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用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素
被引量:
10
1
作者
耿朝晖
郜鹏
+4 位作者
刘莹
赵东明
张宝珠
俞新大
李建民
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期59-63,共5页
利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rB...
利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0
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关键词
BAC-TO-BAC系统
昆虫细胞
HGH
基因表达
杆状病毒
生长激素
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职称材料
质膜H^+-ATPase磷酸化对其活性的调节
被引量:
4
2
作者
凌启阆
向左云
+1 位作者
刘华
尚克进
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998年第3期346-349,共4页
质膜H+┐ATPase磷酸化对其活性的调节*凌启阆向左云刘华尚克进(南开大学生物化学及分子生物学系,天津300071)RegulationofPMH+┐ATPaseActivitybyItsPhosphorylati...
质膜H+┐ATPase磷酸化对其活性的调节*凌启阆向左云刘华尚克进(南开大学生物化学及分子生物学系,天津300071)RegulationofPMH+┐ATPaseActivitybyItsPhosphorylationLingQi-LangXian...
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关键词
植物质膜
ATP酶
磷酸化
调控
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职称材料
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失
被引量:
2
3
作者
杨其伟
陈雅文
+2 位作者
张学
陈德风
张自立
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997年第2期145-149,共5页
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酞胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响.利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体pSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记...
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酞胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响.利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体pSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体pSV2neo-beta-gal.将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的HeLa转化细胞系HeLa-beta-gal.使用PARP酶抑制剂苯甲酸胺处理细胞5周,随后进行细胞基因组Southern杂交分析与细胞内容物β-半乳苷酶的活性检测.结果表明,经BA处理的HeLa-beta-gal细胞β-半乳糖苷酶的活性及杂交带密度与未经BA处理的HeLa-beta-gal细胞相比未有明显区别.结合以前的结果可以认为,PARP酶抑制剂BA并不能导致所有外源基因的丢失,且使用PARP酶抑制剂BA引起外源基因的丢失具有选择性.
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关键词
LACZ基因
整合
PARP抑制剂
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职称材料
红檵木DNA提取及其检测
被引量:
4
4
作者
唐前瑞
李晨东
+3 位作者
陈德富
陈喜文
陈友云
周朴华
《湖南林业科技》
2001年第4期29-30,共2页
用改良的异丙醇沉淀法对红木 (Loropetalumchinensevar .rubrum)叶片总DNA进行了提取。结果表明 ,OD2 60 /OD2 80 值接近 1 80 ,符合RAPD分析的要求 ,且方法简便 ,成本低 ,速度快。
关键词
红檵木
DNA
提取
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职称材料
真核细胞基因工程产物人生长激素的纯化研究
5
作者
于自然
俞新大
+4 位作者
周卫东
耿朝晖
张宝珠
李建民
崔同昌
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997年第6期695-698,共4页
应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对真核细胞基因表达产物人生长激素进行了纯化研究,发现在71.67%的乙晴浓度下人生长激素可有效地与其它杂蛋白分离,乙晴与人生长激素的短时间接触不影响其放射免疫活性.
关键词
人生长激素
纯化
基因工程
真核细胞
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职称材料
题名
用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素
被引量:
10
1
作者
耿朝晖
郜鹏
刘莹
赵东明
张宝珠
俞新大
李建民
机构
南开大学生物化学及分子生物学系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期59-63,共5页
基金
国家"九五"重点科技攻关项目资助 (No .96 12 0 46 0 1)
文摘
利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0
关键词
BAC-TO-BAC系统
昆虫细胞
HGH
基因表达
杆状病毒
生长激素
Keywords
Bac To Bac system, insect cells, human growth hormone gene, expression
分类号
Q575.11 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
质膜H^+-ATPase磷酸化对其活性的调节
被引量:
4
2
作者
凌启阆
向左云
刘华
尚克进
机构
南开大学生物化学及分子生物学系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998年第3期346-349,共4页
基金
国家自然科学基金
文摘
质膜H+┐ATPase磷酸化对其活性的调节*凌启阆向左云刘华尚克进(南开大学生物化学及分子生物学系,天津300071)RegulationofPMH+┐ATPaseActivitybyItsPhosphorylationLingQi-LangXian...
