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表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试 被引量:2
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作者 邓胜群 邓茗芝 +2 位作者 陈嘉婷 郑丽兰 彭鸿娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期750-754,共5页
目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得... 目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果。结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性。表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107cells/m L,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果。当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4∶1、1∶1和1∶4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002)。结论表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果。 展开更多
关键词 AaIT Cyt2Ba 白纹伊蚊 致倦库蚊 苏云金杆菌毒素
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应用改良凝集试验(MAT)法检测东北地区野生鸟类弓形虫感染的血清学调查
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作者 巫水珍 魏海霞 +2 位作者 程鑫宇 戎可 彭鸿娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期658-663,共6页
目的了解中国东北地区野生鸟类的弓形虫感染情况。方法在对东北地区野生鸟类进行调查时,从翼根静脉采集约500μL全血,凝血后分别分离出血清,采用改良凝集试验(MAT)方法检测血清中弓形虫抗体的阳性率。结果共收集到179份野生鸟类血清样本... 目的了解中国东北地区野生鸟类的弓形虫感染情况。方法在对东北地区野生鸟类进行调查时,从翼根静脉采集约500μL全血,凝血后分别分离出血清,采用改良凝集试验(MAT)方法检测血清中弓形虫抗体的阳性率。结果共收集到179份野生鸟类血清样本,其中弓形虫阳性血清样本20份,总的血清阳性率约为11.17%。179只野生鸟隶属于9目17科31种,其中鸽形目、雀形目、隼形目、鴷形目、佛法僧目、雁形目的血清阳性率分别为5.26%(1/19),9.09%(9/99),14.29%(3/21),15.00%(5/22),16.67%(1/6),和25.00%(1/4)。按不同食性分类,肉食性、杂食性或水生动植物为食的鸟类的血清阳性率分别为12.00%(3/25),10.60%(15/141),15.38%(2/13)。按照鸟类是否迁徙分类,候鸟和留鸟的血清阳性率分别为11.67%(14/120),10.71%(6/59)。结论东北地区的野生鸟类中弓形虫抗体的阳性率约为11.17%,显示弓形虫感染现象常见于野生鸟类。 展开更多
关键词 野生鸟类 弓形虫 改良凝集试验
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基于线粒体COI基因分析广州市15个白纹伊蚊种群的遗传多样性 被引量:8
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作者 郑梓豪 吴珊珊 +2 位作者 魏勇 钟代斌 郑学礼 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期985-994,共10页
目的探讨广州市白纹伊蚊不同地理种群的遗传多样性、遗传分化和系统发育关系。方法本实验于2020年9月至2020年11月期间,采集广州市11个行政区的共计15个白纹伊蚊种群。单只蚊虫提取基因组DNA,通过PCR法扩增COI基因序列并测序,获得的序列... 目的探讨广州市白纹伊蚊不同地理种群的遗传多样性、遗传分化和系统发育关系。方法本实验于2020年9月至2020年11月期间,采集广州市11个行政区的共计15个白纹伊蚊种群。单只蚊虫提取基因组DNA,通过PCR法扩增COI基因序列并测序,获得的序列在GenBank上经过BLAST比对。BioEdit 7.2软件观察序列峰图。MEGA X软件对齐序列,分析碱基组成,构建系统发育树(NJ法)。