姜勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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职称材料
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