含硒紫球藻胞外多糖的制备及对体内外肿瘤细胞生长的影响 被引量：9

1

作者 王敏 朱劲华 +2 位作者 马宇翔 张成武 李朝军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期23-27,共5页

采用在培养液中添加亚硒酸来实现藻对无机硒的富集和转化,制备一种含硒的紫球藻(Porphyridiumsp.)胞外多糖(Se-PSP);通过DAN荧光法测硒含量及红外光谱,对硒是否结合在多糖上进行了初步探讨;用四唑盐比色法(MTT)研究了不同浓度含硒的紫... 采用在培养液中添加亚硒酸来实现藻对无机硒的富集和转化,制备一种含硒的紫球藻(Porphyridiumsp.)胞外多糖(Se-PSP);通过DAN荧光法测硒含量及红外光谱,对硒是否结合在多糖上进行了初步探讨;用四唑盐比色法(MTT)研究了不同浓度含硒的紫球藻胞外多糖对3种体外肿瘤细胞生长的影响。通过建立荷瘤小鼠模型,研究了含硒多糖对腹水瘤S180的作用。结果表明含硒的胞外多糖含硒量约为0.015mg/g,40,80mg/LSe-PSP对3种肿瘤细胞SMMC7721、A549、A357均有一定程度的抑制作用,尤其是对SMMC7721抑制程度最为明显。荷瘤小鼠模型实验结果表明100mg/(kg.·d)Se-PSP可以延长荷瘤小鼠的生存时间,Se-PSP有可能成为一种抗肿瘤药物。 展开更多

关键词 紫球藻(Porphyridium sp.) 多糖 硒 抗肿瘤

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耐钙心肌细胞的分离及其L型钙通道电流观察 被引量：4

2

作者 赵卫红 吴宇澄 +2 位作者 王笑云 肖杭 余多慰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期21-23,共3页

目的:建立大鼠心肌细胞分离方法,用于膜片钳实验,并记录L型钙离子通道电流。方法:基于Langendorff逆行主动脉灌流模型,以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞,用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流。结果:在灌流所得50%存活单个... 目的:建立大鼠心肌细胞分离方法,用于膜片钳实验,并记录L型钙离子通道电流。方法:基于Langendorff逆行主动脉灌流模型,以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞,用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流。结果:在灌流所得50%存活单个心肌细胞中约70％为耐钙心肌细胞,并记录到典型的L型钙电流。结论:这种心肌细胞分离技术能获得大量具有正常电生理特性的耐钙心肌细胞,可用于心肌细胞离子通道和信号转导机制的研究。 展开更多

关键词 心肌细胞 L型钙通道电流 膜片钳 细胞分离 尿毒症 心肌病变

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吡咯喹啉醌对UVA诱导人皮肤成纤维细胞衰老的保护作用及机制研究 被引量：4

3

作者 张春丽 邹阳 +2 位作者 林金德 温传俊 沈干 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期337-341,共5页

目的:研究吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinine,PQQ)对UVA诱导人皮肤成纤维细胞衰老的保护作用及其机制。方法:体外使用6孔板培养人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF),予以9 J/cm2照射,照射前后实验组加入80 ng/ml的8-甲氧... 目的:研究吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinine,PQQ)对UVA诱导人皮肤成纤维细胞衰老的保护作用及其机制。方法:体外使用6孔板培养人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF),予以9 J/cm2照射,照射前后实验组加入80 ng/ml的8-甲氧基补骨脂(8-methoxypsoralan,8-MOP)和浓度为50、100、200 ng/ml的PQQ。UVA照射72 h后,对细胞进行衰老β-半乳糖苷酶染色、JC-1染色荧光显微镜检测线粒体膜电位变化、JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜去极化状况、real-time PCR检测衰老相关基因mmp1、mmp3的表达。结果:低剂量PQQ(50 ng/ml)实验组β-半乳糖苷酶染色呈阴性,JC-1染色后低剂量PQQ(50 ng/ml)实验组细胞线粒体膜电位改变的趋势有回转,JC-1染色后流式细胞仪检测PQQ对UVA诱导的衰老细胞线粒体去极化有保护作用,而且低剂量PQQ(50 ng/ml)实验组衰老相关基因mmp1、mmp3的表达也有明显降低。结论:吡咯喹啉醌对由UVA诱导的人皮肤成纤维细胞衰老有保护作用,而且这一作用可能是通过线粒体途径发挥作用的。 展开更多

关键词 吡咯喹啉醌 UVA照射 细胞衰老

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TIMP-1对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制 被引量：2

4

作者 郭仕英 袁俊 +5 位作者 沈曦 洪建军 温传俊 赵东红 张锡然 李朝军 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第1期83-87,共5页

