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大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达
被引量：
19
1
作者
刘景晶
李晶
+1 位作者
吴梧桐
胡梅清
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第11期696-700,共5页
用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的...
用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。
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关键词
药物
大肠杆菌
天门冬酰胺酶
基因表达
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职称材料
人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究
被引量：
5
2
作者
徐蘅
裘奇
+1 位作者
胡梅清
魏涌
《生物化学杂志》
CSCD
1995年第2期210-213,共4页
经硫酸铵分级沉淀，离子交换层析和凝胶过滤等步骤，从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶，比活提高１２０倍，得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９８０，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３．原子吸...
经硫酸铵分级沉淀，离子交换层析和凝胶过滤等步骤，从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶，比活提高１２０倍，得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９８０，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３．原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子。等电聚焦显示该酶等电点为５．０．酶活力的最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。
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关键词
谷胱甘肽
过氧化物酶
人
肝
性质
提纯
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职称材料
题名
大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达
被引量：
19
1
作者
刘景晶
李晶
吴梧桐
胡梅清
机构
中国药科大学
生物
化学
教研室
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第11期696-700,共5页
文摘
用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。
关键词
药物
大肠杆菌
天门冬酰胺酶
基因表达
Keywords
E.coli
L-asparaginase Ⅱ gene
Expression
分类号
TQ464.8 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究
被引量：
5
2
作者
徐蘅
裘奇
胡梅清
魏涌
机构
南京铁道医学院生物化学教研室
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1995年第2期210-213,共4页
文摘
经硫酸铵分级沉淀，离子交换层析和凝胶过滤等步骤，从人肝中获得了ＰＡＧＥ单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶，比活提高１２０倍，得率为２５％。凝胶过滤法测得分子量为９０９８０，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定亚基分子量为２２４２３．原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子。等电聚焦显示该酶等电点为５．０．酶活力的最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。
关键词
谷胱甘肽
过氧化物酶
人
肝
性质
提纯
Keywords
Glutathione peroxidase
Human liver
Purification
Charicterization
分类号
Q554.603 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达
刘景晶
李晶
吴梧桐
胡梅清
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996
19
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职称材料
2
人肝谷胱甘肽过氧化物酶纯化及性质研究
徐蘅
裘奇
胡梅清
魏涌
《生物化学杂志》
CSCD
1995
5
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