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猪链球菌毒力因子和鉴定方法的研究进展 被引量:29
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作者 赵华梅 潘秀珍 唐家琪 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期77-80,共4页
猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原体,能够引起猪疫病,人类感染该菌可导致脑膜炎、败血症甚至死亡。鉴于其对养猪业的巨大经济影响和对公共卫生事业的威胁,关于猪链球菌的研究日益深入,即对其毒力相关蛋白和鉴定... 猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原体,能够引起猪疫病,人类感染该菌可导致脑膜炎、败血症甚至死亡。鉴于其对养猪业的巨大经济影响和对公共卫生事业的威胁,关于猪链球菌的研究日益深入,即对其毒力相关蛋白和鉴定方法的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 猪链球菌 猪链球菌病 毒力因子 分子鉴定法
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乳酸乳球菌电转化方法的优化 被引量:6
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作者 于建宁 宋小敬 +4 位作者 王公金 潘伟芹 徐小波 于峰祥 李燕 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第8期34-36,共3页
乳酸菌转化效率不高是制约其广泛应用的关键因素。为建立乳酸乳球菌的高效电转化方法,主要从电压、电阻、细菌生长时期及电击缓冲液等影响电转化的因素入手,根据每微克DNA获得的转化子的多少,评价乳酸乳球菌的电转化效率。结果显示:当... 乳酸菌转化效率不高是制约其广泛应用的关键因素。为建立乳酸乳球菌的高效电转化方法,主要从电压、电阻、细菌生长时期及电击缓冲液等影响电转化的因素入手,根据每微克DNA获得的转化子的多少,评价乳酸乳球菌的电转化效率。结果显示:当电压为2.0 kV、电阻为400Ω、细菌处于对数生长中期、电击缓冲液为磷酸缓冲液时,电击乳酸乳球菌MG1363的转化效率最高,为1 300个/μg。表明通过优化电转化参数,可以提高乳酸乳球菌的转化效率,为拓展乳酸乳球菌的应用范围奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 电转化 电压 电阻 生长时期 电击缓冲液
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SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达 被引量:2
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作者 潘伟芹 于建宁 +3 位作者 王公金 徐小波 于峰祥 李燕 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期131-134,共4页
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连... 为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到。因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。 展开更多
关键词 SQR pMG36e 乳酸菌 重组载体
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抗Rh(D)血型抗体制备的研究进展 被引量:2
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作者 岳建华 潘秀珍 唐家琪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期46-48,共3页
关键词 D抗原 抗Rh(D)抗体 EB病毒转化 基因工程抗体
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SQR基因在Nisin抗性乳酸乳球菌中的表达
5
作者 于建宁 潘伟芹 +3 位作者 王公金 徐小波 李燕 于峰祥 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期156-161,共6页
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pLEB590-SQR的构建及其在乳酸乳球菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切载体pLEB590与目的片段SQR,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过电转化法转化到乳酸菌中,提取所... 为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pLEB590-SQR的构建及其在乳酸乳球菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切载体pLEB590与目的片段SQR,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过电转化法转化到乳酸菌中,提取所得到的乳酸乳球菌质粒pLEB590-SQR进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸乳球菌MG1363中,在含有Nisin(乳酸链球菌素)的选择培养基中筛选阳性克隆,采用SDS-PAGE电泳和Western杂交检测SQR蛋白质的表达情况。最后检测重组质粒在MG1363中的遗传稳定性。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pLEB590-SQR构建成功,从MG1363中成功检测到目的蛋白质SQR的表达,携带pLEB590-SQR的MG1363遗传稳定性达90%以上。乳酸乳球菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。 展开更多
关键词 SQR基因 pLEB590 乳酸菌 重组载体
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脂质体转染对小鼠肠上皮细胞的影响
6
作者 李燕 时小艳 +5 位作者 于建宁 王公金 徐小波 陈哲 于峰祥 潘伟芹 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期213-216,共4页
小鼠肠上皮细胞(IEC)是一种快速更新的细胞,脂质体转染法是哺乳动物细胞转基因常用的转染方法。以IEC为研究对象,从转染前后细胞形态、细胞周期及染色体倍性等方面的变化研究脂质体转染对IEC的影响。结果显示,脂质体转染后形态不正常的... 小鼠肠上皮细胞(IEC)是一种快速更新的细胞,脂质体转染法是哺乳动物细胞转基因常用的转染方法。以IEC为研究对象,从转染前后细胞形态、细胞周期及染色体倍性等方面的变化研究脂质体转染对IEC的影响。结果显示,脂质体转染后形态不正常的细胞增多;细胞周期中G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),以3代的细胞转染为例,由对照的62.4%增加到73.4%;S期同转染前相比显著降低(P<0.05),由20.4%降低至13.2%;然而从染色体倍性看,统计分析表明转染前后没有显著差异。从以上几个方面可以看出,脂质体转染对IEC产生了一定的负面影响。 展开更多
关键词 脂质体 IEC 细胞形态 细胞周期 染色体倍性
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硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因真核表达载体的构建及表达
7
作者 于峰祥 于建宁 +5 位作者 王公金 潘伟芹 徐小波 徐志伟 花卫华 刘泉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期1043-1046,共4页
探讨SQR基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc的构建及其在真核细胞中的表达。根据已知荚膜红杆菌SQR基因序列设计5'端和3'端引物,采用PCR方法获得SQR基因,通过pMD-18T载体构建得到中间质粒pMD-18T-SQR-Myc;采用限制性内切酶Xh... 探讨SQR基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc的构建及其在真核细胞中的表达。根据已知荚膜红杆菌SQR基因序列设计5'端和3'端引物,采用PCR方法获得SQR基因,通过pMD-18T载体构建得到中间质粒pMD-18T-SQR-Myc;采用限制性内切酶XhoⅠ和KpnⅠ双酶切该中间质粒,将SQR基因插入真核表达载体pcD-NA3.1(-)相应酶切位点,获得重组质粒pcDNA3.1(-)-SQR-Myc;采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞并进行West-ern blot蛋白鉴定。结果显示:该研究已成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc,质粒测序及酶切结果完全正确,并且SQR能够在HEK293细胞系中正常表达。 展开更多
关键词 硫化物醌氧化还原酶 重组质粒 真核表达
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