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糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的研究
被引量：
7
1
作者
卢非凡
王卫国
+2 位作者
郭万首
程立明
张启栋
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期631-636,669,共7页
目的探讨糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的机制。方法分离培养人骨微血管内皮细胞,取第3代细胞,给予不同剂量的氢化可的松处理24 h,浓度分别为0.1 mg/mL(低剂量)、0.2 mg/mL(中剂量)和0.3 mg/mL(...
目的探讨糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的机制。方法分离培养人骨微血管内皮细胞,取第3代细胞,给予不同剂量的氢化可的松处理24 h,浓度分别为0.1 mg/mL(低剂量)、0.2 mg/mL(中剂量)和0.3 mg/mL(高剂量),Western blot法检测PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化形式的表达,AnnexinV/PI染色的流式细胞检测细胞凋亡。结果Western blot电泳条带灰度值分析提示高浓度氢化可的松可以使该通路关键蛋白表达下降。与对照组相比,0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.3 mg/mL三组的p-Akt表达分别下降60.72%、61.91%、100.00%(P<0.01)。p-PI3K表达分别下降12.95%、36.26%、100.00%(P<0.01)。p-mTOR表达分别下降22.95%、41.28%、57.11%(P<0.01)。流式细胞检测显示正常对照组的早期凋亡、晚期凋亡/坏死以及活细胞比例分别为16.08%、30.86%和52.52%;激素损伤组这一比例分别为21.67%、37.2%、39.85%。激素损伤+PI3K抑制剂组这一比例分别为19.05%、37.9%和41.26%。统计学分析显示细胞比例组间差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论糖皮质激素可以显著抑制人股骨头骨微血管内皮细胞内PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白的表达,从而诱导股骨头骨微血管内皮细胞发生凋亡和坏死。
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关键词
糖皮质激素
股骨头坏死
骨微血管内皮细胞
信号通路
凋亡
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职称材料
适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化
被引量：
1
2
作者
陈纳淳
吴汉森
+12 位作者
邓仲豪
廖哲霆
冯舒皓
骆梓恒
楚玉豪
邱耿韬
李啸宇
金昱
戎圣炜
王富华
甘露
陈如歌
赵亮
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1310-1318,共9页
目的优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统...
目的优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法(短时间消化和长时间消化)和优化提取法;通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性;通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集,分析优化提取法的可靠性。结果在3次重复实验中,优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液,细胞数量超过105,且细胞活率最高,平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34^(+),MCAM+细胞以及COL1A1^(+)胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现,优化提取法也能捕获COL3A1^(+)细胞,COL1A1^(+)细胞,MYLK^(+)细胞,BMP2^(+)细胞,CD93^(+)细胞和CDK1^(+)细胞。结论优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。
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关键词
半月板
细胞提取
单细胞悬液
单细胞测序
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职称材料
题名
糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的研究
被引量：
7
1
作者
卢非凡
王卫国
郭万首
程立明
张启栋
机构
南方医科大学南方医院骨科-关节与骨病外科
中日友好
医院
骨科
一部
出处
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期631-636,669,共7页
基金
国家自然科学基金(82072494)
南方医科大学南方医院院长基金(2021c026)。
文摘
目的探讨糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的机制。方法分离培养人骨微血管内皮细胞,取第3代细胞,给予不同剂量的氢化可的松处理24 h,浓度分别为0.1 mg/mL(低剂量)、0.2 mg/mL(中剂量)和0.3 mg/mL(高剂量),Western blot法检测PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化形式的表达,AnnexinV/PI染色的流式细胞检测细胞凋亡。结果Western blot电泳条带灰度值分析提示高浓度氢化可的松可以使该通路关键蛋白表达下降。与对照组相比,0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.3 mg/mL三组的p-Akt表达分别下降60.72%、61.91%、100.00%(P<0.01)。p-PI3K表达分别下降12.95%、36.26%、100.00%(P<0.01)。p-mTOR表达分别下降22.95%、41.28%、57.11%(P<0.01)。流式细胞检测显示正常对照组的早期凋亡、晚期凋亡/坏死以及活细胞比例分别为16.08%、30.86%和52.52%;激素损伤组这一比例分别为21.67%、37.2%、39.85%。激素损伤+PI3K抑制剂组这一比例分别为19.05%、37.9%和41.26%。统计学分析显示细胞比例组间差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论糖皮质激素可以显著抑制人股骨头骨微血管内皮细胞内PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白的表达,从而诱导股骨头骨微血管内皮细胞发生凋亡和坏死。
关键词
糖皮质激素
股骨头坏死
骨微血管内皮细胞
信号通路
凋亡
Keywords
glucocorticoids
osteonecrosis of femoral head
bone microvascular endothelial cells
signal pathway
apoptosis
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化
被引量：
1
2
作者
陈纳淳
吴汉森
邓仲豪
廖哲霆
冯舒皓
骆梓恒
楚玉豪
邱耿韬
李啸宇
金昱
戎圣炜
王富华
甘露
陈如歌
赵亮
机构
南方医科大学南方医院骨科-关节与骨病外科
南方医科大学
珠江
医院
院办
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1310-1318,共9页
基金
国家自然科学基金(31771051)
广东省自然科学基金(2018B030311041)
广州市科技计划(201803010114)。
文摘
目的优化半月板细胞提取的方法,缩短细胞提取时间,稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液,使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性,细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法(短时间消化和长时间消化)和优化提取法;通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性;通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集,分析优化提取法的可靠性。结果在3次重复实验中,优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液,细胞数量超过105,且细胞活率最高,平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34^(+),MCAM+细胞以及COL1A1^(+)胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现,优化提取法也能捕获COL3A1^(+)细胞,COL1A1^(+)细胞,MYLK^(+)细胞,BMP2^(+)细胞,CD93^(+)细胞和CDK1^(+)细胞。结论优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。
关键词
半月板
细胞提取
单细胞悬液
单细胞测序
Keywords
meniscus
cell extraction
single-cell suspension
single-cell RNA sequencing
分类号
R68 [医药卫生—骨科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的研究
卢非凡
王卫国
郭万首
程立明
张启栋
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化
陈纳淳
吴汉森
邓仲豪
廖哲霆
冯舒皓
骆梓恒
楚玉豪
邱耿韬
李啸宇
金昱
戎圣炜
王富华
甘露
陈如歌
赵亮
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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