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不同离心方法提取及鉴定精浆外泌体的效果比较 被引量:2
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作者 郭文彬 张万松 +5 位作者 杨诚 卞军 杨建昆 刘存东 亓涛 王春艳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第2期158-162,共5页
目的超速离心法、ExoPerfect^(TM)?MU法和PEG6000法比较提取精浆外泌体的应用报道较少。文中旨在比较及鉴定超速离心法,ExoPerfect^(TM)?MU法及PEG6000法提取的精浆外泌体,为外泌体的研究提供不同的选择方法。方法收集2017年3月至7月南... 目的超速离心法、ExoPerfect^(TM)?MU法和PEG6000法比较提取精浆外泌体的应用报道较少。文中旨在比较及鉴定超速离心法,ExoPerfect^(TM)?MU法及PEG6000法提取的精浆外泌体,为外泌体的研究提供不同的选择方法。方法收集2017年3月至7月南方医科大学南方医院检验中心30例正常志愿者的精浆样本。随机平均分成3份,分别采用超速离心法,ExoPerfect^(TM)?MU法及PEG6000法获取提取物,随后采用纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,透射电子显微镜观察其形态,蛋白印迹法检测其典型标志蛋白质。结果超速离心法提取的精浆外泌体中CD63、TSG101含量[(3.29±0.22)、(0.84±0.03)]最多,其次分别是ExoPerfect^(TM)?MU法[(3.25±0.17)、(0.75±0.02)]、PEG6000法[(2.62±0.06)、(0.54±0.10)],差异有统计学意义(P<0.05)。纳米颗粒跟踪分析仪结果提示MODE曲线线性流畅,精浆外泌体直径大小较为集中,粒径峰值平均值分别为105、102、115 nm,差异无统计学意义(P>0.05)。PEG6000法提取精浆外泌体的浓度、电镜下数量[(11.90±1.78)×108/mL、(4.7±1.7)个]较超速离心法[(21.20±0.98)×108/mL、(7.0±1.6)个],ExoPerfect^(TM)?MU法[(19.74±1.45)×108/mL、(6.0±1.63)个]均明显降低(P<0.01);ExoPerfect^(TM)?MU法离心时间[(30±5)min]较超速离心法、PEG6000法[(140±20)、(120±10)min]明显缩短(P<0.001)。结论超速离心法、ExoPerfect^(TM)?MU法、PEG6000法均能成功提取及鉴定精浆外泌体。超速离心法、ExoPerfect^(TM)?MU法外泌体产量较多,ExoPerfect^(TM)?MU法简捷方便。根据不同试验的实际需要,选择合适高效的外泌体提取方法尤为重要。 展开更多
关键词 精浆 外泌体 超速离心 ExoPerfectTM-MU PEG6000
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