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不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响 被引量：26
1
作者 孟民杰 杨钦河 +8 位作者 王强 陈雪梅 王凤珍 王彦平 唐海兰 程少冰 凌家生 温承远 谢芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1551-1555,共5页
目的:观察疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响。方法:利用高脂饮食、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝实验动物模型,同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预。12周后以Ⅳ型胶... 目的:观察疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响。方法:利用高脂饮食、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝实验动物模型,同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预。12周后以Ⅳ型胶原酶、蛋白酶E联合灌注消化、梯度离心、选择性贴壁分离不同组别大鼠Kupffer细胞,采用Western blotting方法检测不同组别大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平的变化。结果:模型组大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较正常组明显增加(P<0.01),各干预组ERK1/2表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较模型组显著降低(P<0.01),其中疏肝组(柴胡疏肝散:柴胡、川芎、枳壳、陈皮、白芍、香附、炙甘草)、健脾组(参苓白术散:人参、白术、茯苓、薏苡仁、砂仁、山药、桔梗、白扁豆、莲子、炙甘草)ERK1/2蛋白表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达下降最为明显。结论:在大鼠脂肪肝的形成过程中Kupffer细胞ERK1/2蛋白高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能起到了重要作用,Kupffer细胞ERK1/2蛋白的高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能参与并促进了脂肪性肝损伤,抑制ERK1/2蛋白的表达及磷酸化可能是健脾疏肝等治法方药抗实验性大鼠脂肪肝的作用机制之一。 展开更多
关键词 脂肪肝 大鼠 有些分裂素激活蛋白激酶类 中草药
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RNA干扰热休克蛋白90α表达对NIH-3T3细胞应激反应的影响 被引量：1
2
作者 陈雪梅 邹飞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1118-1120,共3页
目的用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对细胞应激反应的影响。方法将人Hsp90αRNA干扰基因片段连接入pSilencer2.1-U6neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴... 目的用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对细胞应激反应的影响。方法将人Hsp90αRNA干扰基因片段连接入pSilencer2.1-U6neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴定后,用电穿孔法转染到小鼠成纤维细胞系NIH-3T3细胞内。经G418筛选、克隆分离培养,用免疫荧光、免疫印迹鉴定阳性克隆。用高温作用(44℃,40min)模拟氧化应激环境,以NIH-3T3细胞为对照,流式细胞仪测定DNA受损细胞数,分析在细胞应激状态下对细胞膜和DNA的损害及HSP90低表达对细胞应激反应的影响。结果转染pSilencerHSP90的NIH-3T3细胞Hsp90免疫荧光染色减弱,主要分布于胞浆;与对照相比,44℃,40min时DNA的损害加重(9.2%vs18.5%,P<0.01)。结论建立稳定低表达HSP90αNIH-3T3细胞株;热休克蛋白90表达与其应激保护作用密切相关。 展开更多
关键词 HSP90 RNA干扰 转染 氧化应激
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预热适应成纤维细胞NIH-3T3应激保护相关蛋白的初步筛选
3
作者 陈雪梅 邹飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1493-1496,共4页
目的:初步分析应激与适应对蛋白质合成的影响,筛选应激适应相关蛋白。方法:通过双向电泳分离总蛋白、PDQUEST软件分析、肽质量指纹图谱分析候选蛋白肽段组成,分析应激与适应对细胞蛋白质合成的影响。初步鉴定应激适应蛋白质点的类别。结... 目的:初步分析应激与适应对蛋白质合成的影响,筛选应激适应相关蛋白。方法:通过双向电泳分离总蛋白、PDQUEST软件分析、肽质量指纹图谱分析候选蛋白肽段组成,分析应激与适应对细胞蛋白质合成的影响。初步鉴定应激适应蛋白质点的类别。结果:预适应后再次热应激组表达增加的蛋白质点在各分子量范围均有分布,而直接热应激组表达增加的蛋白质点大多局限于低分子量范围。肽质量指纹图谱分析候选蛋白序列,初步鉴定了Tubu linβ、中间丝vim entin、起始因子eIF-4AI、Eno1蛋白与应激适应密切相关。结论:细胞在紧急应激状态,可能会倾向于选择性地合成能够迅速翻译的小分子量蛋白质,应对应激损伤。预适应可通过提高细胞内保护性蛋白的贮备量,在再次应激时发挥保护作用。Tubu linβ、中间丝vim entin、起始因子eIF-4AI、Eno1蛋白差异表达,提示细胞骨架、蛋白质合成、糖代谢通路在应激适应中的重要作用。 展开更多
关键词 热预处理 应激 蛋白质组 成纤维细胞
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