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镉诱导HEK293细胞自噬和凋亡
被引量：
3
1
作者
刘宣宣
王文倩
毛伟平
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期569-575,共7页
目的探究镉(二氯化镉,Cd Cl2)能否诱导HEK293细胞自噬与凋亡以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法将绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)重组质粒转染至HEK293细胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol...
目的探究镉(二氯化镉,Cd Cl2)能否诱导HEK293细胞自噬与凋亡以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法将绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)重组质粒转染至HEK293细胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导细胞12 h,荧光显微镜观察自噬情况;以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导未转染GFP-LC3B重组质粒的HEK293细胞12 h,透射电子显微镜下观察自噬泡;Western蛋白印迹检测LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达变化,以及ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化表达;流式细胞仪检测Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))对HEK293细胞凋亡的影响。用3-MA(自噬抑制剂)预处理Cd Cl210μmol·L^(-1)诱导的HEK293细胞12 h,Western蛋白印迹检测细胞内激活型胱天蛋白酶3的表达。结果 Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导HEK293细胞12 h,荧光显微镜下转染细胞出现绿色荧光点状聚集,电镜下观察到自噬泡,Western蛋白印迹检测到LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加(P<0.05,P<0.01),ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平均增加(P<0.05,P<0.01)。流式细胞仪检测出Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导的HEK293细胞发生了细胞凋亡;加入3-MA20μmol·L^(-1)+Cd Cl210μmol·L^(-1)后,细胞自噬被抑制,激活型胱天蛋白酶3表达增加(P<0.01)。结论低浓度Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))能引起细胞自噬,可能通过ERK1/2和AKT蛋白介导细胞自噬;自噬与凋亡相伴发生,自噬可能抑制凋亡。
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关键词
镉
HEK293细胞
自噬
细胞凋亡
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职称材料
pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
2
作者
刘宣宣
王文倩
+3 位作者
毛伟平
严浩
孟素芳
王芳
《安徽农业科学》
CAS
2015年第6期82-84,97,共4页
[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接...
[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。
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关键词
HEK293
CELLS
LC3B
pcDNA3.1-GFP
真核表达
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职称材料
题名
镉诱导HEK293细胞自噬和凋亡
被引量：
3
1
作者
刘宣宣
王文倩
毛伟平
机构
南京
医科
大学
康达学院生理学教研室
南京师范大学江苏省分子医学实验室
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期569-575,共7页
文摘
目的探究镉(二氯化镉,Cd Cl2)能否诱导HEK293细胞自噬与凋亡以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法将绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)重组质粒转染至HEK293细胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导细胞12 h,荧光显微镜观察自噬情况;以Cd Cl22,4,8和10μmol·L^(-1)诱导未转染GFP-LC3B重组质粒的HEK293细胞12 h,透射电子显微镜下观察自噬泡;Western蛋白印迹检测LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达变化,以及ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化表达;流式细胞仪检测Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))对HEK293细胞凋亡的影响。用3-MA(自噬抑制剂)预处理Cd Cl210μmol·L^(-1)诱导的HEK293细胞12 h,Western蛋白印迹检测细胞内激活型胱天蛋白酶3的表达。结果 Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导HEK293细胞12 h,荧光显微镜下转染细胞出现绿色荧光点状聚集,电镜下观察到自噬泡,Western蛋白印迹检测到LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加(P<0.05,P<0.01),ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平均增加(P<0.05,P<0.01)。流式细胞仪检测出Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))诱导的HEK293细胞发生了细胞凋亡;加入3-MA20μmol·L^(-1)+Cd Cl210μmol·L^(-1)后,细胞自噬被抑制,激活型胱天蛋白酶3表达增加(P<0.01)。结论低浓度Cd Cl2(≤10μmol·L^(-1))能引起细胞自噬,可能通过ERK1/2和AKT蛋白介导细胞自噬;自噬与凋亡相伴发生,自噬可能抑制凋亡。
关键词
镉
HEK293细胞
自噬
细胞凋亡
Keywords
cadmium
HEK293 cells
autophagy
apoptosis
分类号
R114 [医药卫生—卫生毒理学]
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职称材料
题名
pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
2
作者
刘宣宣
王文倩
毛伟平
严浩
孟素芳
王芳
机构
南京
医科
大学
康达学院生理学教研室
南京师范大学江苏省分子医学实验室
出处
《安徽农业科学》
CAS
2015年第6期82-84,97,共4页
文摘
[目的]构建含GFP-LC3B基因的真核表达载体。[方法]从HEK293细胞中提取总RNA,以反转录得到c DNA为模板,根据Gen Bank公布的人源LC3B基因序列设计引物,通过PCR方式扩增目的基因,将基因和pc DNA3.1-GFP载体双酶切后,通过T4连接酶将基因连接到pc DNA3.1-GFP载体上,得到pc DNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体。[结果]扩增出目的基因,构建了含目的基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B。[结论]成功构建了含有人LC3B基因的真核表达载体pc DNA3.1-GFP-LC3B,为研究细胞自噬提供了基础。
关键词
HEK293
CELLS
LC3B
pcDNA3.1-GFP
真核表达
Keywords
HEK293 cells
LC3B
pc DNA3.1-GFP
Eukaryotic expression
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
镉诱导HEK293细胞自噬和凋亡
刘宣宣
王文倩
毛伟平
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建
刘宣宣
王文倩
毛伟平
严浩
孟素芳
王芳
《安徽农业科学》
CAS
2015
0
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