DNAsp 6.12软件分析位点多态性,单倍型及其多样性,进行错配分布分析。Arlequin 3.5软件进行分子变异分析、进行中性检验。DAMBE 7.2软件分析序列的系统发育信号。PopART 1.7软件构建单倍型网络图(Median joining法)。结果广州市15个白纹伊蚊种群共获得642条序列,其长度为603 bp。A碱基加T碱基平均含量是67.5%,符合线粒体DNA的AT偏向性。单倍型分析共检出45种单倍型,其中单倍型1为优势单倍型。中性检验表明广州市部分种群不符合中性理论,但大部分种群都经历过种群扩张,而错配分布却表明仅有少部分种群经历过种群扩张。Mantel检验表明15个白纹伊蚊种群不存在地理隔离现象。种群遗传分化显示各种群间交流较频繁,且种群间的遗传分化很低,差异更多来自于个体间。结论广州市的白纹伊蚊种群间基因交流较频繁,遗传分化小,遗传多样性偏低。这可能使不同地理种群的白纹伊蚊具有相似的媒介能力。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ 种群遗传多样性
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RNAi在抗蚊媒病毒感染中的研究进展 被引量:4
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作者 魏勇 何玉兰 郑学礼 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期153-160,共8页
蚊媒病因具有较高的发病率和传播率使其成为全球关注的重要公共卫生问题。蚊虫作为蚊媒病的传播媒介,研究其与蚊媒病毒两者之间的相互作用机制将有助于蚊媒病的防控。蚊虫抵御蚊媒病毒的先天免疫降低和病毒成功逃避蚊虫免疫屏障为病毒... 蚊媒病因具有较高的发病率和传播率使其成为全球关注的重要公共卫生问题。蚊虫作为蚊媒病的传播媒介,研究其与蚊媒病毒两者之间的相互作用机制将有助于蚊媒病的防控。蚊虫抵御蚊媒病毒的先天免疫降低和病毒成功逃避蚊虫免疫屏障为病毒在蚊虫体内的持续感染和蚊媒病的暴发流行造成了潜在风险。RNA干扰(RNA interference,RNAi)途径作为蚊虫体内强大的抗病毒防御屏障,通过产生多种小RNA降解病毒RNA,从而达到抑制病毒复制和传播的目的。本文对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA)、Piwi蛋白相作用RNA(Piwi-interacting RNA,piRNA)等3种小分子RNA在蚊虫体内发挥抗蚊媒病毒感染的先天免疫机制的相关研究进行了综述,以期为蚊媒病的防控提供理论参考。 展开更多
关键词 蚊虫 蚊媒病毒 SIRNA MIRNA PIRNA
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白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系的筛选及其对登革病毒的易感性 被引量:2
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作者 贾志荣 刘转转 +5 位作者 王晓明 Tricia WILLIAMS 刘培文 李小聪 闫桂云 陈晓光 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期11-17,共7页
【目的】建立白纹伊蚊Aedes albopictus抗溴氰菊酯的蚊虫品系,对比白纹伊蚊敏感株和抗性株对登革病毒的易感性差异。【方法】采用浸渍法测定溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫的半数致死浓度(LC_(50));再以LC_(50)水平的溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫进... 【目的】建立白纹伊蚊Aedes albopictus抗溴氰菊酯的蚊虫品系,对比白纹伊蚊敏感株和抗性株对登革病毒的易感性差异。【方法】采用浸渍法测定溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫的半数致死浓度(LC_(50));再以LC_(50)水平的溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫进行群体筛选至第11代,并通过接触筒法检测各代成蚊抗性。以白纹伊蚊敏感株和获得的抗性株(第9代)雌蚊吸食含2型登革病毒(DENV-2)的血餐,于感染后0,4,7和10 d解剖蚊虫,收集中肠、卵巢和唾液腺,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR分别检测各组织的DENV-2病毒感染率和感染量。【结果】白纹伊蚊经溴氰菊酯筛选至第9代后抗性趋于稳定。第9代抗性株幼虫的LC_(50)为0.053 mg/L,抗性倍数为10.58,成蚊生测的蚊虫死亡率为80%,已达到中度抗性。