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苯胺和苯酚与环酐的酰胺化及酯化反应 被引量:4
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作者 贺丽鹏 燕方龙 +3 位作者 曹勃阳 路海滨 王曦 王恩思 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期287-290,共4页
研究了环酐与苯胺和苯酚的酰胺化及酯化反应,优化了酰胺化及酯化反应条件.结果表明,环酐的分子结构直接影响反应结果,当酸酐分子存在共轭结构时以N-芳基内酰胺为主要产物.关键中间体及最终化合物的结构经核磁共振氢谱、碳谱及红外光谱确证.
关键词 酰胺化 酯化 酸酐 合成
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糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测 被引量:2
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作者 周大炜 刘斌 +2 位作者 吴俊丽 胡波 齐源远 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2011年第4期193-199,共7页
以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用... 以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的糖基转移酶监测方法。该方法首先直接用质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速检测。研究结果表明,CID MALDI-TOF MS平台适用于新建克隆的糖基转移酶酶活反应的监测,与现有的高通量方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势。 展开更多
关键词 脂寡糖 糖基转移酶 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)
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脂多糖信号通路中的蛋白质修饰 被引量:3
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作者 王颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期505-511,共7页
革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖,又称内毒素,感染宿主后可导致脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合症.脂多糖借助信号转导通路诱发宿主的应答,刺激免疫细胞产生大量具有致热效应的炎性细胞因子,引起免疫系统的过度活化.近年来,研究... 革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖,又称内毒素,感染宿主后可导致脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合症.脂多糖借助信号转导通路诱发宿主的应答,刺激免疫细胞产生大量具有致热效应的炎性细胞因子,引起免疫系统的过度活化.近年来,研究脂多糖受体TLR4及其信号转导在先天免疫和获得性免疫中的作用,以及脂多糖信号通路的复杂调控机制取得了突破性进展.其中蛋白质翻译后修饰参与脂多糖信号通路调节的研究成为这一领域的新热点之一.本文总结了磷酸化修饰、泛素化修饰、ISG15化修饰和SUMO化修饰在调节脂多糖信号通路方面的作用.不仅对被修饰蛋白如何传递和调节脂多糖信号以及翻译后修饰在该过程中的作用进行了阐述,还着眼于不同翻译后修饰形式之间的关联.脂多糖信号通路的深入研究不但有助于阐明内毒素相关疾病的分子机理,还可为临床预防和治疗革兰氏阴性细菌感染所致疾病提供新靶点. 展开更多
关键词 翻译后修饰 脂多糖 信号转导
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产油丝状真菌高山被孢霉中蝶呤类化合物的提取及检测
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作者 王鸿超 陈海琴 +4 位作者 赵建新 陈永泉 张灏 王磊 陈卫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期65-68,共4页
建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定高山被孢霉体内新蝶呤、蝶呤和生物蝶呤的方法。高山被孢霉在液氮破壁、酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化1h、滴加抗坏血酸还原液后,体内的四氢生物蝶呤及其前体二氢蝶呤三磷酸盐和6-丙酮酰四氢生... 建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定高山被孢霉体内新蝶呤、蝶呤和生物蝶呤的方法。高山被孢霉在液氮破壁、酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化1h、滴加抗坏血酸还原液后,体内的四氢生物蝶呤及其前体二氢蝶呤三磷酸盐和6-丙酮酰四氢生物蝶呤分别被氧化成相应的氧化产物新蝶呤、蝶呤、生物蝶呤。经离子交换树脂纯化后,利用高效液相色谱进一步分离得到了氧化产物蝶呤、新蝶呤和生物蝶呤,并采用电喷雾质谱对定性结果进行确认。色谱柱为Inertsil ODS-3C_(18)(5μm,150mm×4.6mm),用10mmol/L的磷酸氢二钠(pH6.0)作为流动相,流速为1.2mL/min,荧光检测器激发波长为350nm,吸收波长为450nm。检测出的新蝶呤、生物蝶呤和蝶呤的检出限依次是:0.003、0.002、0.005μg/mL。本方法能快速并准确的检测各类蝶呤类化合物,为利用高山被孢霉发酵生产四氢生物蝶呤奠定一定基础。 展开更多
关键词 高山被孢霉 四氢生物蝶呤 蝶呤类化合物 高效液相色谱 电喷雾质谱
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大肠杆菌O85 O-抗原基因簇序列破译和特异分子标识的筛选
