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非小细胞肺癌组织中PTEN和HAb18G的表达及相关关系研究 被引量:2
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作者 徐小艳 郅程 +1 位作者 陈清 申洪 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第5期701-704,共4页
目的:定量分析PTEN和HAb18G在非小细胞肺癌组织中的表达特点,并探讨其相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测肺癌、肺良性病变和正常肺组织中PTEN和HAb18G蛋白的表达,用ImageProPlus图像分析软件对PTEN和HAb18G蛋白的阳性单位(PU)进行定... 目的:定量分析PTEN和HAb18G在非小细胞肺癌组织中的表达特点,并探讨其相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测肺癌、肺良性病变和正常肺组织中PTEN和HAb18G蛋白的表达,用ImageProPlus图像分析软件对PTEN和HAb18G蛋白的阳性单位(PU)进行定量测试。结果:PTEN蛋白在肺癌组织中的表达明显低于肺良性病变和正常肺组织(P<0.05),与肺癌分化、淋巴结转移及pTNM分期均无关(P>0.05),周围性大于中央型(P<0.05)。HAb18G蛋白在肺癌组织中的表达明显高于肺良性病变和正常肺组织(P<0.05),与肺癌分化、淋巴结转移及pTNM分期均有关(P<0.05)。不同类型的肺组织中PTEN和HAb18G蛋白表达之间呈负相关(r=-0.312,P=0.002)。结论:PTEN的低表达或缺失,可能与HAb18G的异常激活有一定关系,从而对肺癌的发生、发展起重要作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺 PTEN HAB18G MMPS VEGF 定量分析 相关性
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靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定 被引量:5
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作者 田平阁 周春平 +5 位作者 张超 杨慧 吴小金 陆滟霞 刘国炳 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期761-766,共6页
目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出... 目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 CD133 噬菌体展示 肽库
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Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用 被引量:6
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作者 陈芳 周畅 +4 位作者 陆艳霞 袁理 彭皤莉 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期654-660,共7页
目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列... 目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVYHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027-显著低于癌旁组织的0-066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miRl86重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、L0VO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 HSA MIR 186 慢病毒 增殖 迁移 侵袭
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多配体聚糖结合蛋白在大肠癌组织中的表达及其对预后的影响 被引量:4
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作者 刘会平 杨磊 +2 位作者 丁彦青 赵震 于倩 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1003-1007,共5页
目的通过对109例结肠癌患者中多配体聚糖结合蛋白(SDCBP)表达的分析,探讨其临床意义及对患者预后的影响。方法免疫组织化学法检测109例有10年随访资料,诊断为原发性结直肠癌患者中SDCBP的表达,分析其表达与结直肠癌患者各临床因素之间... 目的通过对109例结肠癌患者中多配体聚糖结合蛋白(SDCBP)表达的分析,探讨其临床意义及对患者预后的影响。方法免疫组织化学法检测109例有10年随访资料,诊断为原发性结直肠癌患者中SDCBP的表达,分析其表达与结直肠癌患者各临床因素之间的关系,生存分析采用Kaplan-Meier和Cox回归分析法。结果 SDCBP的表达对结直肠肠癌患者的淋巴结转移、TNM分期及术后的生存期均有显著影响(P=0.001)、(P=0.033)、(P=0.004),但与患者的年龄,性别,肿瘤浸润深度,组织分化以及病理类型没有关系。Kaplan-Meier法检验,结果显示,109例结直肠癌患者中SDCBP高低表达组患者术后平均生存期及7年累计生存率分别为:52.300±6.508(月)、86.184±5.358(月);38.6±6.4(%)、61.5±6.7(%),整体水平及各组间水平的差异经Log-rank法分析均有统计学意义(χ2=10.585,P=0.001);Cox回归分析法发现:SDCBP的高表达和发生淋巴结转移是患者死亡的主要影响因素(B=0.605,P=0.034;B=0.677,P=0.013)。结论 SDCBP可作为提示大肠癌淋巴结转移、TNM分期及预后的一项指标。 展开更多
关键词 免疫组织化学 大肠癌 预后
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CD133^+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定
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作者 吴小金 陈芳 +5 位作者 陆滟霞 杨慧 彭璠莉 袁理 刘国炳 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期349-353,共5页
目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态... 目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。 展开更多
关键词 人脐血 CD133+ 造血祖细胞 干性 培养 鉴定
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人结肠癌细胞Dickkopf-1的表达水平及意义
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作者 于倩 杨磊 +2 位作者 丁彦青 赵震 刘会平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期923-925,933,共4页
目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达... 目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达情况。结果荧光定量分析显示,DKK1在HT29、HCT116中的表达高于其他四株细胞(P<0.05);Western blot显示,DKK1在HCT116、HT29中的表达同样高于其他四株细胞;细胞免疫组化染色显示,DKK1在六株结肠癌细胞株中呈阳性表达。结论 DKK1在6株人结肠癌细胞系中的表达具有差异性。 展开更多
关键词 人结肠癌细胞株 DICKKOPF-1 时实定量PCR Western BLOTTING 细胞免疫组织化学
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