目的观察慢病毒载体转染豚鼠巩膜成纤维细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法转染组用慢病毒携带绿色荧光蛋白(lentiviral mediated green fluorescent protein,Lenti-GFP)转染豚鼠巩膜成纤维细胞,对照组加入空白培养液,转染组按最佳...目的观察慢病毒载体转染豚鼠巩膜成纤维细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法转染组用慢病毒携带绿色荧光蛋白(lentiviral mediated green fluorescent protein,Lenti-GFP)转染豚鼠巩膜成纤维细胞,对照组加入空白培养液,转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、200、400加入Lenti-GFP,转染2d、3d、4d、5d、6d和7d后,在倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测转染效率,MTT法检测病毒对细胞增殖的影响。结果 Lenti-GFP转染细胞后48h可以看见绿色荧光;在同一MOI值下,随时间延长转染效率增高,第5天达到高峰;在MOI为400,转染5d时转染效率达82.86%;转染5d行MTT检测显示:MOI为50～400时,同一转染时间各组IOD值与对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论慢病毒载体可以在体外稳定而有效地转染豚鼠巩膜成纤维细胞,且不影响细胞活性,是巩膜成纤维细胞理想的基因转染载体。展开更多
目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中...目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。展开更多
文摘目的观察慢病毒载体转染豚鼠巩膜成纤维细胞的有效性及对细胞活性的影响。方法转染组用慢病毒携带绿色荧光蛋白(lentiviral mediated green fluorescent protein,Lenti-GFP)转染豚鼠巩膜成纤维细胞,对照组加入空白培养液,转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50、100、200、400加入Lenti-GFP,转染2d、3d、4d、5d、6d和7d后,在倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测转染效率,MTT法检测病毒对细胞增殖的影响。结果 Lenti-GFP转染细胞后48h可以看见绿色荧光;在同一MOI值下,随时间延长转染效率增高,第5天达到高峰;在MOI为400,转染5d时转染效率达82.86%;转染5d行MTT检测显示:MOI为50～400时,同一转染时间各组IOD值与对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论慢病毒载体可以在体外稳定而有效地转染豚鼠巩膜成纤维细胞,且不影响细胞活性,是巩膜成纤维细胞理想的基因转染载体。
文摘目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化。方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃5%CO2孵箱中进行培养。分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化。结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合;槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92%降低到2.74%,G1期星形胶质细胞百分比从82.04%增加到92.06%,其S和G2期有一个相应的减少;50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50%,具有明显的统计学差异(F=40.579,P<0.01)。结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期。
文摘目的研究上调四分子交联体5(Tspan-5)表达对结直肠癌细胞转移能力的影响。方法构建Tspan-5基因真核表达载体Tspan-5/pEGFP-C1,采用基因转染技术上调Tspan-5在低转移潜能结直肠癌细胞株LST-R1中的表达,采用Western blotting和激光共聚焦鉴定转染结果。采用异质黏附实验研究LST-R1黏附性改变,趋化运动实验研究运动性改变,穿膜侵袭实验研究侵袭性改变,裸鼠肝转移模型研究肝转移能力改变。结果 Western blotting结果显示稳定转染重组Tspan-5真核表达载体的LST-R1细胞表达Tspan-5/EGFP重组蛋白,激光共聚焦显微镜观察显示重组蛋白定位于细胞膜。异质黏附和趋化运动实验显示,上调Tspan-5表达可显著增强LST-R1细胞在基底膜主要成分Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、玻连蛋白(VN)上的黏附性(P<0.001)及运动性(P<0.001),并可增强LST-R1细胞的侵袭性(P<0.001)。体内肝转移模型显示,上调Tspan-5表达可显著促进LST-R1细胞在裸鼠体内的肝转移能力(P<0.001)。结论 Tspan-5在结直肠癌细胞的转移中发挥重要作用。