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作者 王威 刘斌 +3 位作者 刘雪倩 冯露 孙丹 王磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期39-44,共6页
目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85... 目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85的特异基因并设计引物,PCR方法进行模拟环境样品的检测。结果大肠杆菌O85的O-抗原基因簇序列全长为11 203 bp。发现8个开放阅读框架(orf)并确定功能,分别为:UDP-N-乙酰葡萄糖-2-异构酶基因(orf1),吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),糖基转移酶基因(orf3、orf5、orf6和orf8),O-抗原转运酶基因(wzx)和O-抗原聚合酶基因(wzy)。鉴定出针对大肠杆菌O85的特异基因2个和引物4对。结论本文筛选的特异分子标识和PCR检测方法可用于对环境样品中的大肠杆菌O85进行快速、灵敏的检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O85 O-抗原基因簇 分子分型 分子标识
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类泛素化修饰蛋白SUMO1的表达纯化及抗体制备 被引量:2
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作者 祖玲玲 史颖姣 +4 位作者 刘彬 秦宇 王远根 王照娜 王颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1029-1033,共5页
SUMO是近年发现的类泛素化修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的细胞内定位、稳定性及与其它蛋白质的相互作用.为研究蛋白质的SUMO化修饰,本文表达并纯化了重组的人SUMO1,制备了兔抗hSUMO1的多克隆抗体.经ELISA和免疫... SUMO是近年发现的类泛素化修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的细胞内定位、稳定性及与其它蛋白质的相互作用.为研究蛋白质的SUMO化修饰,本文表达并纯化了重组的人SUMO1,制备了兔抗hSUMO1的多克隆抗体.经ELISA和免疫印迹检测,该抗体灵敏度高、特异性好,且能识别内源性SUMO1及其修饰蛋白,可用于SUMO化修饰靶蛋白的鉴定及SUMO化修饰的生物学功能研究. 展开更多
关键词 SUMO1 表达纯化 多克隆抗体
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大肠杆菌O116 O-抗原基因簇的破译及PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 韩巍青 王威 王磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期667-671,共5页
目的测定大肠肝菌O116的O-抗原基因簇序列,鉴定其中的特异基因,建立PCR检测方法,替代传统的血清学检测。方法用长距离PCR方法扩增O116的O-抗原基因簇,PCR产物用鸟枪法建立测序文库进行测序,通过与GenBank中功能已知的蛋白的序列比较,进... 目的测定大肠肝菌O116的O-抗原基因簇序列,鉴定其中的特异基因,建立PCR检测方法,替代传统的血清学检测。方法用长距离PCR方法扩增O116的O-抗原基因簇,PCR产物用鸟枪法建立测序文库进行测序,通过与GenBank中功能已知的蛋白的序列比较,进行基因功能的分析。用PCR方法证明基因簇中寡糖单位处理酶基因的特异性,以寡糖单位处理酶基因为靶基因建立PCR检测方法,并进行灵敏度测试。结果和结论基因簇全长为14323bp,共有11个基因,其中寡糖单位处理酶基因wzx和wzy具有高度特异性。所建立的PCR方法可检测2pg的基因组DNA、0.4CFU/g(猪肉样品)或4×102CFU/g(粪便样品)。可以代替传统的血清学检测。 展开更多
关键词 大肠肝菌O116 O-抗原基因簇 特异基因 PCR检测
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大肠杆菌O110 O-抗原基因簇序列的破译及特异基因鉴定
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作者 夏秋雨 王威 +4 位作者 王岩 李雅玥 郭宏杰 王磊 耿运琪 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期125-128,118,共5页
目的定大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列,对其基因结构进行遗传学分析,鉴定可用于快速分型的特异DNA序列。方法用长距离PCR扩增O-抗原基因簇序列,建立鸟枪法文库进行随机测序,用生物信息学的方法进行序列拼接与分析,根据测定的序... 目的定大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列,对其基因结构进行遗传学分析,鉴定可用于快速分型的特异DNA序列。方法用长距离PCR扩增O-抗原基因簇序列,建立鸟枪法文库进行随机测序,用生物信息学的方法进行序列拼接与分析,根据测定的序列设计引物,用PCR的方法确定针对大肠杆菌O110的特异基因。结果与结论确定了大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列以及该基因簇中7个开放阅读框架(openreadingframe,orf)的功能,分别为糖基转移酶基因(orf1,orf2,orf7),小分子修饰酶基因(orf3,orf5),O-抗原转运酶基因(wzx)和O-抗原聚合酶基因(wzy)。鉴定出了可以用于PCR方法对大肠杆菌O110快速检测的特异基因。 展开更多
关键词 大肠杆菌 O-抗原基因簇 特异基因 分子分型
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