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自噬相关基因3过表达促进乳腺癌细胞自噬并抑制盐霉素诱导的细胞凋亡
被引量：
7
1
作者
李芳
黄果
+4 位作者
彭平
刘瑶
李双辉
刘罗根
章运生
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期162-168,共7页
目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌M...
目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响;并用AKT/mTOR的激动剂(SC79和MHY1485)分析AKT/mTOR信号通路对ATG3过表达促进细胞自噬的影响;通过Western blotting和流式细胞术,同时结合盐霉素和自噬抑制剂(3-MA),分析了自噬对ATG3过表达抑制盐霉素诱导细胞凋亡的影响。结果成功构建稳定高表达ATG3的MCF-7细胞株。ATG3能够促进MCF-7细胞自噬,并且抑制AKT/mTOR信号通路。ATG3明显抑制了盐霉素诱导的细胞凋亡(P<0.01),且ATG3过表达组中促凋亡分子cleaved-caspase 3(P<0.01)和Bax表达明显减少(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多(P<0.05)。自噬的阻滞能够削弱ATG3对盐霉素诱导细胞凋亡的抑制作用。结论 ATG3可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬,并通过细胞自噬减少盐霉素诱导的细胞凋亡。综上提示诱发细胞自噬可能是乳腺癌细胞耐药的机制之一。
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关键词
自噬相关基因3
慢病毒
细胞自噬
盐霉素
乳腺癌
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职称材料
F-box结构域参与FBXO39蛋白对MCF-7细胞增殖的调控
2
作者
李芳
刘罗根
+3 位作者
黄果
戈欣
欧阳靖霖
章运生
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1810-1818,共9页
目的:探讨F-box结构域对FBXO39蛋白调控MCF-7细胞增殖的影响。方法:以MCF-7细胞cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增FBXO39基因的全长cDNA序列并克隆到真核表达载体pEGFP-C2;以pEGFP-FBXO39质粒为模板,构建pEGFP-FBXO39ΔF(F-box结构域缺失...
目的:探讨F-box结构域对FBXO39蛋白调控MCF-7细胞增殖的影响。方法:以MCF-7细胞cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增FBXO39基因的全长cDNA序列并克隆到真核表达载体pEGFP-C2;以pEGFP-FBXO39质粒为模板,构建pEGFP-FBXO39ΔF(F-box结构域缺失)质粒;将重组质粒转染MCF-7细胞后,Western blot验证FBXO39和FBXO39ΔF的表达水平;激光共聚焦显微镜观察FBXO39和FBXO39ΔF的亚细胞定位情况;免疫荧光检测内源性FBXO39在MCF-7细胞中的定位。MTT和EdU试剂盒检测MCF-7细胞的增殖情况;流式细胞术检测MCF-7细胞周期;免疫组化检测FBXO39在乳腺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果:本研究成功构建了pEGFP-FBXO39和pEGFP-FBXO39ΔF真核表达载体。F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有影响。FBXO39促进了MCF-7细胞的增殖,而FBXO39ΔF对MCF-7细胞增殖无明显影响。FBXO39高表达于乳腺癌组织。结论:F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有产生明显影响,但对维持FBXO39的生物学作用至关重要。FBXO39可能与乳腺癌的发生相关。
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关键词
F-box结构域
FBXO39蛋白
乳腺癌
细胞定位
细胞增殖
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职称材料
题名
自噬相关基因3过表达促进乳腺癌细胞自噬并抑制盐霉素诱导的细胞凋亡
被引量：
7
1
作者
李芳
黄果
彭平
刘瑶
李双辉
刘罗根
章运生
机构
湖南环境生物职业技术学院化学教研室
湖南省乳甲疾病防治
临床
医学
研究
中心
南华大学附属第二医院临床研究所
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期162-168,共7页
基金
湖南省自然科学基金(2018JJ3462)
湖南省卫生健康委科研计划(B2019107)
文摘
