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肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性
被引量：
4
1
作者
宋远斌
余楠
+4 位作者
何思杰
陈欣欣
王斌
车小燕
曾其毅
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1846-1850,共5页
目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔...
目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被免疫兔血清特异识别。结论肠道病毒71型VP1~VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考。
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关键词
肠道病毒71型
基因克隆
原核表达
免疫原性
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职称材料
加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失
2
作者
邹德亮
温晓君
+3 位作者
张雪莲
吴晓伟
周万军
吴英松
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第18期1901-1904,共4页
目的设计加尾引物多重PCR策略,并采用此技术建立一种快速检测Y染色体15个STS位点微缺失的多重PCR方法。方法以Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域15个特异性序列标签位点(sequence-tagged site,STS)为扩增子,根据加尾引物多...
目的设计加尾引物多重PCR策略,并采用此技术建立一种快速检测Y染色体15个STS位点微缺失的多重PCR方法。方法以Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域15个特异性序列标签位点(sequence-tagged site,STS)为扩增子,根据加尾引物多重PCR策略设计5'端加尾引物,建立一种Y染色体微缺失多重PCR体系;并检测18例已知样本和112例临床样本观察其灵敏度与准确性。结果基于此策略的多重PCR体系优化过程简单快速,建立的多重PCR检测体系稳定可靠,各目的条带的电泳分析亮度基本一致;18例已知样本的检测结果与靶值相符;112例临床样本的检测结果也与对照方法一致。结论本研究设计的加尾引物策略可提高多重PCR扩增效率,简化优化过程,为其他多重PCR检测体系的设计与建立提供参考和借鉴;建立的Y染色体AZF15个STS位点微缺失多重PCR检测方法结果稳定,可供临床样本的快速检测。
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关键词
多重PCR
Y染色体
微缺失
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职称材料
题名
肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性
被引量：
4
1
作者
宋远斌
余楠
何思杰
陈欣欣
王斌
车小燕
曾其毅
机构
南方医科大学
珠江医院儿科
中心
南方医科大学医学检验中心
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1846-1850,共5页
基金
国家重大科技专项课题(2009ZX10004-306)
广州市医药卫生科技重大项目(201102A211007)
文摘
目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被免疫兔血清特异识别。结论肠道病毒71型VP1~VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考。
关键词
肠道病毒71型
基因克隆
原核表达
免疫原性
Keywords
enterovirus 71
gene clone
prokaryotic expression
immunogenicity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失
2
作者
邹德亮
温晓君
张雪莲
吴晓伟
周万军
吴英松
机构
南方医科大学
生物技术学院
南方医科大学
基础
医学
院
医学
遗传学教研室
南方医科大学
华银
医学检验中心
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第18期1901-1904,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(81370670)
文摘
目的设计加尾引物多重PCR策略,并采用此技术建立一种快速检测Y染色体15个STS位点微缺失的多重PCR方法。方法以Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域15个特异性序列标签位点(sequence-tagged site,STS)为扩增子,根据加尾引物多重PCR策略设计5'端加尾引物,建立一种Y染色体微缺失多重PCR体系;并检测18例已知样本和112例临床样本观察其灵敏度与准确性。结果基于此策略的多重PCR体系优化过程简单快速,建立的多重PCR检测体系稳定可靠,各目的条带的电泳分析亮度基本一致;18例已知样本的检测结果与靶值相符;112例临床样本的检测结果也与对照方法一致。结论本研究设计的加尾引物策略可提高多重PCR扩增效率,简化优化过程,为其他多重PCR检测体系的设计与建立提供参考和借鉴;建立的Y染色体AZF15个STS位点微缺失多重PCR检测方法结果稳定,可供临床样本的快速检测。
关键词
多重PCR
Y染色体
微缺失
分类号
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
R446.9 [医药卫生—诊断学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性
宋远斌
余楠
何思杰
陈欣欣
王斌
车小燕
曾其毅
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
加尾引物多重PCR技术检测Y染色体微缺失
邹德亮
温晓君
张雪莲
吴晓伟
周万军
吴英松
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
已选择
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