构建含人组织金属蛋白酶抑制物TIMP1基因的表达载体 ,以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系1 BEL 740 2 ,研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响 .本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA ,通过RT PCR扩增获得TIMP1基因 ,并克隆到pcDNA6表... 构建含人组织金属蛋白酶抑制物TIMP1基因的表达载体 ,以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系1 BEL 740 2 ,研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响 .本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA ,通过RT PCR扩增获得TIMP1基因 ,并克隆到pcDNA6表达载体中 ,经酶切鉴定、序列测定结果正确后 ,转染人肝癌细胞系BEL 740 2 .采用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )、细胞生长曲线等方法 ,经数据统计分析发现 :TIMP1过表达能够抑制肝癌细胞BEL 740 展开更多

关键词 组织金属蛋白酶抑制物TIMP1 肝癌 MTT 生长曲线

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NRAGE基因甲基化调控其在乳腺癌细胞中的表达

5

作者 黄银华 黄修沦 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期89-95,共7页

目的:探讨人NRAGE(Neurotrophin receptor-interacting MAGE homologue)基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在乳腺癌细胞中的表达调控.方法:用Real-time PCR检测NRAGE在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中的表达;软件分析NRAGE启动子区是否存... 目的:探讨人NRAGE(Neurotrophin receptor-interacting MAGE homologue)基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在乳腺癌细胞中的表达调控.方法:用Real-time PCR检测NRAGE在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中的表达;软件分析NRAGE启动子区是否存在CpG岛;脱甲基化药物5-Aza-CdR处理MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,半定量RT-PCR法及Western blot法检测用药前后细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达的变化;MSP法检测MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中NRAGE基因的甲基化状态.结果:NRAGE启动子区存在CpG岛;MDA-MB-231细胞中NRAGE启动子区CpG岛高甲基化,mRNA本底表达水平较低,脱甲基化药物5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达水平明显上升;MCF-7细胞中NRAGE启动子区CpG岛未发生甲基化,mRNA本底表达水平比MDA-MB-231细胞高,5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达无明显变化.结论:NRAGE基因甲基化可以对其在乳腺癌细胞中的表达进行调控. 展开更多

关键词 NRAGE 表达调控 DNA甲基化

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PQQ对巨噬细胞炎症抑制及机制的初步研究 被引量：5

6

作者 刘海霞 蔡秀丽 +2 位作者 金冬 张广芹 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期133-137,143,共6页

探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子基因表达的影响及机制.培养RAW264.7细胞、BMDM细胞和THP-1细胞,分为对照组和实验处理组,用MTT方法检测PQQ对细胞增殖的影响,并分别用RT-qPCR和Western Blot检测各炎症因子的基因及蛋白... 探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子基因表达的影响及机制.培养RAW264.7细胞、BMDM细胞和THP-1细胞,分为对照组和实验处理组,用MTT方法检测PQQ对细胞增殖的影响,并分别用RT-qPCR和Western Blot检测各炎症因子的基因及蛋白表达情况.PQQ预处理能使LPS诱导的炎症因子表达量下降,并使P-P65蛋白表达下降,Nrf2蛋白表达增加.PQQ预处理降低细胞内炎症反应,这一过程可能通过增加Nrf2表达和抑制NF-κB表达而发挥作用. 展开更多

关键词 PQQ LPS 炎症因子 NRF2 NF-ΚB

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143抑制LPS诱导的细胞炎症反应 被引量：2

7

作者 张广芹 马梦娇 +1 位作者 于晓璐 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期95-101,共7页

机体异常炎症反应与各种疾病的发生息息相关.实验室通过前期工作,筛选出抗炎效果较好的化合物,并将其命名为143.通过LPS诱导RAW264.7细胞和BV2细胞作为炎症细胞模型,用不同浓度的143处理细胞,观察其抗炎效应.用MTS检测不同浓度143对细... 机体异常炎症反应与各种疾病的发生息息相关.实验室通过前期工作,筛选出抗炎效果较好的化合物,并将其命名为143.通过LPS诱导RAW264.7细胞和BV2细胞作为炎症细胞模型,用不同浓度的143处理细胞,观察其抗炎效应.用MTS检测不同浓度143对细胞活力的影响,NO试剂盒检测细胞培养上清NO含量的变化,Western blot检测NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白的表达情况.结果显示,143在浓度小于10μmol/L时对两种细胞活力没有影响;143在浓度为10μmol/L时能显著抑制细胞上清中NO的含量,并显著抑制细胞中炎症相关蛋白因子NF-κB p-p65、iNOS、COX-2的表达. 展开更多

关键词 143 炎症反应 INOS COX-2 NF-ΚB

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一种新的咪唑通过AMPK/mTOR途径诱导肿瘤细胞自噬 被引量：4

8

作者 马梦娇 金冬 +2 位作者 张广芹 于晓璐 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期115-121,共7页