关键词
植物质膜
ATP酶
磷酸化
调控
Keywords
Plasma membrane H+ATPase,Activity regulation,Phosphorylation
分类号
Q946.5 [生物学—植物学]
Q734 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失
被引量:
2
3
作者
杨其伟
陈雅文
张学
陈德风
张自立
机构
南开大学
分子生物学
研究所
南开大学生物化学及分子生物学系
出处
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997年第2期145-149,共5页
基金
国家自然科学基金!39480016
文摘
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酞胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响.利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体pSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体pSV2neo-beta-gal.将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的HeLa转化细胞系HeLa-beta-gal.使用PARP酶抑制剂苯甲酸胺处理细胞5周,随后进行细胞基因组Southern杂交分析与细胞内容物β-半乳苷酶的活性检测.结果表明,经BA处理的HeLa-beta-gal细胞β-半乳糖苷酶的活性及杂交带密度与未经BA处理的HeLa-beta-gal细胞相比未有明显区别.结合以前的结果可以认为,PARP酶抑制剂BA并不能导致所有外源基因的丢失,且使用PARP酶抑制剂BA引起外源基因的丢失具有选择性.
关键词
LACZ基因
整合
PARP抑制剂
Keywords
LacZ gene, Integration, Inhibitor of PARP, Selective deletion
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
红檵木DNA提取及其检测
被引量:
4
4
作者
唐前瑞
李晨东
陈德富
陈喜文
陈友云
周朴华
机构
湖南农业
大学
植物科技学院
南开大学生物化学及分子生物学系
湖南农业
大学
科技处
湖南农业
大学
理学院
出处
《湖南林业科技》
2001年第4期29-30,共2页
文摘
用改良的异丙醇沉淀法对红木 (Loropetalumchinensevar .rubrum)叶片总DNA进行了提取。结果表明 ,OD2 60 /OD2 80 值接近 1 80 ,符合RAPD分析的要求 ,且方法简便 ,成本低 ,速度快。
关键词
红檵木
DNA
提取
Keywords
Loropetalum chinense var. rubum
DNA
extraction
分类号
S718.43 [农业科学—林学]
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职称材料
题名
真核细胞基因工程产物人生长激素的纯化研究
5
作者
于自然
俞新大
周卫东
耿朝晖
张宝珠
李建民
崔同昌
机构
南开大学生物化学及分子生物学系
南开大学
生命科学学院中心实验室
出处
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997年第6期695-698,共4页
基金
天津市计委资助
文摘
应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对真核细胞基因表达产物人生长激素进行了纯化研究,发现在71.67%的乙晴浓度下人生长激素可有效地与其它杂蛋白分离,乙晴与人生长激素的短时间接触不影响其放射免疫活性.
关键词
人生长激素
纯化
基因工程
真核细胞
Keywords
Human growth hormone,Reversed phase high performance liquid chromatography,Radioimmunoassay
分类号
Q575.110.3 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素
耿朝晖
郜鹏
刘莹
赵东明
张宝珠
俞新大
李建民
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
质膜H^+-ATPase磷酸化对其活性的调节
凌启阆
向左云
刘华
尚克进
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
1998
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失
杨其伟
陈雅文
张学
陈德风
张自立
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
红檵木DNA提取及其检测
唐前瑞
李晨东
陈德富
陈喜文
陈友云
周朴华
《湖南林业科技》
2001
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
5
真核细胞基因工程产物人生长激素的纯化研究
于自然
俞新大
周卫东
耿朝晖
张宝珠
李建民
崔同昌
《生物化学杂志》
CAS
CSCD
1997
0
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