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慢病毒介导PDIA3过表达对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的影响及其机制 被引量:1
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作者 黄靖 闫圣玉 +2 位作者 许志杰 刘婉莹 刘丽兵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第11期1768-1773,共6页
目的探讨蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用及其可能机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Lv-NC组)和PDIA3过表达慢病毒组(Lv-PDIA3组),每组15只。... 目的探讨蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用及其可能机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Lv-NC组)和PDIA3过表达慢病毒组(Lv-PDIA3组),每组15只。采用连续7 d自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立UC小鼠模型,造模成功后开始注射慢病毒干预。慢病毒干预7 d后结束实验,对各组小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,ELISA法检测血清中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及肠黏膜屏障通透性标志物D-乳酸(D-Lac)、二胺氧化酶(DAO)含量,qRT-PCR检测结肠组织中PDIA3 mRNA水平,Western blot检测结肠组织中PDIA3、ZO-1、Occludin、Claudin-1、IκBα、p-NF-κB p65(Ser536)、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Control组比较,Model组小鼠结肠组织受损严重,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平均升高,而ZO-1、Occludin和Claudin-1等蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与Model组比较,Lv-PDIA3组小鼠结肠组织受损程度减轻,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平降低,同时ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.01),而Lv-NC组差异无统计学意义。结论过表达PDIA3能明显改善UC小鼠肠黏膜屏障功能,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 蛋白质二硫键异构酶A3 溃疡性结肠炎 肠黏膜屏障 NF-ΚB信号通路
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抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制 被引量:2
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作者 闫圣玉 谢亚锋 +5 位作者 许志杰 刘英 丁雅婷 张侨 刘菀莹 刘丽兵 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期575-581,共7页
目的:探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法:构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机... 目的:探讨抗菌肽LL-37对结肠癌小鼠肿瘤生长和细胞凋亡的影响,阐明其抗肿瘤作用的可能分子机制。方法:构建LL-37过表达结肠癌HT-29细胞,采用qRT-PCR和Western blotting法检测HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平。30只BALB/c小鼠随机分为对照组(给予未经感染的HT-29细胞)、空载组(给予感染空载质粒的HT-29细胞)、LL-37过表达组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞)、AMPK抑制剂组[给予感染空载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg-1(Dorsomorphin,Dor)]和联合组(给予感染LL-37过表达载体的HT-29细胞后,立刻尾静脉注射2 mg·kg-1 Dor),每组6只。采用结肠癌HT-29细胞复制结肠癌小鼠模型,观察各组小鼠肿瘤体积并绘制生长曲线,感染24 d后剥离肿瘤测量质量并计算抑瘤率,TUNEL染色检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组小鼠肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、Atg5、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ及AMPK/mTOR通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR及p-mTOR表达水平。结果:与对照组和空载组比较,LL-37过表达组小鼠结肠癌HT-29细胞中LL-37 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),肿瘤质量和体积明显降低(P<0.05),抑瘤率升高(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,肿瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值均明显升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显降低(P<0.05);与空载组比较,AMPK抑制剂组小鼠肿瘤质量和体积明显升高(P<0.05)、抑瘤率降低(P<0.05),肿瘤细胞凋亡数减少,自噬相关蛋白Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.05);与LL-37过表达组比较,联合组小鼠肿瘤组织中Beclin1和Atg5表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及p-AMPK/AMPK比值明显降低(P<0.05或P<0.01),p-mTOR/mTOR比值明显升高(P<0.01)。结论:抗菌肽LL-37能激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,进而抑制结肠癌HT-29荷瘤小鼠的肿瘤生长。 展开更多