自噬与肿瘤的发生有着密切的关系.通过防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累,自噬限制氧化应激、慢性组织损伤和致癌信号传导,抑制癌症的发生,这表明了自噬激活在癌症预防和治疗中的作用.研究发现一种新的咪唑,命名为NO.143.利用胰腺癌细胞... 自噬与肿瘤的发生有着密切的关系.通过防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累,自噬限制氧化应激、慢性组织损伤和致癌信号传导,抑制癌症的发生,这表明了自噬激活在癌症预防和治疗中的作用.研究发现一种新的咪唑,命名为NO.143.利用胰腺癌细胞PANC-1为模型,用MTS检测不同浓度NO.143对细胞活力的影响,共聚焦显微镜观察自噬荧光点,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、ATG13、p62的表达情况,以及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况.结果表明,NO.143呈现浓度依赖性地抑制肿瘤细胞的增殖.NO.143能够明显增加细胞中自噬荧光斑点、LC3B表达、ATG13的含量和p62的降解,表明NO.143能够显著上调肿瘤细胞的自噬.进一步研究显示,NO.143能够增加AMPKα的磷酸化水平,降低哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和S6的磷酸化水平.相反的,在抑制AMPKα活性后,这种现象发生逆转.这些结果都可能表明NO.143通过AMPK/mTOR信号传导途径诱导肿瘤自噬,抑制肿瘤细胞的增殖. 展开更多

关键词 NO.143 自噬 肿瘤 LC3B AMPK/mTOR

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利用酵母下脚料高效表达重组谷氨酰胺合成酶研究 被引量：2

9

作者 张正平 徐健红 殷志敏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第4期1360-1364,共5页

[目的]为了降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。[方法]利用酵母下脚料制得废酵母基来培养BL21(DE3)-pET28b-glnA,用乳糖诱导合成GS,并对诱导生长点、诱导浓度、诱导时间、添加碳源氮源以及所得GS的可溶性和酶活进行研究。[结果]酵母下脚... [目的]为了降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。[方法]利用酵母下脚料制得废酵母基来培养BL21(DE3)-pET28b-glnA,用乳糖诱导合成GS,并对诱导生长点、诱导浓度、诱导时间、添加碳源氮源以及所得GS的可溶性和酶活进行研究。[结果]酵母下脚料可以替代LB培养基诱导产生重组GS,其最佳诱导条件为:OD600=0.5,乳糖1 g/L诱导12 h;并不需要补加其他碳氮源,GS可溶性90%以上,催化Glu转化为Gln的转化率为94.5%。[结论]生产用高活性干酵母经过短期发酵后,酵母下脚料中的营养活性物质依然很丰富,可以用来培养大肠杆菌诱导目的蛋白表达,从而降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。 展开更多

关键词 谷氨酰胺合成酶 酵母下脚料 乳糖 谷氨酰胺

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酵母能量偶联酶法合成Gln体系的建立及条件优化研究 被引量：1

10

作者 贲培玲 郝佳瑛 +1 位作者 张正平 殷志敏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第10期4424-4426,共3页

[目的]建立酵母能量偶联体系合成谷氨酰胺并优化体系反应条件。[方法]利用酵母下脚料培养工程菌乳糖诱导所得的谷氨酰胺合成酶,与酵母糖酵解产生的ATP能量偶联,酶法合成谷氨酰胺,并优化反应体系中各组分,提高谷氨酰胺产量。[结果]2%甲... [目的]建立酵母能量偶联体系合成谷氨酰胺并优化体系反应条件。[方法]利用酵母下脚料培养工程菌乳糖诱导所得的谷氨酰胺合成酶,与酵母糖酵解产生的ATP能量偶联,酶法合成谷氨酰胺,并优化反应体系中各组分,提高谷氨酰胺产量。[结果]2%甲苯预处理干酵母;反应体系各组分的终浓度分别是NH4+100 mmol/L,Glu200 mmol/L,磷酸盐100 mmol/L,Mn2+10 mmol/L,Mg2+不另加;谷氨酸转化率达94.5%,谷氨酰胺产量为27.6 g/L。[结论]成功建立酵母能量偶联酶法合成谷氨酰胺体系,并对反应体系进行放大和初步优化,为酶法合成谷氨酰胺的工业化进程奠定了基础。 展开更多

关键词 谷氨酰胺合成酶 反应体系 建立 优化

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茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计 被引量：7

11

作者 赵丽 杨洋 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期83-88,共6页

本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释... 本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点. 展开更多

关键词 茎-环RT-PCR miRNA-421 引物设计

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人NRAGE基因启动子转录活性的初步研究

12

作者 吴寅子 张丽 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期90-94,共5页

利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点,并根据这些位点利用PCR技术克隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体,分别插入Luciferase报告载体pGL3-Basic载体中,构成8种缺失突变体的报告基因表达载体.通过双荧光素酶体系检... 利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点,并根据这些位点利用PCR技术克隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体,分别插入Luciferase报告载体pGL3-Basic载体中,构成8种缺失突变体的报告基因表达载体.通过双荧光素酶体系检测在HEK-293细胞中NRAGE启动子不同区域的转录活性,从而确定起主要作用的启动子区域.结果发现NRAGE基因转录起始位点上游-300 bp到-100 bp的区域起到主要的转录调控作用. 展开更多

关键词 NRAGE 双荧光素酶法 缺失突变 转录活性

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