感染后0 d,所有蚊虫的中肠均可测得DENV-2,而且抗性株的平均病毒感染量高于敏感株;后续时间点敏感株与抗性株蚊虫中肠均保持92.75%~97.18%的病毒感染率,且二株之间无显著性差异(P>0.05)。感染后4 d,两株蚊虫的卵巢中均可检测到DENV-2,感染后7 d和10 d的卵巢病毒感染率均显著高于4 d时(P<0.05),但在7 d和10 d两个时间点,敏感株和抗性株之间均无统计学差异(P>0.05),然而抗性株平均病毒感染量在每一个时间点都显著高于敏感株(P<0.05)。蚊虫唾液腺于感染后7 d检测到DENV-2,10 d时唾液腺的病毒感染率无明显升高且两株蚊虫之间病毒感染率和感染量均无统计学差异(P>0.05)。【结论】经溴氰菊酯的筛选使白纹伊蚊幼虫及成蚊抗性水平逐渐升高,建立了白纹伊蚊抗溴氰菊酯的实验室品系。DENV-2对白纹伊蚊抗性株和敏感株各个组织的感染率相近,但感染量有所不同,说明对溴氰菊酯有中度抗性的白蚊伊蚊对登革病毒的易感性在一定程度上发生了改变。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 抗药性 溴氰菊酯 登革病毒 易感性
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蚊虫组学研究进展 被引量:2
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作者 吴恙 周腾飞 +12 位作者 赖泽钿 谢李华 谢雨谷 刘培文 刘通 杨文强 金彬彬 孔翎 郭怡佳 赵宜洁 邓洁琳 顾金保 陈晓光 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期789-797,共9页
近年来,随着高通量测序技术和生物信息学分析技术的成熟和不断革新,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学也获得了快速发展。迄今为止,已有包括白纹伊蚊、埃及伊蚊、冈比按蚊在内约22种媒介蚊虫的基因组被解析报道。不同蚊种的基因组大小... 近年来,随着高通量测序技术和生物信息学分析技术的成熟和不断革新,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学也获得了快速发展。迄今为止,已有包括白纹伊蚊、埃及伊蚊、冈比按蚊在内约22种媒介蚊虫的基因组被解析报道。不同蚊种的基因组大小差异很大,且与基因组中的重复序列的多少呈正相关;蚊基因组的解析和比较基因组的分析有助于探索蚊基因组的结构和功能;转录组的研究为蚊虫嗅觉、性别决定、胚胎发育等相关基因的研究提供了有效手段;小RNA组的研究揭示了miRNA和piRNA在蚊媒抗病毒免疫通路中具有重要作用。综上所述,蚊虫组学研究为防治媒介蚊虫和蚊媒传染病病提供了理论基础和数据支撑。 展开更多
关键词 媒介 基因组学 转录组学 小RNA组学 蚊媒传染病
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弓形虫感染导致DC2.4细胞外泌体特征差异的研究 被引量:1
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作者 李东亮 杨淑君 彭鸿娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期727-732,共6页
目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感... 目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感染组用弓形虫RH株速殖子感染28 h,未感染组则培养28 h。收集两组细胞的培养上请,采用超速离心法分别提取外泌体,通过透射电镜检测外泌体形态,并用纳米颗粒追踪仪检测外泌体的粒径大小以及颗粒密度。对外泌体进行小RNA高通量测序分析,用生物信息学方法分析感染组与对照组差异显著的piRNA,对并其靶基因及功能进行预测。结果对弓形虫感染与未感染的DC2.4细胞分泌的外泌体进行形态学鉴定以及粒径大小和密度的比较,发现弓形虫感染会导致DC2.4分泌的外泌体密度增加;而通过外泌体小RNA测序,发现弓形虫感染会导致外泌体中miRNA及piRNA数目增加,其中感染后显著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576。对上述piRNA靶基因的预测和KEGG分析,显示这些靶基因显著富集到MAPK、Ras、cAMP、actin细胞骨架调节、粘着斑形成、轴突导向等信号通路上。结论弓形虫感染导致DC2.4细胞分泌的外泌体粒径尺寸峰值增大和密度增加,miRNA及piRNA数目增加,提示外泌体在弓形虫-宿主细胞互作中起着重要作用。 展开更多
关键词 弓形虫 DC2.4细胞 外泌体 小RNA
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