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人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达
1
作者
杨海
王芳宇
+3 位作者
李青旺
胡建宏
董潇潇
单永红
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2013年第10期32-36,共5页
【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pc...
【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mATGFP;用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达,收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】突变基因经测序证实与预期结果一致,且在GME细胞内得到高效表达,细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3)mg/L。【结论】反向PCR法是对AT基因进行定点突变的可靠方法,AT突变基因在GME细胞内可高效表达。
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关键词
反向PCR
人抗凝血酶
Cys248
定点突变
真核表达
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职称材料
题名
人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达
1
作者
杨海
王芳宇
李青旺
胡建宏
董潇潇
单永红
机构
衡阳师范学院生命科学系
西北农林科技大学动物科技学院
南岳生物制药有限公司产品研发部
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2013年第10期32-36,共5页
基金
湖南省自然科学基金-衡阳联合基金项目(13JJ8021)
衡阳市科技计划一般项目(2012KN24)
+1 种基金
衡阳师范学院产学研用一般项目(12CXYY07)
衡阳师范学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目(CXZX1307)
文摘
【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mATGFP;用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达,收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】突变基因经测序证实与预期结果一致,且在GME细胞内得到高效表达,细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3)mg/L。【结论】反向PCR法是对AT基因进行定点突变的可靠方法,AT突变基因在GME细胞内可高效表达。
关键词
反向PCR
人抗凝血酶
Cys248
定点突变
真核表达
Keywords
inverse PCR
human antithrombin
Cys248
site directed mutation
eukaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达
杨海
王芳宇
李青旺
胡建宏
董潇潇
单永红
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2013
0
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