目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中...目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。展开更多
文摘目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。
文摘目的研究上调四分子交联体5(Tspan-5)表达对结直肠癌细胞转移能力的影响。方法构建Tspan-5基因真核表达载体Tspan-5/pEGFP-C1,采用基因转染技术上调Tspan-5在低转移潜能结直肠癌细胞株LST-R1中的表达,采用Western blotting和激光共聚焦鉴定转染结果。采用异质黏附实验研究LST-R1黏附性改变,趋化运动实验研究运动性改变,穿膜侵袭实验研究侵袭性改变,裸鼠肝转移模型研究肝转移能力改变。结果 Western blotting结果显示稳定转染重组Tspan-5真核表达载体的LST-R1细胞表达Tspan-5/EGFP重组蛋白,激光共聚焦显微镜观察显示重组蛋白定位于细胞膜。异质黏附和趋化运动实验显示,上调Tspan-5表达可显著增强LST-R1细胞在基底膜主要成分Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、玻连蛋白(VN)上的黏附性(P<0.001)及运动性(P<0.001),并可增强LST-R1细胞的侵袭性(P<0.001)。体内肝转移模型显示,上调Tspan-5表达可显著促进LST-R1细胞在裸鼠体内的肝转移能力(P<0.001)。结论 Tspan-5在结直肠癌细胞的转移中发挥重要作用。
