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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定
被引量：
3
1
作者
郝淮杰
郑玉玲
+2 位作者
余多慰
马茹
姜永强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期269-272,共4页
目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hip...
目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。
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关键词
单链二硫键稳定抗体
产量
超抗原
SEA(D227A)
稳定性
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职称材料
题名
单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定
被引量：
3
1
作者
郝淮杰
郑玉玲
余多慰
马茹
姜永强
机构
南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室
军事医学
科学
院微
生物
流行病研究所病原微
生物
生物
安全国家重点
实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期269-272,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30171091
30271478)
文摘
目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。
关键词
单链二硫键稳定抗体
产量
超抗原
SEA(D227A)
稳定性
Keywords
single-chain disulfide-stabilized Fv
yield
superantigen
SEA(D227A)
stability
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定
郝淮杰
郑玉玲
余多慰
马茹
姜永强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
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