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重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体 被引量:3
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作者 董巍檑 向花花 +4 位作者 彭华 龚咏晴 周晶 张宏全 郭紫芬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第2期139-141,147,共4页
目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段... 目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。 展开更多
关键词 EGFR基因 载体构建 宫颈癌 重叠PCR
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宫腔镜电切术联合子宫动脉栓塞治疗难治性胎盘残留的临床效果 被引量:5
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作者 廖文彦 杨春芬 +1 位作者 秦永喜 张慧明 《中国内镜杂志》 2019年第9期75-79,共5页
目的探讨宫腔镜电切术联合子宫动脉栓塞治疗产后难治性胎盘残留的临床效果。方法选取该院妇产科2017年8月-2018年8月收治的产后难治性胎盘残留患者50例。随机数字表法分为观察组25例和对照组25例。对照组给予米非司酮口服后常规清宫术治... 目的探讨宫腔镜电切术联合子宫动脉栓塞治疗产后难治性胎盘残留的临床效果。方法选取该院妇产科2017年8月-2018年8月收治的产后难治性胎盘残留患者50例。随机数字表法分为观察组25例和对照组25例。对照组给予米非司酮口服后常规清宫术治疗,观察组给予宫腔镜电切术联合子宫动脉栓塞治疗,将两组患者的治疗效果进行对比分析。结果观察组与对照组术中出血量分别为(12.52±3.49)和(38.00±6.12)ml,手术时间分别为(21.00±5.31)和(35.40±6.52)min,手术一次成功率分别为96.0%(24/25)和56.0%(14/25),术后阴道流血时间分别为(6.88±2.11)和(10.56±2.26)d,术后月经恢复时间分别为(30.20±2.84)和(40.32±4.48)d,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论宫腔镜电切术联合子宫动脉栓塞治疗产后难治性胎盘残留,具有出血少、手术一次成功率高和术后恢复好等优势,为临床治疗难治性胎盘残留提供了新思路,开拓了新视野。 展开更多
关键词 产后 胎盘残留 宫腔镜电切术 子宫动脉栓塞 临床效果
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重组Canstatin蛋白联合氟尿嘧啶治疗裸鼠结肠癌移植瘤的实验研究 被引量:4
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作者 马艳 王力 +1 位作者 焦东晓 王淑芬 《中国实用医药》 2008年第34期10-12,共3页
目的探讨血管生成抑制剂Canstatin与细胞毒药物氟尿嘧啶(5-FU)联合应用治疗结肠癌的效果,以期探索结肠癌治疗新途径。方法结肠癌SW-480细胞(1×107/只)注射到30只裸鼠皮下,建立结肠癌皮下移植瘤模型。当肿瘤长至2--3 mm时,随机... 目的探讨血管生成抑制剂Canstatin与细胞毒药物氟尿嘧啶(5-FU)联合应用治疗结肠癌的效果,以期探索结肠癌治疗新途径。方法结肠癌SW-480细胞(1×107/只)注射到30只裸鼠皮下,建立结肠癌皮下移植瘤模型。当肿瘤长至2--3 mm时,随机分6组。给药途径均为腹腔注射给药。治疗期间,定期用圆规和游标卡尺测量皮下移植瘤大小。疗程结束时,取下瘤体,常规病理切片,观察药物毒性反应,CD31免疫组化染色,检测肿瘤内微血管密度(MVD)。结果①各试验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤体质量明显低于对照组(P〈0.01)。5-FU+Canstatin组低、高浓度联合治疗组抑瘤作用较对照组明显增强(P〈0.05),其瘤重抑制率分别为74.76%和82.04%。②免疫组化:5-FU+Canstatin组低浓度组(22.6±3.6)和5-FU+Canstatin组高浓度组(15.0±2.8)治疗小鼠肿瘤组织内MVD显著低于对照组(36.4±5.6)和5-FU治疗组(31.2±4.0)(P〈0.05),而5-FU治疗组与对照组间差异无统计学意义;③不良反应:各实验组未观察到明显毒性反应。结论重组人Canstatin蛋白能有效抑制人结肠癌生长,无明显毒副作用,为结肠癌治疗提供了新的有力的治疗方法。 展开更多
关键词 结肠癌 血管生成 血管生成抑制剂 Canstatin蛋白
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不同剂量三氧化二砷单独及联合顺铂对人宫颈癌移植瘤的作用及机制 被引量:3
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作者 周曦 陈忠东 《中国医药科学》 2015年第1期44-47,共4页