目的研究人自噬相关基因3(ATG3)过表达对乳腺癌细胞自噬及盐霉素诱导细胞凋亡的影响和机制。方法采用慢病毒的方法,构建了稳定过表达ATG3的乳腺癌MCF-7细胞株;通过Western blotting、免疫荧光和透射电镜等方法分析了ATG3过表达对乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响;并用AKT/mTOR的激动剂(SC79和MHY1485)分析AKT/mTOR信号通路对ATG3过表达促进细胞自噬的影响;通过Western blotting和流式细胞术,同时结合盐霉素和自噬抑制剂(3-MA),分析了自噬对ATG3过表达抑制盐霉素诱导细胞凋亡的影响。结果成功构建稳定高表达ATG3的MCF-7细胞株。ATG3能够促进MCF-7细胞自噬,并且抑制AKT/mTOR信号通路。ATG3明显抑制了盐霉素诱导的细胞凋亡(P<0.01),且ATG3过表达组中促凋亡分子cleaved-caspase 3(P<0.01)和Bax表达明显减少(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多(P<0.05)。自噬的阻滞能够削弱ATG3对盐霉素诱导细胞凋亡的抑制作用。结论 ATG3可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬,并通过细胞自噬减少盐霉素诱导的细胞凋亡。综上提示诱发细胞自噬可能是乳腺癌细胞耐药的机制之一。
关键词
自噬相关基因3
慢病毒
细胞自噬
盐霉素
乳腺癌
Keywords
autophagy-related gene 3
lentivirus
autophagy
salinomycin
breast cancer
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
在线阅读
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职称材料
题名
F-box结构域参与FBXO39蛋白对MCF-7细胞增殖的调控
2
作者
李芳
刘罗根
黄果
戈欣
欧阳靖霖
章运生
机构
湖南环境生物职业技术学院化学教研室
南华大学附属第二医院临床研究所
湖南省乳甲疾病防治
临床
医学
研究
中心
南华大学
附属
第二
医院
超声医学科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1810-1818,共9页
基金
湖南省自然科学基金资助项目(No.2018JJ3462)
湖南省科技厅重点研发计划项目(No.2016WK2013)
+1 种基金
湖南省卫健委科研计划项目(No.B2019107)
湖南省教育厅优秀青年基金项目(No.18B278)
文摘
目的:探讨F-box结构域对FBXO39蛋白调控MCF-7细胞增殖的影响。方法:以MCF-7细胞cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增FBXO39基因的全长cDNA序列并克隆到真核表达载体pEGFP-C2;以pEGFP-FBXO39质粒为模板,构建pEGFP-FBXO39ΔF(F-box结构域缺失)质粒;将重组质粒转染MCF-7细胞后,Western blot验证FBXO39和FBXO39ΔF的表达水平;激光共聚焦显微镜观察FBXO39和FBXO39ΔF的亚细胞定位情况;免疫荧光检测内源性FBXO39在MCF-7细胞中的定位。MTT和EdU试剂盒检测MCF-7细胞的增殖情况;流式细胞术检测MCF-7细胞周期;免疫组化检测FBXO39在乳腺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果:本研究成功构建了pEGFP-FBXO39和pEGFP-FBXO39ΔF真核表达载体。F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有影响。FBXO39促进了MCF-7细胞的增殖,而FBXO39ΔF对MCF-7细胞增殖无明显影响。FBXO39高表达于乳腺癌组织。结论:F-box结构域对FBXO39蛋白的细胞定位没有产生明显影响,但对维持FBXO39的生物学作用至关重要。FBXO39可能与乳腺癌的发生相关。
关键词
F-box结构域
FBXO39蛋白
乳腺癌
细胞定位
细胞增殖
Keywords
F-box domain
FBXO39 protein
Breast cancer
Cellular localization
Cell proliferation
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
R730.23 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
自噬相关基因3过表达促进乳腺癌细胞自噬并抑制盐霉素诱导的细胞凋亡
李芳
黄果
彭平
刘瑶
李双辉
刘罗根
章运生
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
F-box结构域参与FBXO39蛋白对MCF-7细胞增殖的调控
李芳
刘罗根
黄果
戈欣
欧阳靖霖
章运生
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
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