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Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用 被引量:6
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作者 陈芳 周畅 +4 位作者 陆艳霞 袁理 彭皤莉 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期654-660,共7页
目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列... 目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVYHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027-显著低于癌旁组织的0-066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miRl86重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、L0VO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。 展开更多
关键词 结肠癌细胞 HSA MIR 186 慢病毒 增殖 迁移 侵袭
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多配体聚糖结合蛋白在大肠癌组织中的表达及其对预后的影响 被引量:4
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作者 刘会平 杨磊 +2 位作者 丁彦青 赵震 于倩 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1003-1007,共5页
目的通过对109例结肠癌患者中多配体聚糖结合蛋白(SDCBP)表达的分析,探讨其临床意义及对患者预后的影响。方法免疫组织化学法检测109例有10年随访资料,诊断为原发性结直肠癌患者中SDCBP的表达,分析其表达与结直肠癌患者各临床因素之间... 目的通过对109例结肠癌患者中多配体聚糖结合蛋白(SDCBP)表达的分析,探讨其临床意义及对患者预后的影响。方法免疫组织化学法检测109例有10年随访资料,诊断为原发性结直肠癌患者中SDCBP的表达,分析其表达与结直肠癌患者各临床因素之间的关系,生存分析采用Kaplan-Meier和Cox回归分析法。结果 SDCBP的表达对结直肠肠癌患者的淋巴结转移、TNM分期及术后的生存期均有显著影响(P=0.001)、(P=0.033)、(P=0.004),但与患者的年龄,性别,肿瘤浸润深度,组织分化以及病理类型没有关系。Kaplan-Meier法检验,结果显示,109例结直肠癌患者中SDCBP高低表达组患者术后平均生存期及7年累计生存率分别为:52.300±6.508(月)、86.184±5.358(月);38.6±6.4(%)、61.5±6.7(%),整体水平及各组间水平的差异经Log-rank法分析均有统计学意义(χ2=10.585,P=0.001);Cox回归分析法发现:SDCBP的高表达和发生淋巴结转移是患者死亡的主要影响因素(B=0.605,P=0.034;B=0.677,P=0.013)。结论 SDCBP可作为提示大肠癌淋巴结转移、TNM分期及预后的一项指标。 展开更多
关键词 免疫组织化学 大肠癌 预后
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CD133^+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定
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作者 吴小金 陈芳 +5 位作者 陆滟霞 杨慧 彭璠莉 袁理 刘国炳 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期349-353,共5页
目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态... 目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。 展开更多
关键词 人脐血 CD133+ 造血祖细胞 干性 培养 鉴定
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人结肠癌细胞Dickkopf-1的表达水平及意义
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作者 于倩 杨磊 +2 位作者 丁彦青 赵震 刘会平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期923-925,933,共4页
目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达... 目的检测六株结肠癌细胞中Dickkopf-1(DKK1)的表达并探讨其意义。方法在6株结肠癌细胞(SW480、SW620、HT29、LS174T、LOVO、HCT116)分别应用qPCR方法检测DKK1的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测DKK1的蛋白表达情况。结果荧光定量分析显示,DKK1在HT29、HCT116中的表达高于其他四株细胞(P<0.05);Western blot显示,DKK1在HCT116、HT29中的表达同样高于其他四株细胞;细胞免疫组化染色显示,DKK1在六株结肠癌细胞株中呈阳性表达。结论 DKK1在6株人结肠癌细胞系中的表达具有差异性。 展开更多
关键词 人结肠癌细胞株 DICKKOPF-1 时实定量PCR Western BLOTTING 细胞免疫组织化学
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