目的:探究紫外线(UV)对黑色素瘤细胞A375自噬的诱导效应及自噬与凋亡之间的相互调控。方法:模拟日光UV(95%UVA,5%UVB)照射A375后,自噬慢病毒监测不同时间点细胞自噬的变化;流式细胞术分析30 m J/cm2混合照后6、9 h细胞凋亡的变化;蛋白...目的:探究紫外线(UV)对黑色素瘤细胞A375自噬的诱导效应及自噬与凋亡之间的相互调控。方法:模拟日光UV(95%UVA,5%UVB)照射A375后,自噬慢病毒监测不同时间点细胞自噬的变化;流式细胞术分析30 m J/cm2混合照后6、9 h细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法检测30 m J/cm2照并干扰自噬后对凋亡标志蛋白的影响。结果:(1)UV能诱导A375自噬,10、30 m J/cm2的UV照后6 h能监测到细胞形成自噬体、9 h达高峰,50 m J/cm2照射组在照后6 h达自噬高峰且持续到观察时间的结束;(2)单纯UVB对自噬的诱导能力明显高于单纯UVA,且二者表现为协同效应;(3)30 m J/cm2的UV照射,在照后9 h发现Caspase 3、9表达降低,抑制自噬后,6、9 h凋亡标志蛋白Caspase 3、9表达增高,两组细胞在6、9 h的早期凋亡百分率差异显著(P<0.01)。结论:UV能够诱导A375自噬,UVB的贡献高于UVA。UV诱导的自噬能够推迟凋亡发生,对细胞起保护作用。展开更多
目的研究PM2.5联合中波紫外线(UVB)处理对人皮肤角质形成细胞Ha Ca T的影响。方法收集环境中PM2.5并进行其金属成分分析;MTT法测定PM2.5对Ha Ca T细胞的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为空白对照组(NC组)、单纯IC50浓度的PM2.5处理组(PM2....目的研究PM2.5联合中波紫外线(UVB)处理对人皮肤角质形成细胞Ha Ca T的影响。方法收集环境中PM2.5并进行其金属成分分析;MTT法测定PM2.5对Ha Ca T细胞的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为空白对照组(NC组)、单纯IC50浓度的PM2.5处理组(PM2.5组)、单纯30 m J/cm2的UVB照射组(UVB组)和PM2.5联合UVB处理组(联合处理组),MTT法检测不同处理组对细胞活力的抑制;流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响;Western blot检测不同处理后PARP、LC3的蛋白表达变化。结果 PM2.5样品中金属成分有Ca、Ba、Al、Cu、Pb等;PM2.5对Ha Ca T细胞的IC50约为300μg/m L;不同处理组之间,在处理后24 h,对细胞活力的抑制差异显著(P<0.001),其中联合处理组细胞对比NC组活力最低(P<0.001);流式分析结果显示,与NC组比,PM2.5组、UVB组以及联合处理组细胞凋亡率增加(P<0.01),联合处理组凋亡率较PM2.5组增加(P<0.05),但低于UVB照射组(P<0.01);Western blot显示PM2.5组、UVB组以及联合处理组LC3-Ⅱ、PARP蛋白较NC组均有增加,联合处理组PARP较UVB组减少,LC3-Ⅱ较PM2.5组、UVB组增加。结论 PM2.5能增加UVB对Ha Ca T细胞的损伤,其主要可能通过增加细胞自噬,而非凋亡方式。展开更多
文摘目的:探究紫外线(UV)对黑色素瘤细胞A375自噬的诱导效应及自噬与凋亡之间的相互调控。方法:模拟日光UV(95%UVA,5%UVB)照射A375后,自噬慢病毒监测不同时间点细胞自噬的变化;流式细胞术分析30 m J/cm2混合照后6、9 h细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法检测30 m J/cm2照并干扰自噬后对凋亡标志蛋白的影响。结果:(1)UV能诱导A375自噬,10、30 m J/cm2的UV照后6 h能监测到细胞形成自噬体、9 h达高峰,50 m J/cm2照射组在照后6 h达自噬高峰且持续到观察时间的结束;(2)单纯UVB对自噬的诱导能力明显高于单纯UVA,且二者表现为协同效应;(3)30 m J/cm2的UV照射,在照后9 h发现Caspase 3、9表达降低,抑制自噬后,6、9 h凋亡标志蛋白Caspase 3、9表达增高,两组细胞在6、9 h的早期凋亡百分率差异显著(P<0.01)。结论:UV能够诱导A375自噬,UVB的贡献高于UVA。UV诱导的自噬能够推迟凋亡发生,对细胞起保护作用。
文摘目的研究PM2.5联合中波紫外线(UVB)处理对人皮肤角质形成细胞Ha Ca T的影响。方法收集环境中PM2.5并进行其金属成分分析;MTT法测定PM2.5对Ha Ca T细胞的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为空白对照组(NC组)、单纯IC50浓度的PM2.5处理组(PM2.5组)、单纯30 m J/cm2的UVB照射组(UVB组)和PM2.5联合UVB处理组(联合处理组),MTT法检测不同处理组对细胞活力的抑制;流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响;Western blot检测不同处理后PARP、LC3的蛋白表达变化。结果 PM2.5样品中金属成分有Ca、Ba、Al、Cu、Pb等;PM2.5对Ha Ca T细胞的IC50约为300μg/m L;不同处理组之间,在处理后24 h,对细胞活力的抑制差异显著(P<0.001),其中联合处理组细胞对比NC组活力最低(P<0.001);流式分析结果显示,与NC组比,PM2.5组、UVB组以及联合处理组细胞凋亡率增加(P<0.01),联合处理组凋亡率较PM2.5组增加(P<0.05),但低于UVB照射组(P<0.01);Western blot显示PM2.5组、UVB组以及联合处理组LC3-Ⅱ、PARP蛋白较NC组均有增加,联合处理组PARP较UVB组减少,LC3-Ⅱ较PM2.5组、UVB组增加。结论 PM2.5能增加UVB对Ha Ca T细胞的损伤,其主要可能通过增加细胞自噬,而非凋亡方式。