目的探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3)与顺铂单独或合用对宫颈癌裸鼠移植瘤的疗效和毒副作用。方法取人宫颈癌细胞接种于裸鼠的皮下,建立裸鼠移植瘤模型,按照用药的不同分为观察组六组与对照组一组,对照组给予生理盐水用药;观察组六组... 目的探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3)与顺铂单独或合用对宫颈癌裸鼠移植瘤的疗效和毒副作用。方法取人宫颈癌细胞接种于裸鼠的皮下,建立裸鼠移植瘤模型,按照用药的不同分为观察组六组与对照组一组,对照组给予生理盐水用药;观察组六组分别给予三氧化二砷单独使用、顺铂单独使用及顺铂联合三氧化二砷使用;通过流式细胞仪检测细胞凋亡率、HE染色观察用药后的毒副作用。结果观察组各组的瘤质量及细胞的凋亡率显著优于对照组,结果具有统计学差异(P<0.05)。观察组各组药物治疗后出现一定程度上的白细胞降低,顺铂药物组出现骨髓抑制明显;其他血红蛋白、血小板值较对照组显著下降;用药后观察组裸鼠的血尿素氨水平、丙转氨酶值有所升高;顺铂药物组的肝肾损伤较为明显,与对照组相比数值显著升高。结论三氧化二砷联合顺铂治疗宫颈癌移植瘤,有效的促进了癌细胞的凋亡,增强了抑制癌细胞增殖的作用,促进了临床的治疗效果,临床效果显著,值得推广。 展开更多
关键词 宫颈癌移植瘤 三氧化二砷 顺铂 裸鼠
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突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化 被引量:2
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作者 龚咏晴 董巍檑 +3 位作者 陈方方 彭华 周晶 郭紫芬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第3期161-164,共4页
目的对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mt DNA)A1555G位点条件进行优化。方法利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的... 目的对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mt DNA)A1555G位点条件进行优化。方法利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mt DNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定最佳反应条件。结果分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6μmol/L,检测模板浓度为103~106copies/μL。结论确定了分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据。 展开更多
关键词 突变敏感性分子开关 氨基糖苷类耳聋 线粒体DNA 高保真聚合酶
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PCNA、Survivin蛋白在人绒癌细胞株BeWo合体化过程中表达变化的研究 被引量:1
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作者 易莉莎 林耀华 张国正 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2016年第1期9-12,共4页
目的:通过检测人绒癌细胞株Be Wo合体化过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化,探讨滋养细胞合体化后增殖性的变化,为恶性滋养细胞肿瘤,尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的临床治... 目的:通过检测人绒癌细胞株Be Wo合体化过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化,探讨滋养细胞合体化后增殖性的变化,为恶性滋养细胞肿瘤,尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的临床治疗提供新的思路和方法。方法:利用毛喉素(forskolin)诱导Be Wo细胞株融合;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测促融素(Syncytin)在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用蛋白质印迹(Western blotting)检测PCNA、Survivin蛋白在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用噻唑蓝比色分析实验(MTT)法检测forskolin作用不同时间的绒癌细胞株Be Wo的增殖能力。结果:1forskolin作用后的Be Wo细胞株Syncytin基因的表达增强,且随着forskolin作用时间的延长,Syncytin的表达更强,于48 h达到高峰。2forskolin作用后的Be Wo细胞株PCNA、Survivin蛋白的表达降低。3forskolin作用后的Be Wo细胞株的增殖能力下降,且不同作用时间的差异有统计学意义;forskolin作用的时间越长,Be Wo细胞株增殖能力下降越明显。结论:人绒癌细胞株Be Wo合体化后PCNA、Survivin蛋白的表达降低,说明人绒癌细胞株Be Wo合体化后增殖性降低,推测诱导滋养细胞合体化可能对临床治疗恶性滋养细胞肿瘤具有一定作用。 展开更多
关键词 增殖细胞核抗原 微管相关蛋白质类 福司柯林 细胞融合
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