关键词 抗菌肽LL-37 AMPK/mTOR信号通路 自噬 结肠肿瘤
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抗菌肽LL-37通过激活AMPK介导的自噬对结肠癌HT-29细胞凋亡的研究 被引量:1
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作者 谢亚锋 许志杰 +4 位作者 丁雅婷 闫圣玉 张侨 刘菀莹 刘丽兵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第12期1845-1849,共5页
目的探讨抗菌肽LL-37对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其分子机制。方法以结肠癌HT-29细胞作为研究对象,加入不同浓度(50、100、200μg/ml)的抗菌肽LL-37或联合AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂多索吗啡(10μmol/L)处理48h后,采用流式细胞... 目的探讨抗菌肽LL-37对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其分子机制。方法以结肠癌HT-29细胞作为研究对象,加入不同浓度(50、100、200μg/ml)的抗菌肽LL-37或联合AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂多索吗啡(10μmol/L)处理48h后,采用流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率,Westernblot实验检测HT-29细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)、自噬相关蛋白(Beclin1、Atg5、LC3I和LC3II)和AMPK蛋白的表达。结果高浓度抗菌肽LL-37能促进结肠癌HT-29细胞凋亡(P<0.05),并上调自噬相关蛋白Bec-lin1、Atg5表达水平以及提高LC3II/LC3I值(P<0.05),并且伴随着AMPK异常激活(P<0.01);AMPK抑制剂联合干预能逆转抗菌肽LL-37对HT-29细胞的作用效果。结论抗菌肽LL-37通过激活AMPK介导的自噬促进结肠癌HT-29细胞的凋亡。 展开更多
关键词 结肠癌HT-29细胞 AMPK 抗菌肽LL-37 细胞自噬 细胞凋亡
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红景天苷抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结直肠癌细胞凋亡和自噬 被引量:19
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作者 闫圣玉 谢亚锋 +4 位作者 刘英 许志杰 丁雅婷 张侨 刘菀莹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期61-65,共5页
目的:通过观察红景天苷对人结直肠癌(CRC)HT29细胞体外生长的作用初步探讨其诱导凋亡、自噬的可能机制。方法:不同浓度红景天苷(0.5、1.0、2.0 mmol/L)处理HT29细胞后,MTT法检测细胞增殖情况;赫斯特染色检测HT29细胞凋亡;免疫荧光染色观... 目的:通过观察红景天苷对人结直肠癌(CRC)HT29细胞体外生长的作用初步探讨其诱导凋亡、自噬的可能机制。方法:不同浓度红景天苷(0.5、1.0、2.0 mmol/L)处理HT29细胞后,MTT法检测细胞增殖情况;赫斯特染色检测HT29细胞凋亡;免疫荧光染色观察HT29细胞LC3荧光强度变化;吖啶橙染色观察HT29细胞自噬;Western blot检测HT29细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果:红景天苷显著抑制HT29细胞增殖,且呈剂量依赖性;与对照组相比,红景天苷组(1.0、2.0 mmol/L)细胞凋亡明显增加(P<0.05);红景天苷组LC3荧光染色强度增强;随着红景天苷浓度增加,被吖啶橙着色显红色的酸性囊泡细胞器增加;红景天苷各剂量均可显著抑制HT29细胞内p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达,其中以2 mmol/L红景天苷抑制效果最为显著。结论:红景天苷可抑制人CRC HT29细胞增殖、诱导其自噬、凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 红景天苷 HT29 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素蛋白
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BS69在结直肠癌组织中的表达以及病理相关性研究 被引量:3
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作者 谢亚锋 匡小霞 +4 位作者 许志杰 丁雅婷 闫圣玉 张侨 刘菀莹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期698-701,706,共5页
目的:探讨BS69在结直肠癌组织及细胞系中蛋白和mRNA的表达水平,分析BS69与患者病理特征的相关性。方法:选择2016年8月至2017年10月间手术切除的60例结直肠癌组织和25例癌旁正常组织,采用免疫组化和RTq PCR法检测组织中BS69蛋白和mRNA的... 目的:探讨BS69在结直肠癌组织及细胞系中蛋白和mRNA的表达水平,分析BS69与患者病理特征的相关性。方法:选择2016年8月至2017年10月间手术切除的60例结直肠癌组织和25例癌旁正常组织,采用免疫组化和RTq PCR法检测组织中BS69蛋白和mRNA的表达情况。采用蛋白印迹(Western blot)法检测BS69在三种结直肠癌细胞系和正常结直肠上皮细胞中的蛋白表达。结果:BS69免疫组化染色主要定位于细胞核,少量位于细胞浆。其在结直肠癌和正常结直肠组织中的阳性率分别为65%和87%,差异具有统计学意义(P<0. 05); BS69在结直肠癌组织中的表达水平与Dukes分期、肿瘤组织分级、淋巴结转移及远处转移有相关性(P<0. 05); Western blot检测BS69在3种结直肠癌细胞系与正常结直肠上皮细胞中蛋白表达,各细胞系中结果有明显差异;结直肠癌组织中BS69 mRNA的表达明显低于正常组织,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:BS69是重要的转录抑制因子,可能参与了结直肠癌的发生、发展过程,有望成为特异性较高的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 免疫组化 蛋白印迹 BS69
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